本发明属于环境微生物工程领域，具体涉及一种基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法。
背景技术：
：四氯乙烯是一种重要的化工原料，主要用作有机溶剂、干洗剂、金属脱脂溶剂、灭火剂等。由于使用量大，四氯乙烯已成为地下水中最常见的污染物之一，对生态系统造成长期影响，影响人体的肝肾功能、神经系统、免疫系统和内分泌系统。因此，亟需开发实用性强的修复技术解决四氯乙烯污染带来的环境和健康问题。针对四氯乙烯污染的地下水或土壤，常用的修复技术包括物理技术(气相抽提技术、多相抽提技术等)以及化学技术(原位化学氧化技术、可渗透反应墙技术等)。但通过物理或化学手段进行四氯乙烯污染修复，具有修复成本高、设备工艺复杂、具有一定的适用参数、可能改变土壤的基本性质和生态功能等缺陷。而生物修复尤其是微生物修复技术，由于其安全、绿色、经济的优点，成为四氯乙烯污染修复的研究热点。在好氧环境中，四氯乙烯难以被微生物利用或降解；而在厌氧环境中，四氯乙烯可以发生厌氧脱氯过程，四氯乙烯被逐步脱氯成为三氯乙烯、二氯乙烯、氯乙烯和无毒的乙烯。dehalococcoides是被最广泛研究的厌氧脱氯菌之一，能够利用乙酸作为碳源、氢气作为电子供体、氯代有机物(如四氯乙烯等)作为电子受体进行生长。刺激脱氯微生物的脱氯活性对于微生物修复四氯乙烯污染场地至关重要。技术实现要素：本发明提供了一种简单的基于磁纳米颗粒的脱氯增强(dechlorinationenhancementwithmagneticnanoparticles,dem)方法。本发明所采用的磁纳米颗粒分离技术(magneticnanoparticle-mediatedisolation,mmi)能够实现微生物的原位分离，在群落水平上研究其生理生化特性。磁纳米颗粒(magneticnanoparticles,mnps)能够包裹在微生物表面，将微生物进行磁功能化。当加入某种特定的生长底物后，生长速度快的细胞能够逐渐随着细胞分裂而丢失磁性，而生长速度慢的细胞一直保持磁性，利用永磁体即可分离快生长/慢生长的微生物。磁纳米颗粒分离技术是一种快速有效原位分离快生长/慢生长微生物的新型技术。本发明所采用的具体技术方案如下：一种基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其步骤如下：s1：将含有厌氧脱氯菌的菌液在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，使磁纳米颗粒通过静电作用非特异地包裹在菌液中所有细胞的表面；s2：将磁功能化后的菌液接种至含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，并进行恒温振荡培养，定期测定培养瓶内的四氯乙烯含量，待达到培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻，对培养瓶加载磁场，使菌液中的菌体按照表面磁纳米颗粒的附着量大小分离，部分被吸附至瓶壁上而部分悬于上清菌液中；吸取厌氧培养瓶中的上清菌液，完成一次传代培养；s3：将上一次传代培养后得到的所述上清菌液重新在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，并再次按照s2进行下一次传代培养；s4：重复上述s3多次，最终获得一个四氯乙烯脱氯增强的混合培养物。作为优选，在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化的步骤具体如下：s11：将培养瓶用氮气进行曝气，排出内部空气后密封，经灭菌处理后得到无菌氮气培养瓶；s12：用注射器抽取菌液和纳米磁颗粒溶液注入所述无菌氮气培养瓶，然后将将其置于孵育环境中进行孵育，获得磁功能化的菌液。进一步的，所述s11中的曝气过程是采用高纯氮气曝气2min。进一步的，所述s12中加入菌液和纳米磁颗粒溶液的体积比为4:1；菌液的浓度为108copiesml-1；纳米磁颗粒溶液的浓度为8.1gl-1。进一步的，所述s12中的孵育过程是将所述无菌氮气培养瓶置于摇床中，在180rpm和30℃条件下避光孵育30min。作为优选，所述含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，四氯乙烯的浓度为0.7mmoll-1。