一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用的制作方法

1.本发明属于现代中医药技术领域，涉及一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用。


背景技术：

2.衰老(aging)又叫做老化，是一种随着年龄增长和时间推移，机体进入逐渐退化、功能逐渐衰退的阶段，是自发并且不可逆转的必然过程。在医学上，衰老分为两种，即生理性和病理性。细胞、组织、器官衰老的不断积累最终导致机体衰老。人口老龄化是世界各国面临的重大社会问题，自2000年中国进入老龄化社会以来，老龄化水平不断加深。到21世纪中叶，中国的老年人口将达到4.8亿，预计将占世界老年人口总数的四分之一。年龄是老年人感染各种慢性疾病的危险因素，例如ⅱ型糖尿病、阿尔兹海默病、癌症、恶性肿瘤等，因此这些疾病又被称为年龄相关疾病，会引发许多常见的并发症并最终导致死亡。自由基学说是现代衰老学说中认可程度较为广泛、流行且较为完善和成熟的学说之一。不饱和脂肪酸会产生脂质过氧化物，会制止蛋白质存活，并对细胞的结构和功能产生严重破坏，导致细胞发生变化、突变、衰老和死亡，除了细胞内部的反应外，结缔组织也会在铁、钴、锰等金属的分子氧催化下发生缓慢氧化，从而产生自由基。研究结果表明，人体组织内脂褐素含量会伴随着自由基水平的增高而增加，而脂褐素含量与人类的衰老有密切关系。自由基还会使机体、细胞内的蛋白质发生烷基化，使机体内的各种酶失去活性，并影响人体的新陈代谢过程；对蛋白质造成的氧化损伤可能是衰老的重要原因，因为氧化后，蛋白质失去其结构完整性，首先被水解。一般来说，机体内的自由基和抗氧化剂具有动态平衡，随着年龄的增长，自由基会上升，体内抗氧化剂的数量会减少，导致大量的自由基积累，引起体积细胞的损害和毒性累积，抗氧化能力下降，ros和氧化损伤都随着年龄增长而增加，自由基水平与年龄也表现出高度正相关，机体衰老，自由基增多，衰老进程加快，衰老又会产生自由基，造成恶性循环，引起一系列年龄相关疾病，如心脏病、糖尿病等。因此，以自然规律为前提，减缓老龄化进程、降低年龄相关疾病的发病率，是缓和当今老龄化社会一系列问题的重要手段。


技术实现要素：

3.本发明提供一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，特别是本发明的实施例试验发现对于腹腔注射50
‑
500mg/kg
·
bw d
‑
半乳糖建立小鼠衰老组模型，酸茶提取物可维持机体外周血细胞内环境稳定，减少脂质过氧化反应的发生，使老年机体自身免疫性疾病发病率下降，目前现有技术中还没有将酸茶应用于延缓衰老的领域，无法认识到其作为药物来研究开发推向医药市场。
4.本发明所采用的技术方案是一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，所述德昂酸茶提取物为德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物；
5.所述德昂酸茶水提取物的制备方法为将德昂酸茶粉碎过筛后，加沸水浸提，过滤；取滤液减压蒸馏浓缩，然后分装、密封、低温冷藏，即得德昂酸茶水提取物。
6.进一步的，所述德昂酸茶与沸水的重量比为1:10
‑
1:20，所述过滤液在旋转蒸发仪中60
±
2℃进行减压浓缩，浓缩至浓度为0.3
‑
0.5g/ml。
7.进一步的，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物能抑制体重增长。
8.进一步的，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高血液中红细胞、白细胞、血小板数值水平。
9.进一步的，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高脑组织、肝脏组织中sod和gsh
‑
px酶活性，降低脂质过氧化产物mda的含量。
10.进一步的，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高脑组织和肝脏组织il
‑
2浓度，降低il
‑
6和tnf
‑
α浓度。
11.进一步的，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可改善肝脏组织细胞大小和结构；能减小脂肪组织细胞面积和周长，减少炎性细胞。
12.进一步的，所述德昂酸茶提取物为德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可应用于延缓衰老保健品中，组合物为胶囊剂、片剂或口服液。
13.如本发明实施例所示，酸茶提取物可提高d
‑
半乳糖衰老小鼠血液中红细胞、白细胞、血小板数值水平，起到维持机体外周血细胞内环境稳定，保护免疫防御反应的作用；可显著提高d
