本发明属于基因工程与酶工程领域，具体涉及一种高活性α-淀粉酶。
背景技术：
：α-淀粉酶，即α-1，4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(ec.3.2.1.1)，α-淀粉酶随机作用于淀粉、糖原、寡糖或多聚糖分子内的α-1，4-糖苷键，并将淀粉水解成葡萄糖、麦芽糖、低聚糖等小分子物质。淀粉酶是用途最广、产量最大的一类酶制剂品。工业用α-淀粉酶按微生物来源不同分为细菌α-淀粉酶和真菌α-淀粉酶两大类。细菌α-淀粉酶水解淀粉的主要产物是糊精及少量寡糖和葡萄糖，真菌α-淀粉酶可以水解淀粉和麦芽三糖，终产物主要为麦芽糖和部分低聚寡糖及少量葡萄糖。麦芽糖因其优良的特性，广泛应用于医药工业、食品工业，由于真菌α-淀粉酶具有特殊的高麦芽糖生成能力，使其在很多工业上的应用逐年增加，例如高麦芽糖浆、烘焙和酿造工业等，但是目前真菌α-淀粉酶还存在酶活不够高的问题。本发明通过大通量筛选获得了高活性的突变子。技术实现要素：本发明的目的是提供一种高活性α-淀粉酶，可以节省成本。本发明的制备过程如下：1.从ncbi上获得α-淀粉酶序列(α-amylase，genbank：kx216807.1，seqno.1)，交生物公司合成，设计pcr引物：5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′(seqno.2)，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3′(seqno.3)，pcr反应结束后，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，采用bamhi、noti酶切pet20b( )质粒，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colijm109，挑取阳性克隆，送生物公司测序，将鉴定正确的质粒转化宿主e.colibl21进行表达，得到含有野生型序列质粒的基因工程菌；2.质粒dna的提取将携带有质粒pet20b( )/α-amylase的e.colibl21基因工程菌接种于lb/amp(amp终浓度100μg/ml)液体培养基中，于37℃，200r/min过夜培养后，使用质粒小量提取试剂盒抽提质粒，具体操作按照说明书进行；3.易错pcr扩增与突变文库的构建以步骤2获得的质粒为模板，用noti酶切使质粒线性化，用引物序列5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′(seqno.2)，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3′(seqno.3)，进行易错pcr扩增基因，易错pcr扩增体系(50μl)为10×takarataqbuffer，dntpsmixture，引物各0.2μmol/l，模板dna200ng，taqdna聚合酶2.5u，5mmol/lmn2 ，0.5u/μl的taqdna聚合酶2.5μl，7mmol/l的mg2 ，pcr反应条件：95℃5min，(94℃1min，55℃1min，72℃2min，共35个循环)，72℃10min，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，将pet20b( )质粒用bamhi、noti酶切线性化，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colibl21；4.突变文库的高通量筛选将步骤3得到的转化e.colibl21，37℃孵育1h后收集菌体涂布氨苄青霉素抗性培养基(100μg/ml)，37℃温育12h，将平板上菌落全部刮取，接种至含100μg/ml氨苄青霉素的100mllb培养基中，37℃振荡培养14h后提取混合质粒，混合质粒经xbai酶切后电击转化毕赤酵母gs115，涂布md平板，待md平板上出现菌落后，将菌落挑至涂有x-gal的mm培养基上，使x-gal变蓝的菌株即为阳性突变子，挑取阳性菌株接种于48孔培养板中，每孔加入ypd培养基500μl、2％接种量，于28℃、200r/r/min培养48h，离心收集菌体以500μlbmmy培养基重悬菌体，28℃、200r/min培养48h，每12h补加甲醇至终浓度为0.5％，诱导结束后离心取上清即为粗酶液；5.酶蛋白纯化配制akta使用的缓冲液，其中a液：20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(ph7.5)，b液：1mol/l氯化钠溶液(20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，ph7.5)，以5倍柱床体积的a液平衡柱子后，粗酶液经a液流入captorq(1ml)阴离子柱中，通过b液进行梯度洗脱：以5倍柱床体积的11％的b液洗脱杂蛋白，再以5％b液洗脱目的蛋白；6.粗酶液中蛋白含量的测定标准曲线绘制：以牛血清蛋白(bsa)为标准品，配置10mg/mlbsa母液，稀释为以下几个梯度：10.0mg/ml、8.0mg/ml、6.0mg/ml、4.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml，取不同浓度bsa溶液或超纯水40μl，加入5倍稀释后的bio-rad考马斯亮蓝蛋白染液260μl，震荡混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中，于595nm下测定吸光度，记录数值，绘制标准曲线，取粗酶液或纯化后的酶液40μl，加入稀释后染液260μl，混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中于595nm下测定吸光度，记录数值，根据标准曲线计算酶液的蛋白浓度；7.