一种铁皮石斛素及其制备方法与流程

专利2022-05-09  92



1.本发明属于天然药物制备领域,具体的说,涉及一种铁皮石斛素及其制备方法和应用。


背景技术:
:
2.中国石斛种类很多,主要包括铁皮石斛、霍山石斛、环草石斛、金钗石斛马鞭石斛等。其中铁皮石斛(dendrobium officinale kimura et migo)是世界上最有价值的草本植物之一,在中国和许多南亚国家被用作草药已有几个世纪的历史。在医学实践中,它被用来滋阴、提高体液的产生,以及提供有益的作用,如润肺,调节身体的免疫功能等。石斛的药用成分十分复杂,不仅含有多糖和生物碱,还含有黄酮类化合物、多种氨基酸和微量矿物元素。铁皮石斛素是一种来源于兰科石斛属石斛药材的天然联苄类化合物,前人研究其具有抗炎作用,但生物利用率低,且原料来源昂贵。
3.目前,学者们对药用的铁皮石斛多了很多药理性的研究,铁皮石斛中鼓槌菲和毛素兰两种抗癌物质,可以明显的抑制肝癌细胞和艾氏腹水癌细胞的活性。因此,在此基础上有必要对其进一步提取分离,对分离出的新化学成分进行生物学活性研究,进而从中获取有开发利用价值的化合物。


技术实现要素:

4.本发明提供了一种铁皮石斛素及其制备方法,从铁皮石斛中分离到铁皮石斛素,该化合物具有多种生物学活性,尤其具有较好的抗肿瘤活性。
5.下述的技术方案是用来实现上述的发明目的:
6.本发明提供的铁皮石斛素从铁皮石斛中分离的得到,其具有如下结构:
[0007][0008]
该化合物的命名为铁皮石斛素z(dendrocandin z),其分子式为c
26
h
28
o7[0009]
所述铁皮石斛素的制备方法,具体包括以下步骤:
[0010]
1)采集铁皮石斛茎,阴干后粉碎,过筛(40目)作为原料;
[0011]
2)将步骤1)所得原料浸泡于乙醇中24h,反复浸泡3次,减压蒸馏,浓缩后获得浸膏;
[0012]
3)将步骤2)所得浸膏溶于蒸馏水中,用乙酸乙酯进行萃取,回收溶剂,采用氯仿

甲醇

水对乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离,梯度洗脱,收集其中体积比为10:1:0.2氯仿

甲醇

水溶液洗脱得到的洗脱液ⅰ。
[0013]
4)洗脱液ⅰ经硅胶柱色谱先用丙酮溶液进行梯度洗脱再用甲醇洗脱,洗脱后回收溶剂,得到洗脱液ⅰ的浸膏;
[0014]
5)得到洗脱液ⅰ的浸膏用mci拌样,用50%的甲醇梯度洗脱,减压浓缩后回收溶剂,得到10份浓缩液分别为a

j;
[0015]
6)其中h部分为10g,经硅胶柱色谱用氯仿

甲醇溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为10:1的氯仿

甲醇溶液洗脱得到的洗脱液ⅱ;
[0016]
7)洗脱液ⅱ用硅胶拌样,上硅胶h柱,经硅胶柱色谱用石油醚

乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为2:1的石油醚

乙酸乙酯溶液洗脱得到的洗脱液ⅲ;
[0017]
8)洗脱液ⅲ经高效液相色谱仪纯化得到化合物,流动相为体积比2:1的ch3oh

h2o。
[0018]
作为优选,步骤2)中,原料与乙醇溶液的质量比为1:8。
[0019]
作为优选,步骤3)中,浸膏与蒸馏水的质量比为1:1。
[0020]
作为优选,步骤3)中,浸膏溶液与乙酸乙酯的质量比为1:2。
[0021]
作为优选,柱层析硅胶为200

