重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法与流程

专利2022-05-09  7



1.本发明涉及分析化学技术领域,尤其是涉及一种重酒石酸间羟胺 非对映异构体的检测方法。


背景技术:

2.重酒石酸间羟胺(metaraminol bitartrate)为间羟胺的重酒石酸 盐,是美国fresenius kabi公司研发的一种α-肾上腺素受体激动药, 主要作用于α受体,适用于休克早期的治疗,防治椎管内阻滞麻醉时 发生的急性低血压。
3.由于重酒石酸间羟胺中的间羟胺存在两个手性碳原子,从而使其 存在(1r,2s)、(1s,2r)、(1r,2r)和(1s,2s)四种构型,其中(1r,2s) 为有效构型,(1s,2r)为其对映异构体,(1r,2r)和(1s,2s)为其 非对映异构体。
4.间羟胺的四种构型结构分别如下:
5.(1r,2s)构型:
6.(1s,2r)构型:
7.(1r,2r)构型:
8.(1s,2s)构型:
9.鉴于不同的异构体的药理和毒理特性不一致,故需要对注射液中 的异构体杂质进行测定,并设定合理的限度,以保证产品的安全和有 效。目前usp42仅收载了重酒石酸间羟胺原料药的间羟胺的对映异 构体的分离检测方法,未对两个非对映异构体进行控制。故为了全面 地监控重酒石酸间羟胺原料药和注射液中异构体的存在和转化情况, 需要单独开发色谱方法。
10.有鉴于此,特提出本发明。


技术实现要素:

