本发明属于水产动物繁殖生物学技术领域，尤其涉及一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法。
背景技术：
鱼类，是最古老的脊椎动物。部分不同染色体数目的杂交的后代依然有生育能力。它们几乎栖居于地球上所有的水生环境，从淡水的湖泊、河流到咸水的大海和大洋。鱼类分为两个总纲：无颌总纲及有颌总纲，无颌总纲包括圆口纲、甲胄鱼纲，有颌总纲包括盾皮鱼纲、软骨鱼纲、辐鳍鱼纲，大多数鱼类是终年生活在水中，用鳃呼吸，用鳍辅助身体平衡与运动的变温脊椎动物，也有像非洲肺鱼、弹涂鱼、攀鲈能在陆地上长时间生存，以及黑鱼、黄鳝、雀鳝靠单鳔呼吸，鱼类的胚胎发育可以分为胚胎前期发育和胚胎后期发育两个时期，以胚体孵出前后为界限。也称作早期发育，胚前发育在卵膜内进行，从一个受精卵逐渐发育成一个活动的幼体，最后破卵膜孵出，这个时期常称作孵化，胚后发育指从孵出到能够开始摄食外界营养的时期或主要器官分化为止，针对鱼类胚胎的观察也是科学研究的一个重要内容。
现在针对鱼类受精卵进行显微镜观察时是将采集到的鱼类受精卵放入到培养皿中进行观察，由于鱼类受精卵的胚胎具有极强的粘性，使得观察时不能够清楚明了的查看鱼类受精卵表面是否脏污，不能清楚的观察胚胎的完整度。
技术实现要素：
本发明的目的在于：为了解决鱼类受精卵进行显微镜观察时是将采集到的鱼类受精卵放入到培养皿中进行观察，由于鱼类受精卵的胚胎具有极强的粘性，使得观察时不能够清楚明了的查看鱼类受精卵表面是否脏污，不能清楚的观察胚胎的完整度的问题，而提出的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法，包括以下步骤：
s1、取样，人工鱼巢上小心地取下10个左右鱼类受精卵置于培养皿中并放入到无菌恒温箱内进行放置；
s2、一次脱粘处理，从无菌恒温箱内取出盛放有鱼类受精卵的培养皿并倒入一号脱粘液，一号脱粘液倒入至淹没鱼类受精卵，静置一段时间；
s3、一次脱粘震荡，将一号脱粘液淹没的培养皿放入到恒温摇床，并在一定温度下进行慢速震荡一段时间；
s4、二次脱粘前处理，利用抖动滤网对一次脱粘震荡后的培养皿进行抖动过滤，倒去一号脱粘液得到鱼类受精卵；
s5、二次脱粘处理，将二号脱粘液倒入到去除一号脱粘液的培养皿中，静置一段时间；
s6、二次脱粘震荡，将二号脱粘液倒入后的培养皿放入到恒温摇床，并在一定温度下进行慢速震荡一段时间；
s7、显微观察，将二次脱粘震荡后的培养皿放入到显微镜上进行显微镜观察。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s2中，一号脱粘液由0.003g尿素和0.004gnacl溶解于0.1g水中组成，并静置在20℃-25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s3中，对一号脱粘液淹没的培养皿进行震荡处理时的温度为在20℃-25℃，震荡时间60-90min。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s5中，往培养皿中倒入的二号脱粘液体积具体为一号脱粘液加入量的五倍。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s5中，二号脱粘液由0.008g-0.009g尿素溶解于0.5g水中组成，并静置在20℃-25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s6中，对二号脱粘液淹没的培养皿进行震荡处理时的温度为在20℃-25℃，震荡时间30-60min。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述s2和所述s5中，加入一号脱粘液的培养皿静置时间和加入二号脱粘液的培养皿静置时间均为15min。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明通过在工艺内设置有一号脱粘液和二号脱粘液来对鱼类受精卵进行多次处理，有效脱粘，进行持续性显微观察，操作简单，条件可控，能够清楚明白的观察出鱼类受精卵表面有无脏污，且能够使得卵膜变得透明清晰且胚胎完整，可进行持续性显微观察，观察过程视野清晰，观察后的受精卵孵化率高。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
8.本发明提供一种技术方案：一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法，包括以下步骤：
s1、取样，人工鱼巢上小心地取下10个左右鱼类受精卵置于培养皿中并放入到无菌恒温箱内进行放置；
s2、一次脱粘处理，从无菌恒温箱内取出盛放有鱼类受精卵的培养皿并倒入一号脱粘液，一号脱粘液由0.003g尿素和0.004gnacl溶解于0.1g水中组成，并静置在20℃的恒温水浴锅中进行恒温处理，一号脱粘液倒入至淹没鱼类受精卵，静置15min；
s3、一次脱粘震荡，将一号脱粘液淹没的培养皿放入到恒温摇床，并在20℃温度下进行慢速震荡60min；
s4、二次脱粘前处理，利用抖动滤网对一次脱粘震荡后的培养皿进行抖动过滤，倒去一号脱粘液得到鱼类受精卵；
s5、二次脱粘处理，将二号脱粘液倒入到去除一号脱粘液的培养皿中，往培养皿中倒入的二号脱粘液体积具体为一号脱粘液加入量的五倍，静置15min，二号脱粘液由0.008g-0.009g尿素溶解于0.5g水中组成，并静置在20℃的恒温水浴锅中进行恒温处理；
s6、二次脱粘震荡，将二号脱粘液倒入后的培养皿放入到恒温摇床，并在20℃温度下进行慢速震荡30min。
