本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及日本鳗鲡转录因子ap-1启动子及其应用。
背景技术：
激活蛋白-1（activatorprotein-1,ap-1）是一类细胞生长和分化最为关键的核转录因子，是由jun、fos、atf和maf蛋白家族组成的同源二聚体或异源二聚体，其中最为重要和典型的ap-1是由c-jun和c-fos两个亚单位组成的异源二聚体（hessj,angelp,schorpp-kistnerm.ap-1subunits:quarrelandharmonyamongsiblings.jcellsci2004;117(pt25):5965-73.）。主要通过其高度保守的碱性亮氨酸拉链（basicleucinezipper,bzip）与dna结合，参与多种生长因子和细胞因子的基因转录调控，以应对包括细菌、病毒感染、细胞因子、生长因子以及环境压力等多种刺激对细胞的影响，从而在细胞的增殖、炎症、分化、凋亡、转化和迁移等过程发挥重要作用（shauliane,karinm.ap-1asaregulatorofcelllifeanddeath.natcellbiol2002;4(5):e131-136.）。ap-1转录因子可被多种因素激活，包括趋化因子、生长因子、细胞因子、激素及环境压力。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases,mapks）是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，主要包括3个亚家族，分别为细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal-regulatedkinases,erks)，jnks和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mapk)。mapks被激活后，能够调控下游转录因子诱导jun和fos基因转录，从而增加ap-1复合物的表达，活化ap-1（brandtb,abou-eladabef,tiedgem,walzelh.roleofthejnk/c-jun/ap-1signalingpathwayingalectin-1-inducedt-celldeath.celldeathdis2010;1:e23.）。硬骨鱼类作为低等脊椎动物也拥有相对完善的mapk信号通路免疫应答系统（li,m.-y.,l.sun,x.-t.niu,x.-m.chen,j.-x.tian,y.-d.kongandg.-q.wang(2019).astaxanthinprotectslipopolysaccharide-inducedinflammatoryresponseinchannaargusthroughinhibitingnf-kappabandmapkssignalingpathways."fish&shellfishimmunology86:280-286.）。
目前，c-jun在哺乳动物中的功能已被广泛研究，但其在低等脊椎动物中的报道还十分有限，少数涉及硬骨鱼类的c-jun和c-fos基因克隆与分析的研究虽然已有报道，但有关鱼类ap-1基因启动子方面的转录调控机制研究尚未见报道（xu,l.,y.chen,q.li,t.heandx.chen(2020)."999-molecularcloningandfunctionalcharacterizationofc-juninlargeyellowcroaker(larimichthyscrocea)."fish&shellfishimmunology98:981-987.）。
目前，免疫相关功能基因的表达调控已成为分子生物学研究领域的热点，而对于基因表达调控重要元件启动子的研究尤为重要。鉴于鱼类ap-1在抗细菌和病毒免疫及其病害防治中的重要性，研究其基因表达调控机制将为通过调节ap-1的表达来防治鱼类细菌和病毒病提供新的思路。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子及其应用，解决了上述背景技术中的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：提供了日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子，其核苷酸序列如seqidno：1所示。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：提供了含有上述启动子的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。
优选地，所述表达盒由上述的启动子、由上述启动子启动转录的目的基因和终止子组成。
优选地，所述重组载体为pgl3-basic、pgl2-basic、pgl4.10、pgluc。
优选地，所述重组菌为大肠杆菌、枯草杆菌、乳酸菌、酵母菌。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：提供了上述日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子在构建真核表达载体、鱼类细胞或哺乳动物细胞中高效表达外源基因中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是：提供了上述日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子在构建转基因鱼中的应用。
本申请人成功克隆获得了日本鳗鲡ap-1重要亚基c-jun基因序列。由于启动子是决定基因表达及其调控的关键因素，为研究鱼类ap-1基因的表达调控机制，我们通过日本鳗鲡ap-1开放阅读框序列与日本鳗鲡基因组序列比对分析获得可能的日本鳗鲡ap-1基因5′侧翼调控区序列，设计引物进行pcr克隆验证获得日本鳗鲡ap-1基因启动子序列，利用基因5′侧翼区转录因子结合位点在线预测软件
