用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法与流程

1.本发明实施例涉及生物医药领域，特别涉及用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法。


背景技术：

2.制备抗血清时，由于免疫原不纯，制得的抗血清中常含有杂蛋白，即使使用高纯化的抗原免疫动物，制得的抗血清的纯度也不能满足要求。例如用高度纯化的igg免疫动物，制备的抗体不可避免地含有抗γ重链的抗体、抗κ轻链和抗λ轻链的抗体。
3.现有技术中，主要采用盐析沉淀法、离子交换层析法和亲和层析法纯化抗血清。盐析沉淀法虽经济实惠，但除杂效果有限，制备的抗血清纯度不够。离子交换层析法利用抗体蛋白和杂蛋白的酸碱性不同，与deae纤维素亲和能力不同将抗体蛋白和杂蛋白分离，该方法得到的抗血清纯度高于盐析沉淀法，但不具有特异性，一些酸碱性和抗体蛋白相近的杂蛋白无法很好的分离。亲和层析法固定相需要用高纯抗原偶连层析柱填料，抗血清过柱后可除去未结合的杂蛋白，该方法虽特异性好，但由于高纯特异性抗原柱填料价格昂贵，大量制备纯化的抗体需要大量的特异性抗原，成本极高，不适宜大规模制备高纯度抗体。
4.因此，本领域急需开发一种纯化效果好且经济实惠的获得纯化抗体的方法，以满足低成本大规模制备高纯度抗体的需求。


技术实现要素：

5.本发明实施方式的目的在于提供一种用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂，其制造成本低、纯化效果好并且可重复使用；本发明实施方式的另一目的在于提供一种获得纯化的抗体的方法，使得低成本大规模制备高纯度抗体的需求得以满足。
6.为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供了一种固相亲和吸附剂，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：用生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清。
7.在一些优选的方案中，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子发生交联的反应性末端；更优选地，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子上的氨基、羧基和/或巯基发生交联的反应性末端；进一步优选地，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基、亚胺基或酰胺基；进一步优选地，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基。
8.在一些更优选的方案中，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于1的整数；更优选地，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于1且不大
于10的整数；更优选地，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于3且不大于6的整数；最优选地，所述生物分子交联剂为1,5
‑
戊二醛。
9.在一些优选的方案中，所述不含特定蛋白的人全血清可由下述方法获得：使人全血清通过固定相连接有抗特定蛋白抗体的层析柱，收集流川液即得不含特定蛋白的人全血清。例如例如不含igm的人全血清可通过使人全血清通过固定相连接有抗人igm抗体的层析柱，收集流川液即得不含igm的人全血清。
10.在一些优选的方案中，所述固定相连接有抗特定蛋白抗体的层析柱，由抗特定蛋白抗体偶连经活化的琼脂糖凝胶柱获得。例如：所述固定相连接有抗人igm抗体的层析柱优选由抗人igm抗体偶联brcn活化的琼脂糖cl
‑
4b凝胶获得。
11.在一些优选的方案中，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：
12.步骤(1)，在搅拌条件下，在所述不含特定蛋白的人全血清中滴加所述生物分子交联剂，后持续搅拌5～30分钟，即得所述固相亲和吸附剂。
13.步骤(1)中，所述持续搅拌的时间优选为10～20分钟，例如15分钟；
14.步骤(1)中，所述生物分子交联剂为质量百分含量优选为15～40％的1,5
‑
戊二醛溶液，更优选为20～30％的1,5
‑
戊二醛溶液，例如：质量百分含量为25％的1,5
‑
戊二醛溶液；
15.步骤(1)中，所述不含特定蛋白的人全血清和所述生物分子交联剂的体积比优选为(10～300):1，更优选为(50～200):1，最优选为(80～150):1，例如100:1。