‑
半乳糖衰老小鼠脑组织、肝脏组织中sod和gsh
‑
px酶活性，降低脂质过氧化产物mda的含量(p＜0.05)，起到清除机体自由基，减少脂质过氧化反应的发生；可显著提高d
‑
半乳糖衰老小鼠脑组织和肝脏组织il
‑
2浓度，降低il
‑
6和tnf
‑
α浓度(p＜0.05)，从而调节免疫细胞，减少炎症反应，降低免疫衰老的速度，使老年机体自身免疫性疾病发病率下降；可改善衰老小鼠肝脏组织细胞大小和结构；具有减轻小肠炎症反应，保护黏膜上皮细胞的作用；能够显著减小脂肪组织细胞面积和周长(p＜0.05)，减少炎性细胞。因此本发明多手段、多方面探索酸茶延缓衰老的作用，为开发新型抗衰老保健食品提供科学依据，为酸茶深加工产品的开发利用开拓新领域，同时能带动少数民族地区经济的发展，更好的发扬继承民族文化，保护传统制作技艺。
附图说明
14.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
15.图1是不同浓度葡萄糖标准溶液(mg
·
ml
‑1)与吸光值曲线图；
16.图2是酸茶提取物对试验小鼠体重影响结果图；
17.图3是小鼠建模后水迷宫试验结果图；
18.图4是小鼠干预后水迷宫试验结果图；
19.图5是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织sod活性试验结果图；
20.图6是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织gsh
‑
px活性试验结果图；
21.图7是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织mda含量试验结果图；
22.图8是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织il
‑
2浓度试验结果图；
23.图9是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织il
‑
6浓度试验结果图；
24.图10是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织tnf
‑
α浓度试验结果；
25.图11(a)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验正常组结果图；
26.图11(b)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验正常ve组结果图；
27.图11(c)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验正常酸茶组结果图；
28.图11(d)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验模型组结果图；
29.图11(e)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验模型ve组结果图；
30.图11(f)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验模型酸茶组结果图；
31.图12(a)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察正常组结果图；
32.图12(b)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察正常ve组结果图；
33.图12(c)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察正常酸茶组结果图；
34.图12(d)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察模型组结果图；
35.图12(e)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察模型ve组结果图；
36.图12(f)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察模型酸茶组结果图；
37.图13(a)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察正常组结果图；
38.图13(b)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察正常ve组结果图；
39.图13(c)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察正常酸茶组结果图；