alibaba2（http://gene-regulation.com/pub/programs/alibaba2/index.html）对日本鳗鲡ap-1基因启动子序列进行潜在的转录因子结合位点预测，分析表明该ap-1基因启动子存在多个转录因子结合位点，如irf1、nf-κb、c/ebpβ、sp1等，具有复杂的表达调控机制。经报告基因检测实验证明了该日本鳗鲡ap-1基因启动子具有较强的启动子活性。因此，日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析，为研究鱼类转录因子ap-1基因的表达调控机制以及重要的鱼类炎症相关mapk信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统，在应用方面为利用该启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造条件，具有重要的理论和实际意义。
本发明具有如下有益效果：
本发明通过日本鳗鲡转录因子ap-1基因开放阅读框第一外显子序列比对分析日本鳗鲡基因组，采用降落pcr方法对分析预测ap-1基因5’侧翼区序列进行克隆，获得了日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子序列；经报告基因分析实验证明日本鳗鲡ap-1基因启动子可被病毒模拟物polyi:c、革兰氏阴性菌大肠杆菌重要表面抗原lps以及水产动物重要致病菌嗜水气单胞菌诱导激活，进一步研究发现重要信号通路炎症调控因子caspase-1能够显著上调日本鳗鲡ap-1基因启动子的荧光素酶活性。因此，该日本鳗鲡ap-1基因启动子的克隆及其强启动子活性的验证，在理论上将为研究鱼类转录因子ap-1基因的表达调控机制以及重要的鱼类炎症相关mapk信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统，在应用方面可以利用该启动子构建表达载体后高效表达外源基因，或将该启动子应用于转基因鱼的构建，具有重要的理论和实际意义。
附图说明
图1为ap-1基因启动子转录因子sp1、c/ebpβ结合位点示意图；
图2为ap-1基因启动子转录因子irf1、nf-κb结合位点示意图；
图3为采用双荧光素酶报告基因检测系统定量分析日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性图。
其中，横坐标pgl3表示空载体pgl3-basic转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为对照组）；
pgl3-ap1-pro为荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为实验组）。
如图3所示，重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的4.3倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可以较好地启动荧光素酶报告基因的转录。
图4为在病毒模拟物人工合成双链rnapolyi:c（50μg/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化图。
其中，横坐标pgl3-basic表示空载体pgl3-basic转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为对照组）；
pgl3-ap1-pro为荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为实验组）。
如图4所示，经polyi:c刺激24h后重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的4.7倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被polyi:c诱导激活。
图5为在革兰氏阴性菌大肠杆菌重要表面抗原lps（30μg/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化图。
其中，横坐标pgl3-basic表示空载体pgl3-basic转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为对照组）；
pgl3-ap1-pro为荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为实验组）。
如图5所示，经lps刺激24h重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的5.5倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被lps诱导激活。
图6为在水产动物重要致病菌嗜水气单胞菌（106cfu/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化图。
其中，横坐标pgl3-basic表示空载体pgl3-basic转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为对照组）；
pgl3-ap1-pro为荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞的荧光素酶相对活性（作为实验组）。
如图6所示，经嗜水气单胞菌刺激6h重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的8.4倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被嗜水气单胞菌诱导激活。
图7为信号通路重要炎症因子caspase-1过表达条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化图。
其中，横坐标pcdna3.1表示空载体pcdna3.1、荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro以及海肾荧光素酶报告基因载体prl-tk共同转染epc细胞24h后的荧光素酶相对活性（作为对照组）；
横坐标pcdna-caspase1表示真核表达质粒pcdna-caspase1、荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro以及海肾荧光素酶报告基因载体prl-tk共同转染epc细胞24h后的荧光素酶相对活性（作为实验组）。
