本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法。
背景技术：
依折麦布(ezetimibe)，化学名为1-(4-氟苯基)-3(r)-[3-(4-氟苯基)-3(s)-羟丙基]-4(s)-(4-羟苯基)-2-吖丁啶(氮杂环丁烷)酮，其化学结构式如下：
依折麦布是首个获得fda批准的胆固醇吸收选择性抑制剂类药物，适用于治疗原发性高胆固醇血症、纯合子家族性高胆固醇血症、纯合子谷甾醇血症(或植物甾醇血症)，是一种饮食控制以外的辅助治疗药品。将其与他汀类药物联合应用，可作为其他将血脂治疗的辅助疗法，具有很好的治疗效果。
然而，研究发现a物质、b物质与依折麦布在化学结构式上十分的相近，a物质、b物质的药物活性却与依折麦布有着较大的区别，影响着依折麦布的活性和稳定性，a物质和b物质是影响依折麦布的活性和稳定性的关键性杂质，a物质和b物质化学结构式如下：
因此，对于依折麦布合成过程中引入的杂质，在原料药中需进行质量控制；到目前为止，未见到文献报道对a物质、b物质进行测定的方法。因此，亟待一种测定方法实现依折麦布与a物质、b物质的测定分离，该方法在依折麦布的合成及其质量控制方面具有重要应用价值。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，该方法能够实现依折麦布与a物质、b物质的分离测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，能够用于依折麦布片中a物质和b物质质量控制，具有较大的应用价值和经济价值。
为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，包括以下步骤：
取系统适用性溶液、灵敏度溶液、对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，并根据液相色谱图分析测定依折麦布片中含有a物质的含量和含有b物质的含量。
本发明提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，该方法能够实现依折麦布与a物质、b物质的分离测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，能够用于依折麦布片中a物质和b物质质量控制，具有较大的应用价值和经济价值。
作为优选技术方案，所述系统适用性溶液通过a物质、b物质和依折麦布片置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述依折麦布浓度为0.9～1.1mg/ml，所述a物质和所述b物质的浓度分别为1.8～2.2μg/ml。
作为优选技术方案，所述供试品溶液通过取待测定的依折麦布片置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述供试品溶液浓度为10～12mg/ml。
作为优选技术方案，所述对照溶液通过量取供试品溶液置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述对照溶液浓度为0.05～0.06g/ml。
作为优选技术方案，所述灵敏度溶液通过量取对照溶液置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述灵敏度溶液浓度为5～6μg/ml。
作为优选技术方案，所述稀释剂通过取乙腈、甲醇、冰醋酸和水按体积比为27：10：0.1：63混匀配制得到。
作为优选技术方案，所述液相色谱仪的色谱柱中的流动相为乙腈-甲醇-水混合溶液，所述乙腈-甲醇-水混合溶液按乙腈、甲醇和水体积比为27：10：63混匀制备得到。
作为优选技术方案，所述液相色谱仪的色谱柱的流动相流速为2.0ml/min，检测波长为248nm，色谱柱柱温为30℃，进样量为60μl。
作为优选技术方案，所述液相色谱仪的色谱柱中填充有填充剂，所述填充剂为硅胶微球键合五氟代苯基。
作为优选技术方案，
所述a物质的化学结构式为
所述b物质的化学结构式为
本发明提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，具有以下有益效果：
该方法能够实现依折麦布与a物质、b物质的分离测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，能够用于依折麦布片中a物质和b物质质量控制，具有较大的应用价值和经济价值。
附图说明
图1为本发明提供的灵敏度溶液的液相色谱图；
图2为本发明提供的系统适用性溶液的液相色谱图；
图3为本发明提供的对照溶液的液相色谱图；
图4为本发明提供的供试品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图详细说明本发明的优选实施方式。
可以理解，本发明是通过一些实施例达到本发明的目的，本发明提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，包括以下步骤：
s1配制稀释剂溶液
取乙腈、甲醇、冰醋酸和水，按乙腈、甲醇、冰醋酸和水体积比为27：10：0.1：63比例混匀，配制得到稀释剂溶液；
s2配制流动相溶液
取乙腈、甲醇和水，按乙腈、甲醇和水体积比为27：10：63比例混匀，配制得到流动相溶液；
s3配制供试品溶液
取待测定的依折麦布片适量置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到供试品溶液，所述供试品溶液浓度为10～12mg/ml；
s4配制对照溶液
量取供试品溶液适量置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到对照溶液，所述对照溶液浓度为0.05～0.06g/ml；
s5配制灵敏度溶液
量取对照溶液适量置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制灵敏度溶液，所述灵敏度溶液浓度为5～6μg/ml；
s6配制系统适用性溶液；
取依折麦布、a物质和b物质适量置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制系统适用性溶液，系统适用性溶液中依折麦布浓度为0.9～1.1mg/ml，系统适用性溶液中a物质和b物质浓度分别为1.8～2.2μg/ml；
s7色谱分析测定
取系统适用性溶液、灵敏度溶液、对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，并根据液相色谱图分析测定依折麦布片中a物质含量和b物质含量。
在一些实施例中，液相色谱仪采用的色谱柱为phenomenexpfp柱，该色谱柱的规格为长度150mm，内径4.6mm，粒径5μm；
在一些实施例中，色谱柱采用硅胶微球键合五氟代苯基作为填充剂。