酶活及比活力测定采用dns法(3，5-二硝基水杨酸)测定酶活力，比酶活＝酶活/蛋白浓度；8.将比酶活最高的突变子，送生物公司测序。本发明的有益效果是：获得的突变α-淀粉酶具有更高的比酶活，可以节省成本。附图说明图1易错pcr电泳图图2蛋白标准曲线图3dns标准曲线图4突变α-淀粉酶与野生型α-淀粉酶三维建模具体实施方式下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。实施例1本实施例涉及的材料和试剂见表1，实验仪器见表2；表1实验材料和试剂表2实验仪器设备基因电击导入仪bio-rad公司伯乐t100pcr仪北京世纪科信科学仪器有限公司bbs-h1100洁净工作台山东博科生物产业有限公司dyy-6d型核酸电泳仪北京市六一仪器厂miniprotein3蛋白电泳系统美国bio-rad公司geldoc凝胶成像系统美国bio-rad公司uv1900紫外可见光分光光度计让奇(上海)仪器科技有限公司tgl-16mb高速冷冻离心机长沙湘智离心机仪器有限公司thz-300恒温培养摇床上海仪天科学仪器有限公司spx-100b-z生化培养箱苏州江东精密仪器有限公司lb培养基配方：胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，nacl10g/l，ph7.0；固体lb培养基：每100ml液体lb培养基加2g琼脂粉，高压灭菌；ypd培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，ph6.0；md固体培养基：0.00004％biotin，1.34％ynb，2％葡萄糖，1.5％琼脂糖；mm固体培养基：0.00004％biotin，1.34％ynb，0.5％甲醇，1.5％琼脂糖；bmmy培养基：2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.3％k2hpo4，1.18％kh2po4，1.34％ynb，0.5％甲醇(v/v)，0.00004％biotin；ptm微量盐：0.6％cuso4，0.008％nai2，0.3％mnso4，0.02％na2moo4，0.002％h3bo3，0.05％cocl2，2％zncl2，6.5％feso4，0.5％硫酸(v/v)；酵母发酵基础盐培养基：0.5％kh2po4，5％nh4h2po4，1.485％mgso4，1.82％k2so4，0.093％caso4，0.15％koh，0.00011％biotin，0.44％ptm微量盐，2％葡萄糖；酵母发酵基础盐诱导培养基：0.5％kh2po4，5％nh4h2po4，1.485％mgso4，1.82％k2so4，0.093％caso4，0.15％koh，0.00011％biotin，0.44％ptm微量盐，0.5％甲醇；iptg储存液(200mg/ml)：用去离子水配制成200mg/ml异丙基硫代-β-d-半乳糖苷，用0.22μm过滤器过滤除菌，分装成每管1ml，贮存于-20℃；氨苄青霉素储存液(200mg/ml)：用去离子水配制成200mg/ml的氨苄青霉素(amp)贮存液，用0.22μm过滤器过滤除菌，分装成每管1ml，贮存于-20℃；50×tae电泳缓冲液：tris242g，冰乙酸57.1ml，0.5mol/ledta(ph8.0)100ml，用蒸馏水定容至1l；琼脂糖溶液(1.2％)：称取0.60g琼脂糖，溶解于50ml巴比妥钠-hcl缓冲液中；1.从ncbi上获得α-淀粉酶序列(α-amylase，genbank：kx216807.1，seqno.1)，交生物公司合成，设计pcr引物：5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′(seqno.2)，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3′(seqno.3)，pcr反应结束后，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，采用bamhi、noti酶切pet20b( )质粒，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colijm109，挑取阳性克隆，送生物公司测序，将鉴定正确的质粒转化宿主e.colibl21进行表达，得到含有野生型序列质粒的基因工程菌；2.质粒dna的提取将携带有质粒pet20b( )/α-amylase的e.colibl21基因工程菌接种于lb/amp(amp终浓度100μg/ml)液体培养基中，于37℃，200r/min过夜培养后，使用质粒小量提取试剂盒抽提质粒，具体操作按照说明书进行；3.