如图7所示，与pcdna3.1空载体相比较，信号通路重要炎症因子真核表达质粒pcdna-caspase1转染epc细胞后，能够显著上调pgl3-ap1-pro启动子荧光素酶活性高达235.9倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被炎症因子caspase-1正向调控并激活。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例和附图对本发明做进一步的详细说明，但本领域技术人员了解，下述实施例不是对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上做出的改变和变化，都在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1日本鳗鲡ap-1基因启动子的克隆
一、采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkitver.5.0试剂盒对日本鳗鲡肌肉组织基因组dna进行提取和纯化。具体操作如下：
取10mg的日本鳗鲡肌肉组织用刀片切碎后置于2ml离心管中，加入180μl的buffergl、20μl的proteinasek和10μl的rnasea（10mg/ml），于56℃水浴温浴过夜裂解。
向裂解液中加入200μlbuffergb和200μl100%乙醇，充分吸打混匀。将spincolumn安置于collectiontube上，溶液移至spincolumn中，12,000rpm离心2分钟，弃滤液。
将500μl的bufferwa加入至spincolumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液。
将700μl的bufferwb（用之前加入指定体积的100%乙醇）沿管壁四周加入至spincolumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液。再次将700μl的bufferwb沿管壁四周加入至spincolumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液。
将spincolumn安置于collectiontube上，12,000rpm离心2分钟。将spincolumn安置于新的1.5ml的离心管上，在spincolumn膜的中央处加入加热至65℃的150μl的灭菌水室温静置5分钟。12,000rpm离心2分钟洗脱dna。
提取得到的基因组dna进行吸光度测定其浓度。
二、采用两轮降落pcr的方法扩增出日本鳗鲡ap-1基因启动子序列。具体步骤如下：
通过日本鳗鲡转录因子ap-1基因开放阅读框第一外显子序列（如seqidno：2所示）比对分析日本鳗鲡基因组，对分析预测具有ap-1基因5’侧翼区序列进行扩增，上游引物“5'-catcgttgttcaccgcatcac-3'”为ap-1基因5’侧翼区序列，下游引物“5'-gccgttgcttgattggatga-3'”为ap-1基因开放阅读框第一外显子序列，由上海生物工程公司合成。
第一轮pcr采用takara公司高保真酶2×primestar®gcbuffer(mg2 plus)进行扩增，反应体系：2×primestarhsdnapolymerase12.5μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、gdna0.5μl、灭菌水11μl；降落pcr反应程序为95℃5min；95℃30s，62℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，60℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，58℃30s，72℃4min，30个循环；72℃10min；4℃5min。
第二轮pcr采用takara公司10×extaqbuffer(mg2 plus)进行扩增，反应体系：extaq0.13μl、10×extaqbuffer(mg2 plus)2.5μl、dntpmixture(2.5mmeach)2μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、第一轮pcr产物0.5μl、灭菌水18.87μl；降落pcr反应程序为95℃5min；95℃30s，62℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，60℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，58℃30s，72℃4min，30个循环；72℃10min；4℃5min。
将第二轮pcr扩增得到的pcr产物连接到takara公司pmd19t-simplevector载体进行序列测定与分析，从而获得含有日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子序列的pmd19t-ap1-pro重组质粒。
实施例2日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子序列的转录因子结合位点分析
上网登录基因5′侧翼区转录因子结合位点在线预测软件
alibaba2（http://gene-regulation.com/pub/programs/alibaba2/index.html）
将已经克隆测试验证获得的ap-1基因启动子序列复制后以fasta格式粘贴在对话框内，点击start进行转录因子结合位点的预测分析。部分结果如图1、图2所示。
实施例3日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子的活性分析
一、含有日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子片段的重组荧光素酶报告基因载体pgl3-ap1-pro的构建。