作为优选，所述磁纳米颗粒为聚烯丙基胺盐酸盐修饰的四氧化三铁纳米颗粒。作为优选，所述s2中，培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻为0.25mmoll-1四氯乙烯脱氯成为三氯乙烯时。作为优选，所述s2中，利用永磁体对培养瓶加载磁场，永磁体的表磁为2622gauss，磁场加载时间为10min。作为优选，所述s1中，含有厌氧脱氯菌的菌液由从多氯联苯污染土壤样品中富集得到无沉积物的多氯联苯厌氧脱氯混合培养物，培养早期利用多氯联苯、培养晚期利用四氯乙烯作为底物连续传代培养得到。本发明相对于现有技术而言，具有以下有益效果：(1)本发明通过使用磁纳米颗粒和缩短传代时间，分离富集出原厌氧脱氯培养物中的快生长菌，提高了该培养物的四氯乙烯脱氯速率。(2)本发明可能通过进一步利用生态学原理，指导研究微生物群落中快生长菌和慢生长菌的互赢共生关系，发掘微生物群落中的慢生长菌资源。(3)本发明不仅适用于富集脱氯菌、增强脱氯活性，亦可用于富集其它能利用某类特定污染物的菌群、增强相应物质的代谢活性，为污染场地修复提供一种简便、高效的方法。附图说明图1是实施例中基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法的流程图。图2是(a)通过dem方法传代和(b)正常连续传代时的相应培养物的pce脱氯速率常数(day-1)。m表示通过dem方法传代，ck表示正常连续传代，数字表示传代的代数。柱子上的字母代表显著性分析的结果，相同字母代表不具有显著差异(p＜0.05)。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步阐述和说明。本发明采用的试剂皆为普通市售品，皆可于市场购得。本发明中各个实施方式的技术特征在没有相互冲突的前提下，均可进行相应组合。本发明提供了一种基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其步骤如下：s1：将含有厌氧脱氯菌的菌液在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，所谓磁功能化是指利用磁纳米颗粒和细菌体之间的静电作用，使磁纳米颗粒通过静电作用包裹附着在菌液中所有细胞的表面。需注意的是，这种附着是非特异地，即会均匀附着在菌液中的所有微生物的细胞表面，不存在明显的选择性。s2：将磁功能化后的菌液接种至含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，并进行恒温振荡培养，定期测定培养瓶内的四氯乙烯含量。通过瓶内四氯乙烯含量的监测，可以判断其所处的脱氯阶段，待达到培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻，对培养瓶加载磁场，使菌液中的菌体按照表面磁纳米颗粒的附着量大小分离，部分磁纳米颗粒的附着量大的菌体在磁力作用下被吸附至瓶壁上，而部分磁纳米颗粒的附着量小的菌体则依然悬于上清菌液中。吸取厌氧培养瓶中的上清菌液，完成一次传代培养。s3：将上一次传代培养后得到的所述上清菌液重新在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，并再次按照s2进行下一次传代培养。s4：重复上述s3多次，最终获得一个四氯乙烯脱氯增强的混合培养物。上述脱氯增强方法，其原理是利用通过静电作用非特异地结合在所有细胞表面的纳米磁颗粒对菌体进行筛选。初始时刻，所有细胞都被纳米磁颗粒包裹。随着培养的进行，活跃的快生长菌不断地分裂，细胞表面的纳米磁颗粒不断减少；而非活跃的慢生长菌表面的纳米磁颗粒一直维持。用永磁体施加磁场，慢生长菌被吸在培养瓶壁上，而快生长菌游离在上清液中。因此单独抽取上清液来传代，就可以富集原培养物中的快生长菌，使得脱氯加快。本发明中，纳米磁颗粒需要选择能够与微生物表面通过静电作用结合的磁性材质，一般选择纳米四氧化三铁。但由于纳米四氧化三铁的附着能力不强，因此优选将其通过聚丙烯胺盐酸盐(polyallylaminehydrochloride，paah)进行修饰，使得纳米磁颗粒带正电荷。细胞的表面由于具有羧基(-cooh)、硫醇(-sh)和胺(-nh2)官能团等，细胞表面带负电荷，从而实现纳米磁颗粒和微生物细胞的吸附。