易错pcr扩增与突变文库的构建以步骤2获得的质粒为模板，用noti酶切使质粒线性化，用引物序列5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′(seqno.2)，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3″(seqno.3)，进行易错pcr扩增基因(见图1)，易错pcr扩增体系(50μl)为10×takarataqbuffer，dntpsmixture，引物各0.2μmol/l，模板dna200ng，taqdna聚合酶2.5u，5mmol/lmn2 ，0.5u/μl的taqdna聚合酶2.5μl，7mmol/l的mg2 ，pcr反应条件：95℃5min，(94℃1min，55℃1min，72℃2min，共35个循环)，72℃10min，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，将pet20b( )质粒用bamhi、noti酶切线性化，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colibl21；4.突变文库的高通量筛选将步骤3得到的转化e.colibl21，37℃孵育1h后收集菌体涂布氨苄青霉素抗性培养基(100μg/ml)，37℃温育12h，将平板上菌落全部刮取，接种至含100μg/ml氨苄青霉素的100mllb培养基中，37℃振荡培养14h后提取混合质粒，混合质粒经xbai酶切后电击转化毕赤酵母gs115，涂布md平板，待md平板上出现菌落后，将菌落挑至涂有x-gal的mm培养基上，使x-gal变蓝的菌株即为阳性突变子，挑取阳性菌株接种于48孔培养板中，每孔加入ypd培养基500μl、2％接种量，于28℃、200r/min培养48h，离心收集菌体以500μlbmmy培养基重悬菌体，28℃、200r/min培养48h，每12h补加甲醇至终浓度为0.5％，诱导结束后离心取上清即为粗酶液；5.酶蛋白纯化配制akta使用的缓冲液，其中a液：20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(ph7.5)，b液：1mol/l氯化钠溶液(20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，ph7.5)，以5倍柱床体积的a液平衡柱子后，粗酶液经a液流入captorq(1ml)阴离子柱中，通过b液进行梯度洗脱：以5倍柱床体积的11％的b液洗脱杂蛋白，再以5％b液洗脱目的蛋白；6.粗酶液中蛋白含量的测定标准曲线绘制：以牛血清蛋白(bsa)为标准品，配置10mg/mlbsa母液，稀释为以下几个梯度：10.0mg/ml、8.0mg/ml、6.0mg/ml、4.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml，取不同浓度bsa溶液或超纯水40μl，加入5倍稀释后的bio-rad考马斯亮蓝蛋白染液260μl，震荡混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中，于595nm下测定吸光度，记录数值，绘制标准曲线(见图2)，取粗酶液或纯化后的酶液40μl，加入稀释后染液260μl，混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中于595nm下测定吸光度，记录数值，根据标准曲线计算酶液的蛋白浓度(见表3)；表3酶液蛋白浓度(mg/ml)组别od595nm蛋白浓度组别od595nm蛋白浓度野生型0.10090.79突变子170.10160.82突变子10.10200.84突变子180.10250.86突变子20.09930.72突变子190.10200.84突变子30.10090.79突变子200.10310.89突变子40.10020.76突变子210.10290.88突变子50.10000.75突变子220.09960.73突变子60.10180.83突变子230.10160.82突变子70.10090.79突变子240.10180.83突变子80.10180.83突变子250.10250.86突变子90.10020.76突变子260.10110.8突变子100.10160.82突变子270.09980.74突变子110.09980.74突变子280.10290.88突变子120.10070.78突变子290.10020.76突变子130.10200.84突变子300.10130.81突变子140.09980.74突变子310.10250.86突变子150.10090.79突变子320.10360.91突变子160.10020.76突变子330.10470.967.酶活及比活力测定7.1配制麦芽糖标准溶液(10mmol/l)：称取34.2mg麦芽糖，加蒸馏水定容到10ml；7.2配制dns试剂：称取dns0.63g溶于50ml水中，置于45℃水浴不断搅拌，加入2mol/lnaoh26.2ml，缓慢滴加，不断搅拌，称取18.2g酒石酸钾钠、0.5g苯酚、0.5g亚硫酸钠溶于水中；在45℃水浴锅中不断搅拌混匀上述物质，使完全溶解；冷却，加水定容至100ml，置于棕色瓶中保存，4℃冰箱存放至少一周后使用；7.3绘制dns标准曲线：取6支试管编号1-6，按照下表4加入麦芽糖标准溶液(10mmol/l)、蒸馏水、dns试剂，混合均匀后放入沸水浴中煮15min；反应结束后，立即用流动的冷水使其冷却，补加蒸馏水10.5ml，上下颠倒混匀，以6号管作为对照，测定混合液在550nm处的吸光值(见图3)；表4dns标准曲线试剂配比编号麦芽糖标液(ml)麦芽糖含量(μmol)蒸馏水(ml)dns(ml)10.110.41.520.220.31.530.330.21.540.440.11.550.5501.56000.51.57.4酶活力测定取400μl用蒸馏水配制的1％(w/v)可溶性淀粉溶液，加入ep管中；加入100μl酶液，于45℃反应30min；立即吸取250μl反应液于试管中，向试管中加入750μldns试剂，混合均匀后在沸水中煮15min；取出试管立即用流动的水冷却，加5.25ml蒸馏水，混匀；用分光光度计测定混合液在550nm处的吸光值；一个酶活力单位(u)：一定条件下(45℃)，每分钟水解淀粉生成1μmol麦芽糖所需的酶量；酶活的计算公式为：(od550nm-0.3247)/0.5454；比酶活＝酶活/蛋白浓度；表5α-淀粉酶活力8.