s7、显微观察，将二次脱粘震荡后的培养皿放入到显微镜上进行显微镜观察。
实施例2
9.本发明提供一种技术方案：一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法，包括以下步骤：
s1、取样，人工鱼巢上小心地取下10个左右鱼类受精卵置于培养皿中并放入到无菌恒温箱内进行放置；
s2、一次脱粘处理，从无菌恒温箱内取出盛放有鱼类受精卵的培养皿并倒入一号脱粘液，一号脱粘液由0.003g尿素和0.004gnacl溶解于0.1g水中组成，并静置在23℃的恒温水浴锅中进行恒温处理，一号脱粘液倒入至淹没鱼类受精卵，静置15min；
s3、一次脱粘震荡，将一号脱粘液淹没的培养皿放入到恒温摇床，并在23℃温度下进行慢速震荡75min；
s4、二次脱粘前处理，利用抖动滤网对一次脱粘震荡后的培养皿进行抖动过滤，倒去一号脱粘液得到鱼类受精卵；
s5、二次脱粘处理，将二号脱粘液倒入到去除一号脱粘液的培养皿中，往培养皿中倒入的二号脱粘液体积具体为一号脱粘液加入量的五倍，静置15min，二号脱粘液由0.008g-0.009g尿素溶解于0.5g水中组成，并静置在23℃的恒温水浴锅中进行恒温处理；
s6、二次脱粘震荡，将二号脱粘液倒入后的培养皿放入到恒温摇床，并在23℃温度下进行慢速震荡45min；
s7、显微观察，将二次脱粘震荡后的培养皿放入到显微镜上进行显微镜观察。
实施例3
10.本发明提供一种技术方案：一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法，包括以下步骤：
s1、取样，人工鱼巢上小心地取下10个左右鱼类受精卵置于培养皿中并放入到无菌恒温箱内进行放置；
s2、一次脱粘处理，从无菌恒温箱内取出盛放有鱼类受精卵的培养皿并倒入一号脱粘液，一号脱粘液由0.003g尿素和0.004gnacl溶解于0.1g水中组成，并静置在25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理，一号脱粘液倒入至淹没鱼类受精卵，静置15min；
s3、一次脱粘震荡，将一号脱粘液淹没的培养皿放入到恒温摇床，并在25℃温度下进行慢速震荡90min；
s4、二次脱粘前处理，利用抖动滤网对一次脱粘震荡后的培养皿进行抖动过滤，倒去一号脱粘液得到鱼类受精卵；
s5、二次脱粘处理，将二号脱粘液倒入到去除一号脱粘液的培养皿中，往培养皿中倒入的二号脱粘液体积具体为一号脱粘液加入量的五倍，静置15min，二号脱粘液由0.008g-0.009g尿素溶解于0.5g水中组成，并静置在25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理；
s6、二次脱粘震荡，将二号脱粘液倒入后的培养皿放入到恒温摇床，并在25℃温度下进行慢速震荡60min；
s7、显微观察，将二次脱粘震荡后的培养皿放入到显微镜上进行显微镜观察。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
1.一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法，其特征在于：包括以下步骤：
s1、取样，人工鱼巢上小心地取下10个左右鱼类受精卵置于培养皿中并放入到无菌恒温箱内进行放置；
s2、一次脱粘处理，从无菌恒温箱内取出盛放有鱼类受精卵的培养皿并倒入一号脱粘液，一号脱粘液倒入至淹没鱼类受精卵，静置一段时间；
s3、一次脱粘震荡，将一号脱粘液淹没的培养皿放入到恒温摇床，并在一定温度下进行慢速震荡一段时间；
s4、二次脱粘前处理，利用抖动滤网对一次脱粘震荡后的培养皿进行抖动过滤，倒去一号脱粘液得到鱼类受精卵；
s5、二次脱粘处理，将二号脱粘液倒入到去除一号脱粘液的培养皿中，静置一段时间；
s6、二次脱粘震荡，将二号脱粘液倒入后的培养皿放入到恒温摇床，并在一定温度下进行慢速震荡一段时间；
s7、显微观察，将二次脱粘震荡后的培养皿放入到显微镜上进行显微镜观察。
2.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s2中，一号脱粘液由0.003g尿素和0.004gnacl溶解于0.1g水中组成，并静置在20℃-25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理。
3.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s3中，对一号脱粘液淹没的培养皿进行震荡处理时的温度为在20℃-25℃，震荡时间60-90min。
4.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s5中，往培养皿中倒入的二号脱粘液体积具体为一号脱粘液加入量的五倍。
5.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s5中，二号脱粘液由0.008g-0.009g尿素溶解于0.5g水中组成，并静置在20℃-25℃的恒温水浴锅中进行恒温处理。
6.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s6中，对二号脱粘液淹没的培养皿进行震荡处理时的温度为在20℃-25℃，震荡时间30-60min。
7.根据权利要求1所述的一种利于镜下观察胚胎发育的鱼类粘性受精卵处理方法的制备方法，其特征在于，所述s2和所述s5中，加入一号脱粘液的培养皿静置时间和加入二号脱粘液的培养皿静置时间均为15min。
技术总结