在一些实施例中，该方法的色谱条件为：色谱柱中的流动相为乙腈-甲醇-水混合溶液，流速为2.0ml/min，检测波长为248nm，色谱柱柱温为30℃，进样量为60μl。
通过具体实施例说明本发明提供的一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法。
1.采用的实验仪器和实验条件
实验仪器：液相色谱仪；
检测器：紫外检测器；
色谱柱：硅胶微球键合五氟代苯基作为填充剂(phenomenexpfp150×4.6mm，5μm或效能相当的色谱柱)；
流动相的体积比(v：v)：乙腈-甲醇-水＝27：10：63；
稀释剂的体积比(v：v)：乙腈-甲醇-冰醋酸-水＝27：10：0.1：63；
检测波长：248nm；
色谱柱的柱温：30℃；
流速：2.0ml/min；
进样体积：60μl。
2.实验步骤
s201用稀释剂溶解配制含依折麦布1mg/ml，a物质2μg/ml和b物质2μg/ml的混合溶液配制得到系统适用性溶液；
s202取待测定的依折麦布片细粉适量，用稀释剂溶解，配制成每1ml含依折麦布10mg的溶液配制得到供试品溶液；
s203精密量取供试品溶液0.5ml，置于100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀配制得到对照溶液；
s204精密量取对照溶液1.0ml，置于10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀配制得到灵敏度溶液。
s205分别取系统适用性溶液、灵敏度溶液、对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱实验条件进行测定，结果见图1-4。
3.检测结果
液相色谱仪检测得到的液相色谱图，如图1-4所示，量取系统适用性溶液60μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为a物质、b物质、依折麦布，主峰与相邻杂质的分离度应不低于1.5，本实施例中主峰与相邻杂质的分离度为2.1，理论板数按依折麦布峰计算不低于5000，本实施例中依折麦布峰为6281。
量取灵敏度溶液60μl注入液相色谱仪，记录色谱图，主峰的信噪比应不低于10:1，本实施例中主峰的信噪比为25.32。
量取供试品溶液和对照溶液各60μl，分别注入液相色谱仪。依折麦布片中有关物质的含量计算公式为：
式中：
a已知：供试品溶液中已知单个杂质的峰面积；
a对照：对照溶液主峰面积；
v对照：对照溶液的稀释倍数；
按照上述公式以及各个色谱图结果，计算如下：
依折麦布片中a物质的含量为0.03％，依折麦布片中b物质的含量为0.01％。
本实施例提供一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，该方法能够实现依折麦布与a物质、b物质的分离测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，能够用于依折麦布片中a物质和b物质质量控制，具有较大的应用价值和经济价值。
可以理解，本发明是通过一些实施例进行描述的，本领域技术人员知悉的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等效替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围各种改变或等效替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明所保护的范围内。
1.一种依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
取系统适用性溶液、灵敏度溶液、对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，并根据液相色谱图分析测定依折麦布片中含有a物质的含量和含有b物质的含量。
2.根据权利要求1所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述系统适用性溶液通过a物质、b物质和依折麦布片置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述依折麦布浓度为0.9～1.1mg/ml，所述a物质和所述b物质的浓度分别为1.8～2.2μg/ml。
3.根据权利要求2所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述供试品溶液通过取待测定的依折麦布片置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述供试品溶液浓度为10～12mg/ml。
4.根据权利要求3所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述对照溶液通过量取供试品溶液置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述对照溶液浓度为0.05～0.06g/ml。
5.根据权利要求4所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述灵敏度溶液通过量取对照溶液置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度配制得到，所述灵敏度溶液浓度为5～6μg/ml。
6.根据权利要求2所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述稀释剂通过取乙腈、甲醇、冰醋酸和水按体积比为27：10：0.1：63混匀配制得到。
7.根据权利要求1所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述液相色谱仪的色谱柱中的流动相为乙腈-甲醇-水混合溶液，所述乙腈-甲醇-水混合溶液按乙腈、甲醇和水体积比为27：10：63混匀制备得到。
8.根据权利要求7所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述液相色谱仪的色谱柱的流动相流速为2.0ml/min，检测波长为248nm，色谱柱柱温为30℃，进样量为60μl。
9.根据权利要求1所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，所述液相色谱仪的色谱柱中填充有填充剂，所述填充剂为硅胶微球键合五氟代苯基。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的依折麦布片有关物质的液相色谱测定方法，其特征在于，
所述a物质的化学结构式为
所述b物质的化学结构式为