将比酶活最高的突变子，送生物公司测序。将比酶活最高的突变子，送生物公司测序(见表6)。表6比酶活最高突变子序列与野生型序列对比本发明获得了比酶活提高258.99％的突变子。9.在https：//swissmodel.expasy.org/interactive上，对野生型α-淀粉酶和突变型酶α-淀粉酶进行三维建模(见图4)。序列表<110>广州博识生物科技有限公司<120>一种高活性α-淀粉酶<160>3<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1389<212>dna<213>rhizopusoryzae<400>1atgaagtctttcttaagtctcctttgcagcgtcttccttttacctttggttgtacagtct60gtgcctgtcatcaagcgagcctcagccagcgactgggagaaccgagtcatctaccaattg120ttaactgatcgatttgcaaaatcgaccgatgataccaatggctgcaataacctgagtgac180tactgtggcggaacatttcaaggaatcattaatcacttggattacattgccggaatggga240tttgatgctatctggatatcacctatccccaaaaatgcgaatggaggttaccatggctat300tgggctactgacttttctcaaataaatgagcattttggaactgctgatgacttgaaaaag360ttggttgcagctgctcatgcaaagaacatgtacgttatgctggacgttgttgccaatcat420gctggcattccttcatcaggtggcgactactctggctacacgttcggtcaaagctctgaa480taccacacagcctgtgatatcaattacaacagccagacctctattgagcagtgctggatt540tctggtttgcctgatatcaacactgaagactcggccattgttagcaaattgaattcgatt600gtttctggttgggtatctgattatggctttgacggtcttcgaatcgacactgtgaagcac660attcgtaaagatttctgggacggctatgtctctgctgctggtgtatttgctaccggagaa720gtgcttagcggcgatgtttcttatgtctcaccctatcagcagcatgttccttctttactc780aactacccattgtattatccagtctatgatgtattcaccaaatcccgtaccatgagccgt840ttaagctctggcttttctgatattaaaaatggaaactttaaagacattgatgtcttggtc900aactttattgacaatcacgatcagcctcgtttgttatccaaagctgatcaaagtctcgtc960aagaatgctcttgcttattctttcatggtccaaggtatccctgtcttgtactatggtaca1020gaacaatccttcaagggtggtaacgatcctaacaacagagaggtcttatggaccactggt1080tactcgaccacatctgatatgtacaagtttgtcactactcttgtcaaggcacgcaagggc1140tcaaactccacagtaaatatgggaattgctcaaaccgataacgtctatgtgttccaaaga1200ggtggctctctggttgttgtcaataactatggtcaaggatcaacaaacacaattactgta1260aaggctggctcgttctctaatggagatactttgactgatgtgttctccaacaaatctgtt1320actgttcaaaataaccagatcacattccaattgcagaatggaaaccctgccatattccaa1380aagaactaa1389<210>3<211>48<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>3tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc48<210>4<211>47<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>4tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg47当前第1页1 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技术特征：1.一种高活性α-淀粉酶，其特征在于，所述酶基因序列(α-amylase，genbank：kx216807.1)在第542位，由原来的c分别突变为g，构建方法包括以下步骤：