300目。
[0022]
所述铁皮石斛素在制备抗癌药物组合物或抗癌制剂中的应用
[0023]
本发明的有益效果:
[0024]
本发明首次从铁皮石斛茎中分离得到铁皮石斛素z,该化合物结构新颖,具有多种生物活性,尤其是较好的抗肿瘤活性,为进一步研究药用植物铁皮石斛提供重要的启示,可用于抗癌药物的研发制备。本发明制备方法简单,制备成本较低,应用情景广阔。
附图说明
[0025]
图1是本发明铁皮石斛素z的结构式;
[0026]
图2是本发明铁皮石斛素z的hplc检测结果图;
[0027]
图3为本发明的铁皮石斛素z的质谱图;
[0028]
图4为本发明的铁皮石斛素z的1h

nmr;
[0029]
图5为本发明的铁皮石斛素z的
13
c

nmr。
[0030]
图6为本发明的铁皮石斛素z对不同细胞株的抑制作用。
具体实施方式:
[0031]
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚,下面将对本发明的优选实施例进行详细的说明,以方便技术人员理解。
[0032]
实施例1
[0033]
本发明提供的铁皮石斛素具体制备方法包括以下步骤:
[0034]
1)将阴干的4kg铁皮石斛茎粉碎,过40目筛作为原料;
[0035]
2)将步骤1)所得原料用8倍量(质量比)分析纯的乙醇溶液完全浸没,搅拌均匀,浸泡24h,反复提取3次,减压蒸馏后回收乙醇,浓缩得到浸膏490g;
[0036]
3)将步骤2)所得浸膏以1:1的比例溶于蒸馏水中,用乙酸乙酯进行萃取,浸膏溶液与乙酸乙酯的质量比为1:2,回收溶剂,得到乙酸乙酯部分240g。乙酸乙酯部分按质量比1:3与硅胶拌样(柱层析硅胶为200

300目),采用体积20:1:0.2

1:1:0.2(依此为20:1:0.2、15:1:0.2、10:1:0.2、5:1:0.2、1:1:0.2)氯仿

甲醇

水溶液对乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分
离,梯度洗脱,收集其中体积比为10:1:0.2氯仿

甲醇

水溶液洗脱得到的洗脱液ⅰ。
[0037]
4)洗脱液ⅰ经硅胶柱色谱先用100%丙酮溶液进行梯度洗脱再用100%甲醇洗脱,洗脱后回收溶剂,得到洗脱液ⅰ的浸膏;
[0038]
5)得到洗脱液ⅰ的浸膏用mci拌样,用80%

30%的甲醇梯度洗脱,收集其中50%甲醇溶液洗脱得到的洗脱液,减压浓缩后回收溶剂,得到10份浓缩液分别为a

j;
[0039]
6)其中h部分为10g,经硅胶柱色谱用体积比为20:1

1:1(依此为20:1、15:1、10:1、5:1、1:1)的氯仿

甲醇溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为10:1的氯仿

甲醇溶液洗脱得到的洗脱液ⅱ;
[0040]
7)洗脱液ⅱ用硅胶拌样,上硅胶h柱,经硅胶柱色谱用用体积比为8:1

1:2(依此为8:1、4:1、2:1、1:2、1:4)石油醚

乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为2:1的石油醚

乙酸乙酯溶液洗脱得到的洗脱液ⅲ;
[0041]
8)洗脱液ⅲ经高效液相色谱仪纯化得到化合物,流动相为体积比2:1的ch3oh

h2o。
[0042]
实施例2:本化合物的结构鉴定
[0043]
取实例制备的化合物,对其进行测定。本发明化合物为无色油状物,分子式为c
26
h
28
o7,其波普数据见表1,根据该化合物的esims,1h

nmr和
13
c

nmr,确定该化合物并命名为铁皮石斛素z(dendrocandin z)。
[0044]
表1该化合物的1h

nmr和
13
c

nmr数据[cdcl3]
[0045][0046]
实施例3:铁皮石斛素z对癌细胞的体外抑制作用:
[0047]
mtt法检测细胞活性,筛选细胞株有:人肺癌细胞株a549,人乳腺癌细胞株mcf