11.本发明的主要目的在于提供一种重酒石酸间羟胺非对映异构体 的检测方法,以期至少部分地解决上述技术问题中的至少之一。
12.本发明提供了一种重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,采 用高效液相色谱法,色谱条件包括:采用苯基硅烷键合硅胶填充剂的 色谱柱;以烷基磺酸钠溶液-乙腈为流动相;等度洗脱。
13.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液与乙腈的体积比为(925-975): (25-75)。
14.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液与乙腈的体积比为950:50。
15.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液的ph=4.0-5.0。
16.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液的ph=4.3-4.7。
17.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液的ph=4.5。
18.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液的浓度为0.005-0.02mol/l。
19.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液的浓度为0.01mol/l。
20.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液中含有0.1-0.12vol%的三乙胺。
21.进一步的,所述烷基磺酸钠溶液中含有0.105vol%的三乙胺。
22.进一步的,所述烷基磺酸钠为辛烷磺酸钠。
23.进一步的,所用紫外检测器检测,检测波长为205-215nm。
24.进一步的,所用紫外检测器检测,检测波长为210nm。
25.进一步的,所用柱温为20-30℃。
26.进一步的,所用柱温为25℃。
27.进一步的,所用流速为1.8-2.2ml/min。
28.进一步的,所用流速为2.0ml/min。
29.进一步的,采用高效液相色谱法,色谱条件包括:采用苯基硅烷 键合硅胶填充剂的色谱柱;紫外检测器检测,检测波长为210nm;以 0.01mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.105vol%的三乙胺,磷酸调节 ph=4.5)-乙腈为流动相,两者的体积比为950:50;等度洗脱。
30.与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
31.本发明提供的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,根据间 羟胺及其非对映异构体的理化性质,通过对色谱柱以及流动相的优化 设计,使各成分峰保留时间及分离度显著改善,达到间羟胺与非对映 异构体的有效分离。且经过系统方法学验证,专属性强、灵敏度高, 可用于重酒石酸间羟胺原料药和注射液中非对映异构体的检测,有效 控制本品非对映异构体的水平,保证其用药安全性。
附图说明
32.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方 案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简 单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式, 对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可 以根据这些附图获得其他的附图。
33.图1为实施例1-1中非对映异构体的hplc谱图;
34.图2为实施例1-1中供试品的hplc谱图;
35.图3为实施例1-1中供试品 非对映异构体的hplc谱图;
36.图4为实施例2中非对映异构体的检测限的hplc谱图;
37.图5为实施例2中非对映异构体的定量限的hplc谱图;
38.图6为实施例3中ph值为4.3的供试品 非对映异构体的hplc 谱图;
39.图7为实施例3中ph值为4.7的供试品 非对映异构体的hplc 谱图;图8为对照实施例中非对映异构体的hplc谱图;图9为对照实施例中供试品 非对映异构体的hplc谱图。
具体实施方式
40.下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领 域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限 制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常 规产品。
41.重酒石酸间羟胺,间羟胺非对映异构体对照品,来自malladi drugs&pharmaceuticals ltd.。
42.重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测
43.实施例1专属性试验
44.非对映异构体对照品溶液:精密称取间羟胺非对映异构体对照 品适量,加流动相溶解并稀释制成每1ml含20μg的溶液,作为非对 映异构体对照品溶液。
45.供试品溶液:精密称取重酒石酸间羟胺40mg,置10ml量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
46.供试品 非对映异构体对照品溶液:精密称取重酒石酸间羟胺 40mg,置10ml量瓶中,加浓度为20μg/ml的非对映异构体对照品 溶液3ml,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品 非对映异构体 对照品溶液。
47.实施例1-1
48.色谱条件:
49.色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
50.流动相:以0.01mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.105vol%的三乙 胺,磷酸调节ph=4.5)-乙腈为流动相,两者的体积比为950:50;
51.检测波长:紫外检测器,检测波长为210nm;
52.柱温:25℃;
53.流速:2.0ml/min;
54.进样量:20μl;
55.等度洗脱。
56.非对映异构体的hplc谱图如图1所示。
57.由图1可知,非对映异构体的保留时间为20.060min。
58.供试品的hplc谱图如图2所示。
59.由图2可知,间羟胺的保留时间为17.105min。
60.供试品 非对映异构体的hplc谱图如图3所示,检测数据如表 1所示。
61.表1供试品 非对映异构体检测结果
[0062][0063]
由图3和表1可知,间羟胺与非对映异构体之间的分离度大于2, 符合要求,在本发明的色谱条件下的检测方法能够将间羟胺与非对映 异构体完全分离。
[0064]
实施例1-2
[0065]
色谱条件:
[0066]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0067]
流动相:以0.02mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.12vol%的三乙胺, 磷酸调节ph=5.0)-乙腈为流动相,两者的体积比为925:75;
[0068]
检测波长:紫外检测器,检测波长为205nm;
[0069]
柱温:20℃;
[0070]
流速:1.8ml/min;
[0071]
进样量:20μl;
[0072]
等度洗脱。
[0073]
供试品 非对映异构体检测数据如表2所示。
[0074]
表2供试品 非对映异构体检测结果
[0075][0076]
由表2可知,间羟胺与非对映异构体之间的分离度大于2,符合 要求,在本发明的色谱条件下的检测方法能够将间羟胺与非对映异构 体完全分离。
[0077]
实施例1-3
[0078]
色谱条件:
[0079]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0080]
流动相:以0.005mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.1vol%的三乙胺, 磷酸调节ph=4.0)-乙腈为流动相,两者的体积比为975:25;
[0081]
检测波长:紫外检测器,检测波长为215nm;
[0082]
柱温:30℃;
[0083]
流速:2.2ml/min;
[0084]
进样量:20μl;
[0085]
等度洗脱。
[0086]
供试品 非对映异构体检测数据如表3所示。