16.在一些优选的方案中，步骤(1)后还包括：
17.步骤(2)，用磷酸缓冲溶液洗涤步骤(1)所得的固相亲和吸附剂。
18.步骤(2)中，所述磷酸缓冲溶液的浓度优选为(0.005～0.05)mol/l，更优选为(0.01～0.03)mol/l，例如：0.02mol/l；
19.步骤(2)中，所述洗涤的次数优选为2～5次，例如3次；
20.在一些优选的方案中，步骤(2)后还包括：
21.步骤(3)，将磷酸缓冲溶液洗涤后所得的固相亲和吸附剂研磨成颗粒或匀浆。
22.本发明的实施方式还提供了一种获得纯化的抗体的方法，所述方法包括：步骤(a)，将待纯化的抗血清先用固相亲和吸附剂和辛酸中的一种处理，去除沉淀所得液体再用固相亲和吸附剂和辛酸中的另一种处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理，收集所得沉淀溶解后透析，即得所述纯化的抗体。
23.具体地，所述步骤(a)为将待纯化的抗血清用所述固相亲和吸附剂处理，去除沉淀所得液体用辛酸处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理收集沉淀，将所得沉淀沉解后进行透析，即得所述纯化的抗体；或者，所述步骤(a)为将待纯化的抗血清用辛酸处理，去除沉淀所得液体用所述固相亲和吸附剂处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理收集沉淀，将所得沉淀沉淀溶解后进行透析，即得所述纯化的抗体。
24.在一些优选的方案中，所述待纯化的抗血清为羊抗血清、兔抗血清、鼠抗血清、马抗血清、鸡抗血清、猴抗血清或豚鼠抗血清，更优选为羊抗血清、兔抗血清或鼠抗血清，所述待纯化的抗血清可以通过市售渠道购买获得，或者用本领域技术人员已知的方法，通过免
疫级纯度的抗原免疫动物，经效价检验合格后进行采血，分离即得所述待纯化的抗血清。
25.步骤(a)中，所述固相亲和吸附剂和所述待纯化的抗血清优选的使用体积比为1：(2～8)，所述固相亲和吸附剂和所述待纯化的抗血清更优选的使用体积比为1：(3～6)，例如：所述固相亲和吸附剂和所述待纯化的抗血清以体积比为1：(3～6)的比例混合。
26.步骤(a)中，所述反应优选为水浴反应；所述水浴反应的温度优选为30～40℃，例如：37℃；所述水浴反应的时间优选为20～40分钟，例如30分钟；
27.步骤(a)中，所述去除沉淀的方式优选为离心；所述离心的转速优选为4000rpm/分钟；所述离心的时间优选为10～40分钟，例如30分钟。
28.步骤(a)中，所述硫酸铵优选为饱和硫酸铵溶液；
29.在一些优选的方案中，将所述沉淀先用酸性缓冲液洗涤后用磷酸缓冲液洗涤，即得去除杂蛋白的固相亲和吸附剂，所述去除杂蛋白的固相亲和吸附剂可重复用于获得纯化的抗体。所述酸性缓冲液优选为柠檬酸缓冲液或甘氨酸缓冲液，更优选为20mol/l柠檬酸缓冲液或ph2.4的甘氨酸缓冲液。
30.如本文所用，术语“生物分子交联剂”为至少具有两个针对氨基、羧基和/或巯基的反应性末端的，可与其他生物分子发生共价结合产生交联的化合物。术语“生物分子交联剂”和“双功能试剂”可互换使用。
31.如本文所用，“不含特定蛋白的人全血清”为去除特定蛋白的人全血清，所述特定蛋白可以为人血清中的任一种蛋白，非限制地例如igm、lgg或c4。所述“不含特定蛋白的人全血清”可由市售渠道购买获得。
32.在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
33.本发明所用试剂和原料均市售可得。
34.本发明实施方式相对于现有技术而言，至少具备下述优点：
35.(1)本发明提供的固相亲和吸附剂与亲和层析色谱中的特异性原相比制造成本低、纯化效果好。
36.(2)本发明提供的固相亲和吸附剂可重复使用，并且多次重复使用仍可保持较高的纯化效果。
37.(3)本发明提供的固相获得纯化的抗体的方法成本较低，有利于满足大规模制备高纯度抗体的需求。
附图说明
38.一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。
39.图1是根据本发明实施例四中琼脂糖凝胶免疫电泳检测结果示意图。
具体实施方式
40.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细
节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请所要求保护的技术方案。