另外，本发明可针对任意含有厌氧脱氯菌的菌液，其对于厌氧脱氯菌具有普适性。厌氧脱氯菌只要能够具有四氯乙烯处理功能即可，并不限定特定的属或者种。本发明的后续实施例中，含有厌氧脱氯菌的菌液是先从多氯联苯污染土壤样品中富集得到无沉积物的多氯联苯厌氧脱氯混合培养物，再在培养早期利用多氯联苯、培养晚期利用四氯乙烯作为底物连续传代培养得到的。但这仅仅是本发明实施例中采用的具体材料，并不作为限制。另外，上述所说的在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，主要是将磁纳米颗粒均匀附着于菌体上的过程。本发明优选采用的具体步骤如下：s11：将培养瓶用氮气进行曝气，排出内部空气后密封，经灭菌处理后得到无菌氮气培养瓶。该曝气过程中，优选采用高纯氮气(99.999％)曝气2min。s12：用注射器抽取菌液和纳米磁颗粒溶液注入所述无菌氮气培养瓶，然后将将其置于孵育环境中进行孵育，获得磁功能化的菌液。上述s2中，含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，四氯乙烯作为底物用于对厌氧脱氯菌进行富集筛选，其浓度可根据实际调整，优选浓度为0.7mmoll-1。另外，需要注意的是，上述s2中，应当在达到培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻，尽快对培养瓶加载磁场，使菌液中的菌体按照表面磁纳米颗粒的附着量大小分离；否则随着时间的推移，培养瓶内的非活跃的慢生长厌氧脱氯菌液会逐渐发生分裂，进而导致表面的磁颗粒附着量减小，在加载磁场后也无法被吸附至瓶壁上。这将导致整个过程中活跃的快生长菌的分离富集效率降低。经过试验，培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻优选选择为0.25mmoll-1四氯乙烯脱氯成为三氯乙烯的时刻。另外，在对培养瓶加载磁场可利用永磁体实现，但该磁场的强度以及时间应当适当控制。经过试验，永磁体的表磁优选为2622gauss，磁场加载时间优选为10min。下面本发明通过若干实施例来展示上述脱氯增强方法的技术效果。对比例1本实施例对原厌氧脱氯培养物菌液利用四氯乙烯为底物进行正常连续传代，具体如下：一.实验方法1.实验步骤(1)将原厌氧脱氯培养物菌液接种至含0.7mmoll-1四氯乙烯的厌氧培养瓶中，定期检测瓶内四氯乙烯含量。原厌氧脱氯培养物菌液来源于从多氯联苯(polychlorinatedbiphenyls,pcbs)污染土壤样品中富集得到无沉积物的多氯联苯厌氧脱氯混合培养物，在培养早期利用多氯联苯、培养晚期利用四氯乙烯作为底物将该多氯联苯厌氧脱氯混合培养物进行连续传代培养即作为此处的原厌氧脱氯培养物菌液。(2)当瓶内的四氯乙烯脱氯结束后，接种该瓶内的菌液至新的含0.7mmoll-1四氯乙烯的厌氧培养瓶中，定期检测瓶内四氯乙烯含量；四氯乙烯脱氯结束的时刻被认定为0.7mmoll-1四氯乙烯脱氯成为二氯乙烯时。(3)重复步骤(1)至步骤(2)多次，获得正常连续传代下的四氯乙烯厌氧脱氯培养物。在本实施例中，正常连续传代一共进行3次，ck-1、ck-2和ck-3分别表示原厌氧脱氯培养物、第1次传代得到的厌氧脱氯培养物、第2次传代得到的厌氧脱氯培养物。2.分析方法(1)四氯乙烯脱氯速率常数的计算ct＝c0×e-kt其中，t为反应时间(day)；ct为t时刻体系中四氯乙烯的浓度(mmoll-1)；c0为初始时刻体系中四氯乙烯的浓度(0.7mmoll-1)；k为四氯乙烯脱氯速率常数(day-1)。(2)微生物群落结构的测定用注射器抽取1ml正常连续传代的菌液，在16000g的条件下离心15min收集菌体，提取菌体的基因组dna。利用细菌通用引物341f(cctacgggrsgcagcag)和806r(ggactacvvgggtatctaatc)对v3-v4区进行pcr扩增，对pcr扩增产物进行高通量测序，并用silva数据库对获得的序列进行注释。二.实验结果正常连续传代对该四氯乙烯厌氧脱氯培养物的微生物群落结构没有显著影响(表1)。在正常连续传代的三代里，相对丰度最高的三个属methanosarcina(p＝0.658)、petrimonas(p＝0.090)和dehalobacterium(p＝0.218)和脱氯菌dehalococcoides(p＝0.239)的相对丰度均没有显著变化。