7,人白血病细胞株hl

60,人结肠癌细胞株sw480,人肝癌细胞株hepg2,人皮肤鳞癌细胞株
a431。通过酶联免疫检测仪(bio

rad 680)读取96孔板孔光吸收值,记录结果,以浓度为横坐标,细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线,应用两点法(reed and muench法)计算化合物ic50值。
[0048]
细胞存活率=(测试组od值

空白组od值)/(正常组od值

空白组od值)*100%,其中测试组指给药组。对于正常组,细胞存活率为100%。
[0049]
结果如图3所示,铁皮石斛素z能够显著抑制人肝癌细胞株hepg2,人皮肤鳞癌细胞株a431和人结肠癌sw480细胞系的生长,并呈浓度依赖性。其中对结肠癌sw480细胞抑制作用较强。
[0050]
本发明首次从铁皮石斛茎中分离得到铁皮石斛素z,该化合物结构新颖,具有多种生物活性,尤其是较好的抗肿瘤活性,为进一步研究药用植物铁皮石斛提供重要的启示,可用于抗癌药物的研发制备。本发明制备方法简单,制备成本较低,应用情景广阔。
[0051]
最后说明的是,以上优选实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述,但本领域技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

技术特征:
1.一种铁皮石斛素,其特征在于:具有如下结构:该化合物命名为铁皮石斛素z(dendrocandin z),其分子式为c
26
h
28
o7。2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛素的制备方法,其特征在于:具体包括以下的步骤:1)采集铁皮石斛茎,阴干后粉碎,过筛(40目)作为原料;2)将步骤1)所得原料浸泡于乙醇中过夜,反复浸泡3次,减压蒸馏,浓缩后获得浸膏;3)将步骤2)所得浸膏溶于蒸馏水中,用乙酸乙酯进行萃取,回收溶剂,采用氯仿

甲醇

水对乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离,梯度洗脱,收集其中体积比为10:1:0.2氯仿

甲醇

水溶液洗脱得到的洗脱液ⅰ。4)洗脱液ⅰ经硅胶柱色谱先用丙酮溶液进行梯度洗脱再用甲醇洗脱,洗脱后回收溶剂,得到洗脱液ⅰ的浸膏;5)得到洗脱液ⅰ的浸膏用mci拌样,用50%的甲醇梯度洗脱,减压浓缩后回收溶剂,得到10份浓缩液分别为a

j;6)h部分经硅胶柱色谱用氯仿

甲醇溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为10:1的氯仿

甲醇溶液洗脱得到的洗脱液ⅱ;7)洗脱液ⅱ用硅胶拌样,上硅胶h柱,经硅胶柱色谱用石油醚

乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱,收集其中体积比为2:1的石油醚

乙酸乙酯溶液洗脱得到的洗脱液ⅲ;8)洗脱液ⅲ经高效液相色谱仪纯化得到化合物铁皮石斛素z,流动相为体积比2:1的ch3oh

h2o。3.根据权利要求2所述的一种铁皮石斛素的制备方法,其特征在于:步骤2)中,原料与乙醇溶液的质量比为1:8。4.根据权利要求2所述的一种铁皮石斛素的制备方法,其特征在于:步骤3)中,浸膏与蒸馏水的质量比为1:1。5.根据权利要求2所述的一种铁皮石斛素的制备方法,其特征在于:步骤3)中,浸膏溶液与乙酸乙酯的质量比为1:2。6.根据权利要求2所述的一种铁皮石斛素的制备方法,其特征在于:柱层析硅胶为200

300目。7.根据权利要求1所述的铁皮石斛素在制备抗癌药物组合物或抗癌制剂中的应用。8.根据权利要求1所述的铁皮石斛素在抑制人肝癌细胞株hepg2、人皮肤鳞癌细胞株a431或结肠癌sw480细胞系生长药物组合物或制剂中的应用。
技术总结
本发明涉及一种铁皮石斛素及其制备方法,属于药物和植物化学技术领域,本发明提供的铁皮石斛素Z(Dendrocandin Z),其分子式为C


技术研发人员:字成庭 盛军 王宣军 张宁 杨豪男 袁文娟 乔妙 孙秀丽
受保护的技术使用者:云南农业大学
技术研发日:2021.03.26
技术公布日:2021/6/29

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