41.本发明通过上述固相亲和吸附剂与待纯化的抗血清混合，所述固相亲和吸附剂由生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清制备获得，待纯化的抗血清与所述固相亲和吸附剂混合的过程中，通过亲和吸附效应，待纯化的血清中除抗特定蛋白抗体以外的杂抗体均与固相亲和吸附剂发生特异性结合而吸附在固相亲和吸附剂上形成沉淀，而所述抗体因未与固相亲和吸附剂结合仍以溶液的形式存在，因此去除沉淀即得纯化的抗体(抗特定蛋白抗体)。该方法相比亲和层析法制备纯化的抗体，因只需要首先通过制备少量固相亲和吸附剂获得纯化的抗体，即可使用所制备的纯化的抗体作为抗特定蛋白抗体再次制备更多的固相亲和吸附剂，故重复此操作即可获得大量可用于纯化抗血清获得纯化的抗体的固相亲和吸附剂，用于纯化大量抗血清获得纯化的抗体。由于这种方式避免使用大量高纯特异性抗原柱填料而可以降低成本，有利于满足大规模制备高纯度抗体的需求。
42.应理解，本发明所述方法中，所述“特定蛋白”和所述“纯化的抗体”存在对应关系，例如：如需获得纯化的igm抗体，即需用生物分子交联剂处理不含igm的人全血清，获得相应的固相亲和吸附剂，再使用所制备的固相亲和吸附剂处理待纯化的抗人igm血清，获得纯化的igm抗体。
43.应理解，本发明所述方法中，所述“纯化的抗体”和“抗特定蛋白抗体”均为“特定蛋白”的特异性免疫产物，二者生物学意义相同。
44.实施例一、不含igm的人全血清的制备
45.色谱柱制备
46.称取brcn活化的sepharose cl
‑
4b填料粉末于烧杯中，用1mm hcl溶解、抽洗，再用0.1m nahco3，ph为8.3含0.5m nacl溶液抽洗，改变填料缓冲体系。每1克4b粉末接5*3.5～10*3.5mg igm抗体(5
‑
10g/l)，用玻璃棒搅匀，室温放置1小时。用不少于5倍填料体积的缓冲液0.1m nahco3，ph为8.3含0.5m nacl，抽洗去剩余的未偶联igm抗体。再用大约3倍填料体积的0.1m tris_hcl ph为8.0或1m乙醇胺ph为8.0溶液，封闭2小时，封闭填料多余位点。用下列缓冲液反复抽洗3次，每次抽洗5倍反应体积，先用0.1m醋酸缓冲液ph为4.0含0.5m nacl抽洗，然后用0.1m tris_hcl ph为8.0含0.5m nacl抽洗，完成后再用2～3倍填料体积的磷酸缓冲液抽洗，改变填料缓冲体系。将填料混匀缓缓倒入柱子，等填料自然沉降，并连接管路。用3倍以上柱体积的磷酸缓冲液平衡柱子，让填料达到上样ph环境。
47.人全血清去除igm
48.将健康人全血清加入到上步制备的色谱柱中，待上样体积达到0.9倍柱体积时收集流川液，经测量，流川液中igm含量低于0.05g/l，此流川液即为不含igm的人全血清。后用ph2.4的甘氨酸缓冲液解离色谱柱上结合的蛋白。再用磷酸缓冲液平衡3个柱体积待用。
49.实施例二、固相亲和吸附剂的制备
50.取不含igm的人全血清溶液20ml，在磁力搅拌器搅拌的条件下，用移液枪逐滴加入200μl浓度为质量百分含量为25％的1,5
‑
戊二醛溶液，随着1,5
‑
戊二醛的加入，溶液逐渐变白，变稠，磁力搅拌变得困难。搅拌15分钟后，即获得固相亲和吸附剂。取出磁力搅拌子，加入60ml浓度为0.02mol/l的磷酸缓冲液，用玻璃棒搅拌3分钟，倾倒去除磷酸缓冲液，再重复两次清洗，将清洗之后的固相亲和吸附剂用研钵研磨成颗粒或匀浆。
51.表1中，制备固相亲和吸附剂的方法大致相同，不同在于取不含igm的人全血清溶
液和浓度为25％的1,5
‑
戊二醛溶液的体积不同，具体如下表1：
52.表1
53.组别不含igm的人全血清溶液25％的1,5
‑
戊二醛溶液120ml50μl220ml100μl320ml200μl420ml400μl
54.观察各组混合液交联情况，组1和组2中，混合液未凝固，组3和组4出现凝固，其中组4出现过度硬化的现象。因此，使用组3中制备的固相亲和吸附剂进行下述实施例三的实验。
55.实施例三、固相亲和吸附剂纯化羊抗人igm血清获得纯化的igm抗体
56.本实施例中所用的羊抗人igm血清购自嘉兴市韩硕生态农业有限公司。
57.取1ml研磨后的固相亲和吸附剂加入到4ml待纯化的羊抗人igm血清中，37℃水浴反应30分钟，待反应结束后，4000rpm/分钟的转速离心15分钟，离心的沉淀为固相亲和吸附剂和杂抗体的免疫复合物，分离沉淀获得液体，所得液体加入其2倍体积的ph 4.0,60mmol/l的乙酸缓冲液稀释，调节ph至4.8。以稀释后液体总量4％的添加量缓慢滴加正辛酸，室温下搅拌30分钟，5000rpm离心20分钟，取出上清液。将上清液滴加入等体积饱和硫酸铵溶液中，室温搅拌30分钟，4℃放置过夜后将沉淀取出，4000rpm离心30分钟，弃去上清，沉淀用适量磷酸缓冲液溶解。将溶解的沉淀用磷酸缓冲液透析，定期更换透析液3次。即为纯化的igm抗体。