然而，一些少数菌属如sedimentibacter、syntrophomonas和mesotoga的相对丰度降低至检测限以下，这可能是由于传代过程中的代际稀释效应所致。正常连续传代对该四氯乙烯厌氧脱氯培养物的四氯乙烯脱氯速率没有显著影响(图2，ck-1至ck-3)。从ck-1至ck-3，四氯乙烯脱氯速率常数分别为0.021day-1、0.021day-1和0.019day-1，三者没有显著差异(p＝0.156)。表1.正常连续传代时的微生物群落结构变化情况(％)ck-1ck-2ck-3dehalobacterium8.75.19.6methanosarcina35.541.936.4petrimonas6.911.69.7syner-011.81.82.1methanobacterium7.50.00.0sedimentibacter6.87.00.0proteiniphilum0.30.30.1dehalococcoides0.30.20.5aminivibrio0.90.60.7desulfovibrio0.30.00.0pelolinea0.60.10.0propionicicella0.00.00.0burkholderialesbacteriumbeta_020.50.00.0mesotoga0.30.00.0syntrophomonas0.30.40.0escherichia-shigella0.00.00.1sphaerochaeta0.00.00.1longilinea0.00.10.3pseudomonas0.00.00.1curvibacter0.00.00.1other29.131.040.0注：表中数字表示传代的代数。表中只列出了平均相对丰度前20位的属。根据以上结果可以看出，所述原厌氧脱氯培养物的微生物生态平衡和脱氯速率已经达到稳定阶段，正常连续传代不能提高其四氯乙烯脱氯速率。实施例1本实施例将与对比例1相同的原厌氧脱氯培养物菌液进行磁功能化，然后对磁功能化菌液通过本发明的dem方法进行传代，具体如下：一.实验方法1.实验步骤如图1所示，具体如下：(1)将含有厌氧脱氯菌的菌液在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，其做法如下：1.1)将玻璃小瓶用99.999％高纯氮气进行曝气2min，用丁基胶塞和铝盖密封，在121℃的条件下高压灭菌20min后得到无菌氮气小瓶。1.2)用注射器抽取原厌氧脱氯培养物菌液和纳米磁颗粒溶液注入上一步的无菌氮气小瓶。其中，加入菌液和纳米磁颗粒溶液的体积比为4:1；菌液的浓度为108copiesml-1；纳米磁颗粒溶液的浓度为8.1gl-1。1.3)最后，将上述无菌氮气小瓶置于摇床上，在30℃，180rpm的黑暗条件下进行孵育，获得磁功能化菌液，其中磁纳米颗粒通过静电作用非特异地包裹在菌液中所有细胞的表面。(2)将上述磁功能化菌液接种至新的含0.7mmoll-1四氯乙烯的厌氧培养瓶中；(3)将所述的厌氧培养瓶在30℃，180rpm的黑暗条件下恒温振荡培养，定期测定培养瓶内的四氯乙烯含量；待达到培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻，用永磁体对培养瓶加载磁场，吸引已启动四氯乙烯脱氯的厌氧培养瓶中的磁功能化菌体，使菌液中的菌体按照表面磁纳米颗粒的附着量大小分离，部分被吸附至瓶壁上而部分悬于上清菌液中。此处所用的永磁体的表磁为2622gauss，磁场加载时间为10min，到达时间后撤去永磁体并用注射器吸取厌氧培养瓶内的上清菌液，由此完成一次传代培养。本实施例中，已启动四氯乙烯脱氯的时刻被认定为0.25mmoll-1四氯乙烯脱氯成为三氯乙烯的时刻。(4)重复步骤(1)，将上一步得到的上清菌液在厌氧环境中重新利用纳米磁颗粒进行磁功能化，具体过程如前所述。然后将磁功能化菌液接种至新的含0.7mmoll-1四氯乙烯的厌氧培养瓶中，在30℃，180rpm的黑暗条件下恒温振荡培养，以进行下一次传代培养。(5)为了进一步分析传代培养过程中微生物群落结构的变化，每一次传代培养过程中同步用相同的上清菌液进行一个监测试验，其做法是将步骤(3)中上清菌液不进行磁功能化接种至新的含0.7mmoll-1四氯乙烯的厌氧培养瓶中，在30℃，180rpm的黑暗条件下恒温振荡培养，定期测定培养瓶内的四氯乙烯含量，在脱氯活动结束后测定微生物群落结构。