40.图13(d)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察模型组结果图；
41.图13(e)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察模型ve组结果图；
42.图13(f)是酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察模型酸茶组结果图；
具体实施方式
43.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
44.实施例1：酸茶水提取物的制备
45.(1)提取
46.取德昂酸茶(购自云南省德宏州德凤茶业有限公司)去尘净化，磨碎过20目筛，以酸茶与水重量比为1:50加入沸水浸提10min，间歇摇动瓶子，浸取3次。
47.(2)过滤
48.将3次酸茶提取物浸提液用纱布过滤后混合。
49.(3)减压浓缩
50.过滤液在旋转蒸发仪中60
±
2℃进行减压浓缩，浓缩至浓度为0.3g/ml。
51.(4)分装灭菌
52.将浓缩液分装、密封，然后用高压灭菌锅在121℃下灭菌30min。
53.(5)低温冷藏
54.灭菌后的浓缩液冷却至室温，放入冰箱，在4℃
‑
8℃下保存两周，备用。
55.经检测分析，本发明的酸茶水提取物中包含茶多酚、咖啡碱、茶多糖等多种成分。
56.实施例2：酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱含量测定
57.(1)茶多酚含量测定
58.称取3g(精确至0.001g)酸茶，磨碎过20目筛，将酸茶粉末置于500ml锥形瓶中，加入沸蒸馏水450ml，并立即将其移入沸水浴浸提45min，且每隔10min摇动一次。浸提结束后立即过滤。然后取1ml过滤液，加入4ml水和5ml酒石酸亚铁溶液，混合均匀后再加入ph 7.5磷酸盐缓冲液，定容至25ml。以试剂空白溶液作参照，于540nm波长处比色，测定吸光度，计算茶多酚含量。经计算本试验酸茶的茶多酚含量为29.81％。
59.(2)茶多糖含量测定
60.以不同浓度的葡萄糖标准溶液(mg
·
ml
‑1)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程：y＝0.0085x 0.0231(r2＝0.9965)如图1所示。称取酸茶1g(精确至0.001g)，加入50ml沸水，在沸水浴中浸提30min。浸提结束立即趁热过滤。取1ml过滤液，于620nm波长处测定吸光度，由回归方程计算待测液中的葡萄糖浓度，再由公式算出茶多糖含量。经计算本试验酸茶的茶多糖含量为2.37％。
61.(3)咖啡碱含量测定
62.称取1g(精确至0.001g)酸茶茶叶磨碎，加入40ml甲醇，再加入4ml盐酸，85℃水浴90min，定容至50ml，测定前经0.45μm滤膜过滤，待测。使用色谱柱分离，流动相a为0.2％磷酸，流动相b为80％甲醇，进样量5μl，流速0.8ml/min，柱温为40℃，检测波长530nm；由保留时间确定化合物，使用外标法根据峰面积定量。经计算本试验酸茶的咖啡碱含量为3.87％。
63.实施例3：动物实验
64.一、酸茶提取物对d
‑
半乳糖诱导的小鼠生长指标作用的试验
65.(1)药物酸茶提取物给药剂量(以酸茶提取物计算)是：酸茶水提取物3g/kg
·
bw。
66.(2)选择150只外形符合健康标准的spf级雄性昆明小鼠为试验动物，体重在25
‑
29g之间。小鼠5只一笼养于恒温恒湿的动物房内，12小时明暗交替，标准试验动物饲料喂养，自由采食、饮水(灭菌水)，环境温度控制在25℃，湿度75％，每2天换一次垫料，饮水瓶2
‑
3天高温灭菌换水，动物房定期消毒。试验小鼠进入动物房以后适应性喂养一周，在适应期间对小鼠的各方面状况进行观察，若出现厌食及体重明显下降等情况，应及时剔除不合格小鼠不再进行试验。
67.(3)试验方法动物按体重随机分组，60只腹腔注射0.9％生理盐水40天作为正常组，60只腹腔注射500mg/kg
·
bw d
‑
半乳糖40天作为衰老模型组；衰老模型建立成功后，正常组中的20只用纯净水经口灌胃，作为正常组；20只用100mg/kg
·
bw的水溶性维生素e经口灌胃作为正常ve组；20只用3g/kg
·
bw酸茶提取物经口灌胃作为正常酸茶组。衰老模型组中的20只用纯净水经口灌胃，作为模型组，20只用100mg/kg
·
bw的水溶性维生素e经口灌胃作为模型ve组；20只用3g/kg
·
bw酸茶提取物经口灌胃作为模型酸茶组。动物试验分组和剂量确定如表1所示。
68.表1
[0069][0070]
各组每天注射生理盐水和d
‑
半乳糖后，灌胃不同受试样品，持续43天，直至试验结束。
[0071]
(4)每日注射和灌胃液体的体积为0.1ml/10g
·