58.本实施例中，也可先利用辛酸沉淀羊抗人igm血清中的白蛋白等杂蛋白，再用固相亲和吸附去除羊抗人igm血清中的杂抗体，最后加入饱和硫酸铵沉淀抗体蛋白，将沉淀的抗体蛋白溶解透析后即为纯化的igm抗体。具体操作为：取待纯化的羊抗人igm血清，加入两倍其体积的ph 4.0,60mmol/l的乙酸缓冲液，调节ph至4.8，以稀释后液体总量4％的添加量缓慢滴加正辛酸，室温下搅拌30分钟，5000rpm离心20分钟，取出上清液。取1ml研磨后的固相亲和吸附剂加入到4ml所得上清液中，37℃水浴反应30分钟，待反应结束后，4000rpm/分钟的转速离心15分钟，离心的沉淀为固相亲和吸附剂和杂抗体的免疫复合物，分离沉淀获得上清液，上清液滴加入等体积饱和硫酸铵溶液中，室温搅拌30分钟，4℃放置过夜后将沉淀取出，4000rpm离心30分钟，弃去上清，沉淀用适量磷酸缓冲液溶解。将溶解的沉淀用磷酸缓冲液透析，定期更换透析液3次。即为纯化的igm抗体。
59.对比例一
60.量取抗血清加入2倍体积的ph 4.0,60mmol/l的乙酸缓冲液，调节ph至4.8。以稀释后抗血清总量4％的添加量缓慢滴加正辛酸，室温下搅拌30分钟。5000rpm离心20分钟，取出上清。将上清滴加入等体积饱和硫酸铵溶液，室温搅拌30分钟，4℃放置过夜后将沉淀取出，4000rpm离心30分钟，弃去上清，沉淀用适量磷酸缓冲液溶解。将溶解的沉淀用磷酸缓冲液透析，定期更换透析液3次。即为纯化的igm抗体。
61.实施例四、免疫电泳纯度分析
62.分别取未经处理的羊抗人igm血清、对比例1纯化所得的抗体和本发明实施例三中离心所得的上清液进行琼脂糖凝胶免疫电泳检测，结果见图1。
63.将洁净玻璃片置于水平台面，用移液管吸取4
‑
5ml熔化的1％琼脂糖加于玻璃片上，待冷凝，打孔及开槽后制成琼脂糖板，用移液枪吸取10μl正常人血清与小孔中，以0.05mol/l ph为8.6的巴比妥缓冲液为电泳缓冲液，将加样后的琼脂糖板置于电泳槽上，样品孔靠近阴极段，用缓冲液浸湿的双层纱布搭桥电泳。以100v电泳1小时。取出电泳后的琼脂糖平板，挑出中间槽内的琼脂糖，取100μl抗血清(抗体)充满槽内。将琼脂糖板放于湿盒内，水平置于37℃恒温培养箱中进行双扩散，24小时观察结果。
64.如图1所示，条带1为未经处理的羊抗人igm血清琼脂糖凝胶免疫电泳检测结果，可见杂带较多，表明内含杂蛋白体较多。
65.条带2为对比例1纯化所得的羊抗人igm血清琼脂糖凝胶免疫电泳检测结果，可见杂带虽然相比未经处理的羊抗人igm血清有所减少，但依然清晰可见，表明内含杂蛋白体依然较多。
66.条带3为经本发明实施例三中离心所得的上清液琼脂糖凝胶免疫电泳检测结果，可见主带清晰，无杂带，表明本发明所述的获得纯化的抗体的方法所得的抗体纯度很高。
67.综上，本发明所述的获得纯化的抗体的方法所得的抗体纯度显著优于对比例1纯化所得的抗体。
68.实施例五、抗体评价
69.本实施例所用igm免疫比浊试剂盒购自上海捷门生物技术有限公司。
70.(1)使用本发明所述方法纯化羊抗人igm血清，获得的纯化的igm抗体作为实验组r2试剂，测定随机人全血清中igm含量。
71.对照组：取igm免疫比浊试剂盒(液体双试剂)，按照试剂盒说明书方法设置参数，定标准曲线，作为对照组。
72.实验组：按照与对照组同样的方法，取未经处理的羊抗人igm血清，按照本发明所述方法进行纯化，所得纯化的igm抗体稀释xx倍作为下述实验组r2试剂，与对照组相同的参数定标准曲线。
73.随机取未经处理的人全血清8组，使用上述使用日立生化分析仪测定人全血清中igm含量，结果见下表2。
74.(2)使用未经处理的羊抗人igm血清作为实验组r2试剂，测定随机人全血清中igm含量。
75.对照组：取igm免疫比浊试剂盒(液体双试剂)，按照试剂盒说明书方法设置参数，定标准曲线，作为对照组。
76.实验组：按照与对照组同样的方法，取未经处理的羊抗人igm血清直接稀释xx倍作为下述实验组r2试剂，与对照组相同的参数定标准曲线。
77.随机取未经处理的人全血清8组，使用上述使用日立生化分析仪测定人全血清中igm含量，结果见下表3。
78.由于羊抗人igm血清样中杂抗越多，则样本的浊度越高，导致吸光度偏离原标准曲线。因此可通过测定随机血清中igm含量相比对照组(标准纯igm抗体)的偏离度来判断抗体的纯度。测试结果见表2和表3。
79.表2
[0080][0081][0082]
表3
[0083][0084]
从上表2和表3中所得的数据可看出，使用未经处理的羊抗人igm血清作为r2试剂，测定随机人全血清样本中igm含量，所得人全血清中igm含量相比对照组偏离度较大，而使用本发明所述方法纯化羊抗人igm血清后作为r2试剂，测定随机人全血清样本中igm含量，所得人全血清中igm含量相比对照组偏离度大幅下降(≤
±