如图1中所示，在传代培养过程中，左边一列试验是将一半的上清液磁功能化后接种，目的是为了下一次传代。右边一列试验是另一半的上清液不进行磁功能化直接接种，目的是检测脱氯情况和微生物群落结构，防止磁颗粒本身对于脱氯和微生物群落的影响。(6)重复上述步骤(1)至步骤(5)多次，获得一个四氯乙烯脱氯增强混合培养物。在本实施例中，通过dem方法传代一共进行11次，m-1、m-2、…、m-12分别表示原厌氧脱氯培养物、第1次传代得到的厌氧脱氯培养物、第2次传代得到的厌氧脱氯培养物、…、第11次传代得到的厌氧脱氯培养物。2.分析方法(1)四氯乙烯脱氯速率常数的计算ct＝c0×e-kt其中，t为反应时间(day)；ct为t时刻体系中四氯乙烯的浓度(mmoll-1)；c0为初始时刻体系中四氯乙烯的浓度(0.7mmoll-1)；k为四氯乙烯脱氯速率常数(day-1)。(2)微生物群落结构的测定用注射器抽取1ml正常连续传代的菌液，在16000g的条件下离心15min收集菌体，提取菌体的基因组dna。利用细菌通用引物341f(cctacgggrsgcagcag)和806r(ggactacvvgggtatctaatc)对v3-v4区进行pcr扩增，对pcr扩增产物进行高通量测序，并用silva数据库对获得的序列进行注释。二.实验结果通过dem方法传代显著改变了该四氯乙烯厌氧脱氯培养物的微生物群落结构(表2)。从m-1至m-2，methanosarcina的相对丰度从48.5％降至低于检测限，从m-2至m-11均未检测到。petrimonas的相对丰度在m-2显著增加(p＝0.005)，在m-2至m-11保持稳定(p＝0.052)。dehalobacterium的相对丰度在m-2显著增加(p＝0.002)，在m-2至m-5保持稳定(p＝0.083)，在m-11增加至52.9±11.1％。脱氯菌dehalococcoides的相对丰度在m-1至m-11均保持稳定(p＝0.056)。通过dem方法传代显著提高了该四氯乙烯厌氧脱氯培养物的四氯乙烯脱氯速率(图2，m-1至m-11)。从m-1至m-11，四氯乙烯脱氯速率常数从0.057day-1逐渐增加至0.322day-1，且m-5(p＝0.015)和m-11(p＜0.001)的四氯乙烯脱氯常数显著高于m-1。表2.通过dem方法传代时的微生物群落结构变化情况(％)m-1m-2m-3m-4m-5m-11dehalobacterium12.737.032.232.940.352.9methanosarcina48.50.00.00.00.00.0petrimonas4.917.515.919.914.014.7syner-011.63.11.93.32.50.0methanobacterium0.00.00.00.00.00.0sedimentibacter0.00.00.00.00.00.0proteiniphilum1.31.00.81.41.31.9dehalococcoides0.10.20.40.30.30.2aminivibrio0.00.00.00.00.00.0desulfovibrio0.00.00.00.00.00.0pelolinea0.00.00.00.00.00.0propionicicella0.20.20.10.10.10.4burkholderialesbacteriumbeta_020.00.00.00.00.00.0mesotoga0.00.00.00.00.00.0syntrophomonas0.20.00.00.00.00.0escherichia-shigella0.00.00.00.10.10.1sphaerochaeta0.00.00.00.10.00.1longilinea0.00.00.00.00.00.0pseudomonas0.00.00.00.00.00.0curvibacter0.00.00.00.00.00.0other30.440.948.641.941.329.9注：表中数字表示传代的代数。表中只列出了平均相对丰度前20位的属。根据以上结果可以看出，dem方法通过施用磁纳米颗粒和缩短传代时间，淘汰了原微生物群落中的慢生长菌如methanosarcina，富集了原微生物群落中的快生长菌如dehalobacterium和petrimonas等，增强了该微生物群落的四氯乙烯代谢活性，提高四氯乙烯脱氯速率。以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，然其并非用以限制本发明。有关