bw，试验期间，每日观察小鼠皮毛状况、精神状态、摄食情况和活动情况，每3天称量体重、每天记录小鼠的摄食量和饮水量。
[0072]
建模和干预结束前分别进行水迷宫试验，试验一共持续6天，前5天每天定时训练3次，将小鼠从迷宫入口处放入水中的同时开始计时并用鲜艳的绿色棍子引导小鼠寻找迷宫出口，记录小鼠从入口到出口所需的时间，如果5min内未成功找到出口，则将小鼠引导到岸上，并让其在岸上休息2min，此时记为不合格。第6天撤去引导棍子，重复前5天的操作，让小鼠在迷官中找到出口，并记录小鼠到达出口所需时间。
[0073]
经口持续灌胃酸茶43天后，禁食不禁水12h，牺牲所有试验组小鼠，分别摘取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏，滤纸吸去多余血液后准确称量脏体质量，并计算脏器与体重的比值。脏体比＝脏器重量(g)/体重(g)。
[0074]
(5)结果
[0075]
酸茶提取物对试验小鼠体重影响结果如图2所示，各组试验小鼠灌胃初始体重无显著差异(p>0.05)，随着灌胃时间延长，各组生长速度不同，除正常酸茶组和模型酸茶组以外，试验小鼠体重基本呈相同的上升趋势；模型组体重增长最少，正常ve组体重增长最大，正常酸茶组和模型酸茶组体重甚至呈下降趋势，到试验结束，各组间体重均无显著差异(p>0.05)。
[0076]
建模和干预结束前进行小鼠水迷宫试验，记录小鼠从入水到找到迷宫出口所需的时间，对数据进行分析，结果见图3、4，由图3可知，腹腔注射d
‑
半乳糖建立衰老模型的小鼠在水迷宫第6天测试的时候所用的时间显著高于腹腔注射生理盐水的正常小鼠所用的时间(p＜0.05)，说明用d
‑
半乳糖建模的小鼠行动力和记忆力不如正常小鼠，衰老模型建立成功。由图4可知，用酸茶进行干预后，各组试验小鼠用时差异不显著(p＞0.05)，但正常组小鼠用时最短，正常组、正常ve组和正常酸茶组时间都低于模型组，模型组小鼠用时最长，且模型组小鼠用时高于模型ve组和模型衰老组，说明灌胃ve和酸茶后能提高衰老小鼠在水迷宫中找到出口的时间，一定程度上说明酸茶能提高衰老小鼠的记忆力。
[0077]
酸茶提取物对试验小鼠脏体比影响结果如表2所示
[0078]
表2
[0079]
组别心体比肝体比脾体比肺体比肾体比正常组0.00719
±
0.00110
a
0.03620
±
0.00392
ab
0.00257
±
0.00119
a
0.00662
±
0.00056
a
0.01338
±
0.00132
a
正常ve组0.00708
±
0.00177
a
0.03508
±
0.00375
a
0.00270
±
0.00103
a
0.00659
±
0.00103
a
0.01266
±
0.00406
a
正常酸茶组0.00722
±
0.00094
a
0.04071
±
0.00226
c
0.00279
±
0.00157
a
0.00670
±
0.00130
a
0.01412
±
0.00108
a
模型组0.00790
±
0.00110
a
0.03544
±
0.00365
ab
0.00313
±
0.00151
a
0.00653
±
0.00048
a
0.01367
±
0.00130
a
模型ve组0.00749
±
0.00151
a
0.03622
±
0.00387
ab
0.00287
±
0.00212
a
0.00729
±
0.00137
a
0.01320
±
0.00139
a
模型酸茶组0.00703
±
0.00101
a
0.03832
±
0.00378
bc
0.00258
±
0.00093
a
0.00687
±
0.00093
a
0.01374
±
0.00144
a
[0080]
注：结果系平均值
±
标准差。同列含相同字母表示差异不显著，p＞0.05；不含相同字母表示差异显著，p＜0.05。以下表格均同。
[0081]
由表2可知，各组试验小鼠心体比、脾体比、肺体比、肾体比之间不存在显著性(p>0.05)；模型组脾体比高于其他各组，模型酸茶组的脾体比低于模型组，接近正常组，说明酸茶可以降低衰老小鼠脾体比并达到正常水平，提示酸茶具有保护机体免疫器官的作用。
[0082]
正常酸茶组肝体比与正常组、正常ve组之间存在显著差异(p＜0.05)，模型组和模型ve组、模型酸茶组各组之间不存在显著差异(p>0.05)，除模型酸茶组以外，正常酸茶组与其余各组之间肝体比差异显著(p＜0.05)，模型组与正常酸茶组之间差异显著(p＜0.05)，说明酸茶可以提高小鼠肝体比，说明酸茶提取物对正常小鼠和衰老小鼠的肝脏均具有良好的保护作用。
[0083]
二.酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠外周血象的试验
[0084]