[0087]
表3供试品 非对映异构体检测结果
[0088][0089]
由表3可知,间羟胺与非对映异构体的分离度大于2,符合要求, 在本发明的色谱条件下的检测方法能够将间羟胺与非对映异构体完 全分离。
[0090]
实施例1-4
[0091]
色谱条件:
[0092]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0093]
流动相:以0.007mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.118vol%的三乙 胺,磷酸调节ph=4.3)-乙腈为流动相,两者的体积比为960:40;
[0094]
检测波长:紫外检测器,检测波长为208nm;
[0095]
柱温:27℃;
[0096]
流速:2.1ml/min;
[0097]
进样量:20μl;
[0098]
等度洗脱。
[0099]
供试品 非对映异构体检测数据如表4所示。
[0100]
表4供试品 非对映异构体检测结果
[0101][0102]
由表4可知,间羟胺与非对映异构体之间的分离度大于2,符合 要求,在本发明的色谱条件下的检测方法能够将间羟胺与非对映异构 体完全分离。
[0103]
实施例1-5
[0104]
色谱条件:
[0105]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0106]
流动相:以0.018mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.113vol%的三乙 胺,磷酸调节ph=4.7)-乙腈为流动相,两者的体积比为940:60;
[0107]
检测波长:紫外检测器,检测波长为212nm;
[0108]
柱温:23℃;
[0109]
流速:1.9ml/min;
[0110]
进样量:20μl;
[0111]
等度洗脱。
[0112]
供试品 非对映异构体检测数据如表5所示。
[0113]
表5供试品 非对映异构体检测结果
[0114][0115]
由表5可知,间羟胺与非对映异构体之间的分离度大于2,符合 要求,在本发明的色谱条件下的检测方法能够将间羟胺与非对映异构 体完全分离。
[0116]
实施例2灵敏度试验
[0117]
非对映异构体对照品溶液:精密称取间羟胺非对映异构体对照 品适量,加流动相溶解并稀释制成每1ml含20μg的溶液,作为非对 映异构体对照品溶液。
[0118]
定量限溶液:精密量取非对映异构体对照品溶液0.5ml,置10ml 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为定量限溶液。
[0119]
检测限溶液:精密量取非对映异构体对照品溶液0.2ml,置10ml 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为检测限溶液。
[0120]
色谱条件:
[0121]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0122]
流动相:以0.01mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.105vol%的三乙 胺,磷酸调节ph=4.5)-乙腈为流动相,两者的体积比为950:50;
[0123]
检测波长:紫外检测器,检测波长为210nm;
[0124]
柱温:25℃;
[0125]
流速:2.0ml/min;
[0126]
进样量:20μl;
[0127]
等度洗脱。
[0128]
非对映异构体的检测限的hplc谱图如图4所示,检测数据如表 6所示。
[0129]
表6非对映异构体的检测限检测结果
[0130][0131]
由图4和表6可知,非对映异构体在检测限为0.4μg/ml时,信 噪比大于3,说明在本发明的色谱条件下的检测方法灵敏度高。
[0132]
非对映异构体的定量限的hplc谱图如图5所示,检测数据如表 7所示。
[0133]
表7非对映异构体的定量限检测结果
[0134][0135]
由图5和表7可知,非对映异构体在定量限为1μg/ml时,信噪 比大于10,说明在本发明的色谱条件下的检测方法灵敏度高。
[0136]
实施例3耐用性试验
[0137]
非对映异构体对照品溶液:精密称取间羟胺非对映异构体对照 品适量,加流动相
溶解并稀释制成每1ml含20μg的溶液,作为非对 映异构体对照品溶液。
[0138]
供试品溶液:精密称取重酒石酸间羟胺40mg,置10ml量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
[0139]
供试品 非对映异构体对照品溶液:精密称取重酒石酸间羟胺 40mg,置10ml量瓶中,加浓度为20μg/ml的非对映异构体对照品 溶液3ml,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品 非对映异构体 对照品溶液。
[0140]
色谱条件:
[0141]
色谱柱:zorbax sb phenyl(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0142]
流动相:以0.01mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.105vol%的三乙 胺,磷酸调节ph)-乙腈为流动相,两者的体积比为950:50;
[0143]
检测波长:紫外检测器,检测波长为210nm;
[0144]
柱温:25℃;
[0145]
流速:2.0ml/min;
[0146]
进样量:20μl;
[0147]
等度洗脱。
[0148]
检测波长、柱温、流速和ph值条件:
[0149]
条件检测波长(nm)柱温(℃)流速(ml/min)ph值实施例3-1a210252.04.3实施例3-1b210252.04.7
[0150]
ph值为4.3的供试品 非对映异构体的hplc谱图如图6所示, 检测数据如表8所示。
[0151]
表8ph值为4.3的供试品 非对映异构体检测结果
[0152][0153]
ph值为4.7的供试品 非对映异构体的hplc谱图如图7所示, 检测数据如表9所示。
[0154]
表9ph值为4.7的供试品 非对映异构体检测结果
[0155][0156]
由图6-7,表8-9可知,在本发明的色谱条件下,在ph值稍作 改变时,非对映异构体能够很好地检出,说明在本发明的色谱条件下 的检测方法耐用性良好。
[0157]
流速、柱温和波长等稍作改变时非对映异构体也能够很好地检出, 在此不再赘述。
[0158]
对照实施例
[0159]
非对映异构体对照品溶液:精密称取间羟胺非对映异构体对照 品适量,加水溶解并稀释制成每1ml含5μg的溶液,作为非对映异 构体对照品溶液。
[0160]
供试品 非对映异构体对照品溶液:精密称取重酒石酸间羟胺 20mg,置10ml量瓶中,用非对映异构体对照品溶液稀释至刻度, 摇匀,作为供试品 非对映异构体对照品溶液。
[0161]
色谱条件:
[0162]
色谱柱:waters xbridge shield rp18(4.6mm
×
150mm,5μm);
[0163]
流动相:流动相a:0.2wt%辛烷磺酸钠溶液(磷酸调节ph=3.4)
ꢀ-
乙腈,两者的体积比为80:20;流动相b:0.2wt%辛烷磺酸钠溶液(磷 酸调节ph=3.4)-乙腈,两者的体积比为20:80;
[0164]
检测波长:紫外检测器,检测波长为210nm;
[0165]
柱温:25℃;
[0166]
流速:1.0ml/min;
[0167]
进样量:10μl;
[0168]
按照下表进行梯度洗脱:
[0169]
时间(min)流动相a(%)流动相b(%)01000151000305050505050511000601000
[0170]
非对映异构体的hplc谱图如图8所示。
[0171]
由图8可知,非对映异构体的保留时间为9.931min。
[0172]
供试品 非对映异构体的hplc谱图如图9所示。
[0173]
由图9可知,间羟胺与非对映异构体的保留时间均为9.613min, 间羟胺与非对映异构体重合,无法分离。
[0174]
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案, 而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明, 本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记 载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等 同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本 发明各实施例技术方案的范围。