将日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子片段插入promega公司荧光素酶报告基因载体pgl3-basic中，使萤火虫荧光素酶（luciferase）报告基因的表达由日本鳗鲡ap-1基因启动子启动子控制，构建得到的荧光素酶重组载体命名为pgl3-ap1-pro。具体步骤如下：
合成带有smai酶切位点的上游引物：5'-cccgggcatcgttgttcac-3'，和带有hindⅲ酶切位点的下游引物：5'-aagcttagaagagtaaccaaaactcagttc-3'。
采用takara公司高保真酶2×primestar®gcbuffer（mg2 plus）进行扩增，反应体系：2×primestarhsdnapolymerase12.5μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、pmd19t-ap1-pro重组质粒0.5μl、灭菌水11μl；降落pcr反应程序为95℃5min；95℃30s，62℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，60℃30s，72℃4min，4个循环；95℃30s，58℃30s，72℃4min，30个循环；72℃10min；4℃5min。用omega公司胶回收试剂盒进行pcr产物回收。
回收后的pcr产物和载体pgl3-basic分别进行smai/hindⅲ双酶切（thermoscientificfermentasfastdigest）。双酶切反应体系总共40µl，包括4µl10×fastdigestgreenbuffer，酶smai及酶hindⅲ各2µl，载体/pcr产物各1.5µg，灭菌水补至40µl，将以上体系于pcr管中混匀后进行酶切反应，反应程序为：37℃，60min；80℃，20min；4℃，5min。用omega公司胶回收试剂盒分别回收上述经smai/hindⅲ双酶切的pcr产物和载体pgl3-basic，并用takara公司t4连接酶连接经双酶切的pcr产物和载体pgl3-basic，连接反应体系为20µl，包括2µl10×t4buffer，1µlt4dna连接酶，40ng双酶切的载体pgl3-basic，300ng双酶切的pcr产物，灭菌水补至20µl，将以上体系于pcr管中混匀后进行16℃连接过夜。
上述连接产物转化大肠杆菌e.colidh5α感受态细胞，经菌落pcr筛选阳性克隆，用omega公司无内毒素小量质粒试剂盒提取质粒，并经测序确认启动子片段插入的正确性，从而获得含有日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子片段的重组荧光素酶报告基因载体pgl3-ap1-pro。
二、采用双荧光素酶报告基因检测系统分析日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子的基础活性。
把状态较好的epc细胞接种至48孔细胞板中（1×105/孔），加入l15培养基（l15基础培养基含有10％gibco澳洲胎牛血清），转入恒温培养箱28℃中过夜培养，使其贴壁并恢复至对数生长期的状态，贴壁量达到80%左右时，进行转染实验。在转染前2h更换细胞培养基。
转染时，按每孔0.5μllipofectamine3000reagent转染试剂和20μlopti-mem低血清培养基配制转染试剂稀释液，混匀后室温孵育5min。再按每孔20μlopti-mem低血清培养基与每孔所需质粒充分混匀，其中对照组含有20ng海肾荧光素酶内参报告基因载体prl-tk、300ng荧光素酶报告基因载体pgl3-basic载体，实验组含有20ng海肾荧光素酶内参报告基因载体prl-tk、300ng重组荧光素酶报告基因载体pgl3-ap1-pro，随后加入0.5μlp3000™试剂并混匀。将所配的质粒稀释液逐滴滴加到转染试剂稀释液中，混匀为转染复合物溶液，室温孵育15min后，缓慢加入epc细胞培养孔，于恒温培养箱（28℃）中培养。
24h后收集转染细胞，用双荧光素酶报告基因检测系统分别读取萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的酶活性值，通过计算二者酶活性值的比值得出转染细胞中荧光素酶的相对活性。荧光素酶酶活测定的方法参考promega公司双萤光素酶报告基因检测系统说明书进行，具体步骤为：
1.配制实验所需试剂：1×plb裂解液：1体积5×passivelysisbuffer加4体积双蒸水混匀配制而成；start试剂（larⅰ）：将luciferaseassaysubstrate粉末完全溶解于10mlluciferaseassaybufferⅱ溶液，用1.5ml离心管分装后，于-80℃冰箱保存；stop试剂：视实验量将1体积的50×stop&glo®substrate用49体积的stop&glo®buffer稀释。
2.缓慢吸去48孔细胞培养板中的细胞培养液，于每孔加入65μl的1×plb裂解液。
3.将48孔细胞培养板置于细胞振荡器上，振荡裂解15min。
4.将裂解后的细胞液转移至1.5ml离心管，离心（13000rpm，4℃，10min）。
5.取3μl离心后的上清液于透光性良好的1.5ml离心管中。
6.加入10μlstart试剂，用glomax20/20发光检测仪检测样品中的萤火虫荧光素酶活性数值。随后加入10μlstop试剂检测样品中的海参荧光素酶活性数值。两者活性的比值即为各样品的荧光素酶相对活性。
每个实验设三次重复，每次重复设三个平行；误差靶代表平均值的标准误差。利用双尾成组t检验统计分析实验组与对照组的显著性差异，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
以空载体pgl3-basic和prl-tk共同转染的epc细胞作为对照组，计算出pgl3-ap1-pro启动子的相对活性（图3）。
如图3所示，重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的4.3倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可以较好地启动荧光素酶报告基因的转录。
三、免疫刺激实验