牺牲所有试验组小鼠，每只小鼠均取全血20μl稀释后于全自动血液细胞分析仪测定小鼠外周血象，测定指标：白细胞数目(wbc)、淋巴细胞数目(lymph#)、单核细胞数目(mon)、中性粒细胞数目(gran)、红细胞数目(rbc)、平均红细胞体积(mcv)、血红蛋白(hgb)、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)、血小板数目(plt)、平均血小板体积(mpv)、血小板分布宽度(pdw)、血小板压积(pct)。
[0085]
a)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠白细胞影响的结果如表3所示。
[0086]
表3
[0087][0088]
由表3可知，根据wbc白细胞数目(0.8
‑
6.8
×
109/l)、lymph#淋巴细胞数目(0.7
‑
5.7
×
109/l)、mon#单核细胞数目(0.0
‑
0.3
×
109/l)、gran中性粒细胞数(0.1
‑
1.8
×
109/l)的参考范围，各试验组wbc、lymph#、mon#、gran数量之间均无显著性(p>0.05)，但所有模型组wbc、lymph#、gran数量基本高于所有正常组，四个指标均在参考范围内。
[0089]
b)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠红细胞影响的结果如表4所示。
[0090]
表4
[0091][0092][0093]
由表4可知，根据rbc红细胞数目(6.39
‑
9.42
×
10
12
/l)、mcv平均红细胞体积(48.2
‑
58.3fl)、hgb血红蛋白(110
‑
143g/l)、mchc平均红细胞血红蛋白浓度(302
‑
353g/l)的参考范围，在rbc中，正常组、正常ve组和正常酸茶组之间存在显著差异(p＜0.05)，模型组、模型ve组和模型酸茶组之间不存在显著差异(p>0.05)，正常组和模型组差异不显著(p>0.05)，除模型ve组数值高于参考范围外，其余各组都在参考范围内；各试验组mcv不存在显著差异(p>0.05)，正常ve组、正常酸茶组、模型组、模型ve组低于参考范围，正常组和模型酸茶组在参考范围内；正常组、正常ve组和正常酸茶组之间hgb存在显著差异(p＜0.05)，模型组、模型ve组和模型酸茶组之间不存在显著差异(p>0.05)，正常组和模型组之间差异不显著(p>0.05)，除正常ve组数值高于参考范围外，其余各组都在参考范围内；在mchc数值中，正常组、正常ve组和正常酸茶组之间不存在显著差异(p>0.05)，模型组、模型ve组和模型酸茶组之间均不存在显著差异(p>0.05)，各组数据均在参考范围内。
[0094]
c)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠血小板影响的结果如表5所示
[0095]
表5
[0096][0097]
由表5可知，根据plt血小板数目(100
‑
600
×
109/l)、mpv平均血小板体积(5.5
‑
7.5fl)参考范围，模型组、模型ve组和模型酸茶组之间plt差异不显著(p>0.05)，正常组与正常ve组存在显著差异(p＜0.05)，各组数值均在参考范围内；模型组和正常组、正常酸茶组之间mpv差异不显著(p>0.05)，正常酸茶组和模型组数值低于参考范围；模型组之间pdw差异不显著(p>0.05)，正常ve组和正常酸茶组存在显著差异(p＜0.05)；pct中正常组之间和模型组之间不存在显著差异(p>0.05)。
[0098]
三.酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠生理生化指标的试验
[0099]
牺牲所有试验小鼠后，迅速取出肝脏和脑组织，迅速放入液氮中冷冻保存；制备10％的组织匀浆，将匀浆液离心完毕后取上清液待测。按照酶联免疫发分别测定肝脏组织和脑组织的sod、gsh
‑
px、mda、il
‑
2、il
‑
6、tnf
‑
α指标，测定时严格参照试剂盒说明书进行操作。
[0100]
a)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠抗氧化指标的试验结果
[0101]
1)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织sod活性试验结果如图5所示，由图5可知，脑组织中，模型组与正常组小鼠相比sod活性显著降低(p＜0.05)，正常ve组与正常组、正常酸茶组相比sod活性显著降低(p＜0.05)；模型ve组、模型酸茶组与模型组相比sod活性显著提高(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖衰老模型小鼠sod活性显著降低，灌胃酸茶后正常和衰老小鼠均能提高脑组织中sod活性。
[0102]