技术特征:
1.一种重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,采用高效液相色谱法,色谱条件包括:采用苯基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱;以烷基磺酸钠溶液-乙腈为流动相;等度洗脱。2.根据权利要求1所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所述烷基磺酸钠溶液与乙腈的体积比为(925-975):(25-75)。3.根据权利要求1所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所述烷基磺酸钠溶液的ph=4.0-5.0。4.根据权利要求1所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所述烷基磺酸钠溶液的浓度为0.005-0.02mol/l。5.根据权利要求1所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所述烷基磺酸钠溶液中含有0.1-0.12vol%的三乙胺。6.根据权利要求1-5任一项所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所述烷基磺酸钠为辛烷磺酸钠。7.根据权利要求6所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所用紫外检测器检测,检测波长为205-215nm。8.根据权利要求7所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所用柱温为20-30℃。9.根据权利要求8所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,所用流速为1.8-2.2ml/min。10.根据权利要求9所述的重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,其特征在于,采用高效液相色谱法,色谱条件包括:采用苯基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱;紫外检测器检测,检测波长为210nm;以0.01mol/l辛烷磺酸钠溶液(含有0.105vol%的三乙胺,磷酸调节ph=4.5)-乙腈为流动相,两者的体积比为950:50;等度洗脱。
技术总结
本发明提供了一种重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,涉及分析化学技术领域。重酒石酸间羟胺非对映异构体的检测方法,采用高效液相色谱法,色谱条件包括:采用苯基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱;以烷基磺酸钠溶液


技术研发人员:马向霞 王宏玲 郭志强
受保护的技术使用者:天津药业研究院股份有限公司
技术研发日:2019.12.30
技术公布日:2021/7/15

转载请注明原文地址:https://doc.8miu.com/read-650127.html

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