将pgl3-basic和日本鳗鲡ap-1基因启动子荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro分别与海肾荧光素酶内参报告基因载体prl-tk共同转染epc细胞，转染12h后，在细胞培养液中分别加入polyi:c（50μg/ml）、lps（30μg/ml）以及嗜水气单胞菌（106cfu/ml）进行免疫刺激，分别在刺激12h、12h以及6h后分别收集转染细胞进行荧光素酶相对活性测定。每个实验设三次重复，每次重复设三个平行；误差靶代表平均值的标准误差。利用双尾成组t检验统计分析实验组与对照组的显著性差异，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
在polyi:c（50μg/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化见图4。荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的4.7倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被polyi:c诱导激活，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
在lps（30μg/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化见图5。重组载体pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的5.5倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被lps诱导激活，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
在水气单胞菌（106cfu/ml）刺激条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化见图6。pgl3-ap1-pro转染epc细胞中的荧光素酶相对活性为空载体pgl3-basic转染epc细胞的8.4倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被嗜水气单胞菌诱导激活，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
四、炎症信号因子过表达对日本鳗鲡ap-1的调控作用实验
将空载体pcdna3.1和真核表达质粒pcdna-caspase1分别与荧光素酶重组载体pgl3-ap1-pro、海肾荧光素酶报告基因载体prl-tk共同转染epc细胞24h后收集转染细胞进行荧光素酶相对活性测定。
日本鳗鲡caspase-1过表达条件下日本鳗鲡ap-1基因启动子的活性变化见图7。与pcdna3.1空载体相比较，信号通路重要炎症因子真核表达质粒pcdna-caspase1转染epc细胞后，能够显著上调pgl3-ap1-pro启动子荧光素酶活性高达235.9倍，说明了日本鳗鲡ap-1基因启动子可被炎症因子caspase-1正向调控并激活，“*”p<0.05，“**”p<0.01。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。
序列表
<110>集美大学
<120>一种日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子及其应用
<160>6
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>2942
<212>dna
<213>日本鳗鲡(anguillajaponica)
<400>1
catcgttgttcaccgcatcacaagcatgtatcctatgctagctagcttaacgacatgaat60
gcccaccgtgtagcgcgcctctcgttataagcaaacttacttggctactataacctatag120
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<210>2
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<213>日本鳗鲡(anguillajaponica)
<400>2
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<213>人工序列(artificialsequence)
<400>3
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<211>30
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<213>人工序列(artificialsequence)
<400>6
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1.一种启动子，其特征在于，所述启动子为日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子，所述启动子的核苷酸序列如seqidno：1所示。
2.含有权利要求1所述启动子的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。
3.如权利要求3所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒由权利要求1所述的启动子、由权利要求1所述启动子启动转录的目的基因和终止子组成。
4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pgl3-basic、pgl2-basic、pgl4.10、pgluc。
5.如权利要求3所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌为大肠杆菌、枯草杆菌、乳酸菌、酵母菌。
6.如权利要求1所述的日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子在构建真核表达载体、鱼类细胞或哺乳动物细胞中高效表达外源基因中的应用。
7.如权利要求1所述的日本鳗鲡转录因子ap-1基因启动子在构建转基因鱼中的应用。
技术总结