肝脏组织中，模型组与正常组小鼠相比sod活性显著降低(p＜0.05)；正常小鼠各组之间存在显著差异(p＜0.05)，正常酸茶组显著高于正常组(p＜0.05)；模型ve组、模型酸茶组与模型组相比sod活性显著提高(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖建模能显著降低小鼠sod活性，灌胃酸茶能提高衰老小鼠和正常小鼠肝脏组织中sod活性。
[0103]
2)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织gsh
‑
px活性试验结果如图6所示，由图6可知，gsh
‑
px在脑组织中模型组与正常组相比显著降低(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖建模能显著降低小鼠gsh
‑
px活性；正常ve组与正常组、正常酸茶组之间相比gsh
‑
px活性显著降低(p＜0.05)；模型组与模型ve组相比gsh
‑
px活性显著降低(p＜0.05)，模型组与模型酸茶组比较差异不显著(p>0.05)，但模型酸茶组gsh
‑
px活性比模型组高，说明酸茶和ve能提高衰老小鼠gsh
‑
px活性。
[0104]
肝脏组织中模型组与正常组相比gsh
‑
px活性显著降低(p＜0.05)；模型组与模型ve组相比gsh
‑
px活性显著降低(p＜0.05)，模型组与模型酸茶组比较差异不显著(p>0.05)，
但模型酸茶组gsh
‑
px活性比模型组高，说明d
‑
半乳糖衰老模型小鼠肝脏组织中gsh
‑
px活性显著降低，酸茶和ve能提高衰老小鼠gsh
‑
px活性。
[0105]
3)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织mda含量试验结果如图7所示，由图7可知，脑组织mda含量中模型组与其他各组相比显著提高(p＜0.05)，模型酸茶组、模型ve组mda含量显著低于模型组(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖建立衰老小鼠模型成功，酸茶清除mda效果优于维生素e。
[0106]
肝脏组织mda含量中，正常组、正常ve组和正常酸茶组间不存在显著差异(p>0.05)，模型组的mda含量显著高于正常组(p＜0.05)，模型酸茶组与模型组比较mda含量显著降低(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖建立衰老小鼠模型成功，灌胃酸茶能降低mda含量，且效果比维生素e更明显。
[0107]
b)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠抗免疫功能的试验结果
[0108]
1)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织il
‑
2浓度试验结果如图8所示，由图8可知，脑组织、肝组织中il
‑
2浓度在正常组、正常ve组和正常酸茶组中无显著性(p>0.05)；正常组与模型组不存在显著差异(p>0.05)，但正常组il
‑
2浓度高于模型组；模型ve组il
‑
2浓度显著高于模型组(p＜0.05)；模型组与模型酸茶组不存在显著差异(p>0.05)，但模型组浓度低于模型酸茶组，说明d
‑
半乳糖衰老模型小鼠脑组织、肝组织il
‑
2浓度会降低，酸茶和ve均能提高衰老小鼠il
‑
2浓度，ve效果比酸茶明显。
[0109]
2)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织il
‑
6浓度试验结果如图9所示，由图9可知，与正常组相比，模型组脑组织中il
‑
6浓度显著提高(p＜0.05)，说明建模过程中能造成il
‑
6浓度上升；模型酸茶组与模型组相比il
‑
6浓度显著降低(p＜0.05)，提示酸茶能显著降低d
‑
半乳糖衰老模型小鼠脑组织中il
‑
6浓度，效果比ve明显。
[0110]
肝组织中正常组与其他各组相比均不存在显著差异(p>0.05)，但正常组浓度低于模型组，说明d
‑
半乳糖衰老模型小鼠il
‑
6浓度会上升，模型酸茶组il
‑
6浓度显著高于模型组(p＜0.05)，说明酸茶对降低il
‑
6浓度有显著作用。
[0111]
3)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脑、肝组织tnf
‑
α浓度试验结果如图10所示，由图10可知，与正常组相比，模型组脑组织tnf
‑
α浓度显著提高(p＜0.05)，说明d
‑
半乳糖建模会导致tnf
‑
α浓度上升；正常组、正常ve组和正常酸茶组相比差异不显著(p>0.05)；模型组与模型ve组、模型酸茶组相比tnf
‑
α浓度显著提高(p＜0.05)，提示ve和酸茶能显著降低衰老小鼠tnf