2.5％)。结果证明，羊抗人igm血清经本发明所述方法纯化后，其杂蛋白含量明显降低，所得igm抗体接近纯净。
[0085]
实施例六、固相亲和吸附剂重复使用
[0086]
将固相亲和吸附剂结合杂抗体后的沉淀用酸性缓冲液(20mol/l柠檬酸缓冲液或ph 2.4的甘氨酸缓冲液)解离掉杂抗体，再用3倍体积的0.02mol/l磷酸钠缓冲液洗涤三次平衡后，可重复使用。
[0087]
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。

技术特征：
1.一种用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：用生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清。2.根据权利要求1所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子发生交联的反应性末端。3.根据权利要求1所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子上的氨基、羧基和/或巯基发生交联的反应性末端。4.根据权利要求1所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基、亚胺基或酰胺基；优选地，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基。5.根据权利要求1所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于1的整数；优选地，n为不小于1且不大于10的整数。6.根据权利要求1所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：步骤(1)，在搅拌条件下，在所述不含特定蛋白的人全血清中滴加所述生物分子交联剂，后持续搅拌5～30分钟，即得所述固相亲和吸附剂。7.根据权利要求6所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述不含特定蛋白的人全血清可由下述方法获得：使人全血清通过固定相连接有抗特定蛋白抗体的层析柱，收集流川液即得不含特定蛋白的人全血清。8.根据权利要求6所述的固相亲和吸附剂，其特征在于，所述固相亲和吸附剂的制备中，步骤(1)后还包括：步骤(2)，用磷酸缓冲溶液洗涤步骤(1)所得的固相亲和吸附剂。9.一种获得纯化的抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：步骤(a)，将待纯化的抗血清先用固相亲和吸附剂和辛酸中的一种处理，去除沉淀所得液体再用固相亲和吸附剂和辛酸中的另一种处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理，收集所得沉淀溶解后透析，即得所述纯化的抗体。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述固相亲和吸附剂和所述待纯化的抗血清的使用体积比为：1：(2～8)；和/或，所述反应为水浴反应；和/或，所述去除沉淀的方式为离心，所述离心的转速为4000rpm/分钟。11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，将所述沉淀先用酸性缓冲液洗涤后用磷酸缓冲液洗涤，即得去除杂蛋白的固相亲和吸附剂，所述去除杂蛋白的固相亲和吸附剂可重复用于获得纯化的抗体。
技术总结
本申请公开了一种用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法。本申请中，固相亲和吸附剂的制备步骤包括：用生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清；获得纯化的抗体的方法包括：步骤(A)，将待纯化的抗血清先用固相亲和吸附剂和辛酸中的一种处理，去除沉淀所得液体再用固相亲和吸附剂和辛酸中的另一种处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理，收集所得沉淀溶解后透析，即得所述纯化的抗体。本发明提供的固相亲和吸附剂与亲和层析色谱中的特异性原相比制造成本低、纯化效果好。本发明提供的固相亲和吸附剂可重复使用，并且多次重复使用仍可保持较高的纯化效果。并且多次重复使用仍可保持较高的纯化效果。并且多次重复使用仍可保持较高的纯化效果。


技术研发人员：程世俊 周伟 曹梅 朱婷婷 陈毅
受保护的技术使用者：上海捷门生物技术有限公司
技术研发日：2021.04.25
技术公布日：2021/6/29