1)从ncbi上获得α-淀粉酶序列(α-amylase，genbank：kx216807.1)，交生物公司合成，设计pcr引物：5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3′，pcr反应结束后，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，采用bamhi、noti酶切pet20b( )质粒，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colijm109，挑取阳性克隆，送生物公司测序，将鉴定正确的质粒转化宿主e.colibl21进行表达，得到含有野生型序列质粒的基因工程菌；
2)质粒dna的提取
将携带有质粒pet20b( )/α-amylase的e.colibl21基因工程菌接种于lb/amp(amp终浓度100μg/ml)液体培养基中，于37℃，200r/min过夜培养后，使用质粒小量提取试剂盒抽提质粒，具体操作按照说明书进行；
3)易错pcr扩增与突变文库的构建
以步骤2获得的质粒为模板，用noti酶切使质粒线性化，用引物序列5′-tatcggaattaattcggatccatgaagtctttcttaagtctcctttgc-3′，5′-tggtggtgctcgagtgcggccgcttagttcttttggaatatggcagg-3′，进行易错pcr扩增基因，易错pcr扩增体系(50μl)为10×takarataqbuffer，dntpsmixture，引物各0.2μmol/l，模板dna200ng，taqdna聚合酶2.5u，5mmol/lmn2 ，0.5u/μl的taqdna聚合酶2.5μl，7mmol/l的mg2 ，pcr反应条件：95℃5min，(94℃1min，55℃1min，72℃2min，共35个循环)，72℃10min，加20μlcloningenhancer到pcr体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，将pet20b( )质粒用bamhi、noti酶切线性化，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的pcr产物与纯化的线性载体混合均匀，加入in-fusion酶，50℃反应15min，转化e.colibl21；
4)突变文库的高通量筛选
将步骤3得到的转化e.colibl21，37℃孵育1h后收集菌体涂布氨苄青霉素抗性培养基(100μg/ml)，37℃温育12h，将平板上菌落全部刮取，接种至含100μg/ml氨苄青霉素的100mllb培养基中，37℃振荡培养14h后提取混合质粒，混合质粒经xbai酶切后电击转化毕赤酵母gs115，涂布md平板，待md平板上出现菌落后，将菌落挑至涂有x-gal的mm培养基上，使x-gal变蓝的菌株即为阳性突变子，挑取阳性菌株接种于48孔培养板中，每孔加入ypd培养基500μl、2％接种量，于28℃、200r/min培养48h，离心收集菌体以500μlbmmy培养基重悬菌体，28℃、200r/min培养48h，每12h补加甲醇至终浓度为0.5％，诱导结束后离心取上清即为粗酶液；
5)酶蛋白纯化
配制akta使用的缓冲液，其中a液：20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(ph7.5)，b液：1mol/l氯化钠溶液(20mmol/l磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，ph7.5)，以5倍柱床体积的a液平衡柱子后，粗酶液经a液流入captorq(1ml)阴离子柱中，通过b液进行梯度洗脱：以5倍柱床体积的11％的b液洗脱杂蛋白，再以5％b液洗脱目的蛋白；
6)粗酶液中蛋白含量的测定
标准曲线绘制：以牛血清蛋白(bsa)为标准品，配置10mg/mlbsa母液，稀释为以下几个梯度：10.0mg/ml、8.0mg/ml、6.0mg/ml、4.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml，取不同浓度bsa溶液或超纯水40μl，加入5倍稀释后的bio-rad考马斯亮蓝蛋白染液260μl，震荡混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中，于595nm下测定吸光度，记录数值，绘制标准曲线，取粗酶液或纯化后的酶液40μl，加入稀释后染液260μl，混匀后室温静置15min，取200μl加入酶标板中于595nm下测定吸光度，记录数值，根据标准曲线计算酶液的蛋白浓度；
7)酶活及比活力测定
采用dns法(3，5-二硝基水杨酸)测定酶活力，比酶活＝酶活/蛋白浓度；
8)将比酶活最高的突变子，送生物公司测序。
2.根据权利要求1所述的一种高活性α-淀粉酶的应用，其特征在于，所述的高活性α-淀粉酶应用于医药工业、食品工业。
技术总结本发明涉及一种高活性α‑淀粉酶，通过从NCBI上获得α‑淀粉酶基因序列(α‑amylase，GenBank:KX216807.1)，易错PCR获得突变产物，将突变产物重组到毕赤酵母中获得表达，筛选比酶活高的突变子，获得1个比酶活比野生型高258.99％的突变子，其基因序列在第542位，由原来的C分别突变为G，有益效果在于，获得的突变α‑淀粉酶具有更高的比酶活，可以节省成本。
技术研发人员：刘庚敬
受保护的技术使用者：广州博识生物科技有限公司
技术研发日：2021.04.29
技术公布日：2021.08.03