‑
α浓度，且酸茶效果更明显。
[0112]
肝组织中正常组、正常ve组和正常酸茶组间tnf
‑
α浓度不存在显著差异(p>0.05)；模型组与正常组相比tnf
‑
α浓度显著提高(p＜0.05)，说明建模会导致小鼠tnf
‑
α浓度上升，模型酸茶组与模型组相比tnf
‑
α浓度显著降低(p＜0.05)，提示酸茶能显著降低衰老小鼠tnf
‑
α浓度，且酸茶效果更明显。
[0113]
四.酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠病理变化的试验
[0114]
牺牲所有试验组小鼠后，迅速取出肝脏、空肠和脂肪组织。选取一叶相同部位的完整的肝脏放入包埋盒内，再放于组织固定液内进行固定；空肠用预冷的生理盐水冲洗后放入包埋盒进行固定，取出脂肪后直接放于包埋盒固定，固定时间在24小时以上。再进行脱水、石蜡包埋、切片、he染色(苏木素染细胞核、伊红染细胞质)、脱水封片，最后在显微镜下进行观察和常规病理分析。
[0115]
a)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化影响试验结果如图11(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)所示，酸茶提取物对小鼠肝脏组织的显微镜观察如表6所示。
[0116]
表6
[0117][0118]
由图11(a)至(f)和表6可知，正常组、正常ve组和正常酸茶组肝脏组织与细胞正常，模型组少量肝细胞气球样变，胞体肿胀，胞质疏松淡染，局部中央静脉周围可见淋巴细胞小灶性浸润，模型ve组肝细胞胞核大小不一，模型酸茶组与正常组比较无较大差异，说明酸茶对改善衰老小鼠肝脏组织变性和肝细胞大小具有明显的作用。
[0119]
b)酸茶对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织病理变化的影响
[0120]
1)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠空肠组织的显微镜观察结果如图12(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)所示，酸茶提取物对小鼠空肠组织病理变化结果如表7所示。
[0121]
表7
[0122][0123]
由图12(a)至(f)和表7可知，正常组、正常ve组和正常酸茶组空肠组织结构完整，肠绒毛数量丰富，排列规则，黏膜上皮细胞未见脱落，肠腺数量丰富，排列紧密；模型组组织黏膜层损伤，局部黏膜上皮细胞脱落，肠绒毛固有层裸露，肠腺排列疏松，固有层可见炎性
细胞小灶性浸润，灌胃酸茶后，局部少量黏膜上皮细胞脱落，固有层肠腺数量丰富，排列紧密，说明酸茶对衰老小鼠空肠组织具有减轻小肠炎症反应，保护黏膜上皮细胞的作用。
[0124]
2)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老对小鼠空肠绒毛高度影响结果如表8所示，
[0125]
表8
[0126][0127][0128]
由表8可知，正常组、正常酸茶组与正常ve组、模型组、模型ve组、模型酸茶组之间有显著差异(p＜0.05)，正常组的绒毛高度显著高于模型组(p＜0.05)，模型酸茶组的绒毛高度高于模型组，说明用d
‑
半乳糖建模会造成小鼠肠绒毛的损伤，灌胃酸茶能改善衰老小鼠的肠绒毛损伤程度。
[0129]
c)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织病理的影响
[0130]
1)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪组织的显微镜观察结果如图13(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)所示，酸茶提取物对小鼠空肠病理的影响结果如表9。
[0131]
表9
[0132][0133]
由图13(a)至(f)和表9可知，正常组、正常ve组和正常酸茶组脂肪细胞排列紧密，分界清晰，形状规则，模型组与正常组比较脂肪细胞体积增大，局部间质可见少量炎性细胞浸润，灌胃酸茶后明模型酸茶组与正常组比较脂肪细胞大小无明显差异，说明酸茶能够显著减小脂肪组织细胞大小，减少炎性细胞。
[0134]
2)酸茶提取物对d
‑
半乳糖致衰老小鼠脂肪周长和面积影响的结果如表10所示。
[0135]
表10
[0136][0137][0138]
由表10可知，脂肪面积和脂肪周长中模型组小鼠与正常组、正常酸茶组、正常ve组、模型ve组、模型酸茶组小鼠之间均存在显著差异(p＜0.05)，模型组小鼠脂肪面积和脂肪周长显著高于其余各组，说明衰老会造成小鼠脂肪面积和脂肪周长增大，灌胃ve和酸茶后面积和周长能缩小，且酸茶效果好于ve，正常酸茶组的脂肪面积和脂肪周长显著低于正常组、正常ve组(p＜0.05)，说明酸茶同样也能减小正常小鼠脂肪面积和脂肪周长。
[0139]
实施例4：酸茶提取物的制备例
[0140]
取德昂酸茶(购自云南省德宏州德凤茶业有限公司)去尘净化，磨碎过20目筛，以酸茶与水重量比为1:50加入沸水浸提10min，间歇摇动瓶子，浸取3次。将3次酸茶提取物浸提液用纱布过滤后混合。过滤液在旋转蒸发仪中60
±
2℃进行减压浓缩，浓缩至浓度为0.3g/ml。将浓缩液分装、密封，然后用高压灭菌锅在121℃下灭菌30min。灭菌后的浓缩液冷却至室温，放入冰箱，在4℃
‑
8℃下保存两周，备用。
[0141]
制备例1(片剂)
[0142]
取上述酸茶提取物100g、黄芪25g、淀粉40g，混合均匀，制粒，干燥，整粒，压片即得。
[0143]
制备例2(胶囊剂)
[0144]
取上述酸茶提取物100g、黄芪25g、淀粉40g，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊即得。
[0145]
制备例3(口服液)
[0146]
(1)提取：取德昂酸茶(购自云南省德宏州德凤茶业有限公司)去尘净化，磨碎过20目筛，以酸茶与水重量比为1:50加入沸水浸提10min，间歇摇动瓶子，浸取3次。
[0147]
(2)过滤：将3次酸茶提取物浸提液用纱布过滤后混合。
[0148]
(3)减压浓缩：过滤液在旋转蒸发仪中60
±
2℃进行减压浓缩，浓缩至浓度为0.3g/ml。
[0149]
(4)分装灭菌：将浓缩液分装、密封，然后用高压灭菌锅在121℃下灭菌30min；再加入矫味剂和防腐剂，制备成口服液。
[0150]
(5)低温冷藏：灭菌后的浓缩液冷却至室温，放入冰箱，在4℃
‑
8℃下保存。
[0151]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

技术特征：
1.一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶提取物为德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物；所述德昂酸茶水提取物的制备方法为将德昂酸茶粉碎过筛后，加沸水浸提，过滤；取滤液减压蒸馏浓缩，然后分装、密封、低温冷藏，即得德昂酸茶水提取物。2.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶与沸水的重量比为1:10
‑
1:20，所述过滤液在旋转蒸发仪中60
±
2℃进行减压浓缩，浓缩至浓度为0.3
‑
0.5g/ml。3.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物能抑制体重增长。4.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高血液中红细胞、白细胞、血小板数值水平。5.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高脑组织、肝脏组织中sod和gsh
‑
px酶活性，降低脂质过氧化产物mda的含量。6.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可提高脑组织和肝脏组织il
‑
2浓度，降低il
‑
6和tnf
‑
α浓度。7.根据权利要求1所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可改善肝脏组织细胞大小和结构；能减小脂肪组织细胞面积和周长，减少炎性细胞。8.根据权利要求1
‑
7任意一项所述的一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，其特征在于，所述德昂酸茶提取物为德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物可应用于延缓衰老保健品中，组合物为胶囊剂、片剂或口服液。
技术总结
本发明公开了一种德昂酸茶提取物在延缓衰老药物中的应用，属于现代中医药技术领域。所述德昂酸茶提取物为德昂酸茶水提取物或德昂酸茶茶多酚、茶多糖、咖啡碱提取物；所述德昂酸茶水提取物的制备方法为将德昂酸茶粉碎过筛后，加沸水浸提，过滤；取滤液减压蒸馏浓缩，然后分装、密封、低温冷藏，即得德昂酸茶水提取物。本发明从多手段、多方面探索酸茶延缓衰老的作用，为开发新型抗衰老保健食品提供科学依据，为酸茶深加工产品的开发利用开拓新领域。为酸茶深加工产品的开发利用开拓新领域。为酸茶深加工产品的开发利用开拓新领域。


技术研发人员：侯艳 卢凤美 谢桂华 张智芳 黄斯琦 毛鸿霖
受保护的技术使用者：云南农业大学
技术研发日：2021.03.03
技术公布日：2021/6/29