技术领域：
的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此凡采取等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，步骤如下：
s1：将含有厌氧脱氯菌的菌液在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，使磁纳米颗粒通过静电作用非特异地包裹在菌液中所有细胞的表面；
s2：将磁功能化后的菌液接种至含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，并进行恒温振荡培养，定期测定培养瓶内的四氯乙烯含量，待达到培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻，对培养瓶加载磁场，使菌液中的菌体按照表面磁纳米颗粒的附着量大小分离，部分被吸附至瓶壁上而部分悬于上清菌液中；吸取厌氧培养瓶中的上清菌液，完成一次传代培养；
s3：将上一次传代培养后得到的所述上清菌液重新在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化，并再次按照s2进行下一次传代培养；
s4：重复上述s3多次，最终获得一个四氯乙烯脱氯增强的混合培养物。
2.根据权利要求1所述的基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，在厌氧环境中利用磁纳米颗粒进行磁功能化的步骤具体如下：
s11：将培养瓶用氮气进行曝气，排出内部空气后密封，经灭菌处理后得到无菌氮气培养瓶；
s12：用注射器抽取菌液和纳米磁颗粒溶液注入所述无菌氮气培养瓶，然后将将其置于孵育环境中进行孵育，获得磁功能化的菌液。
3.根据权利要求2所述的基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s11中的曝气过程是采用高纯氮气曝气2min。
4.根据权利要求2所述的基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s12中加入菌液和纳米磁颗粒溶液的体积比为4:1；菌液的浓度为108copiesml-1；纳米磁颗粒溶液的浓度为8.1gl-1。
5.根据权利要求2所述的基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s12中的孵育过程是将所述无菌氮气培养瓶置于摇床中，在180rpm和30℃条件下避光孵育30min。
6.根据权利要求1所述的基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述含四氯乙烯的厌氧培养瓶中，四氯乙烯的浓度为0.7mmoll-1。
7.根据权利要求1所述基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述磁纳米颗粒为聚烯丙基胺盐酸盐修饰的四氧化三铁纳米颗粒。
8.根据权利要求1所述基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s2中，培养瓶内的微生物启动四氯乙烯脱氯的时刻为0.25mmoll-1四氯乙烯脱氯成为三氯乙烯时。
9.根据权利要求1所述基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s2中，利用永磁体对培养瓶加载磁场，永磁体的表磁为2622gauss，磁场加载时间为10min。
10.根据权利要求1所述基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法，其特征在于，所述s1中，含有厌氧脱氯菌的菌液由从多氯联苯污染土壤样品中富集得到无沉积物的多氯联苯厌氧脱氯混合培养物，培养早期利用多氯联苯、培养晚期利用四氯乙烯作为底物连续传代培养得到。
技术总结本发明公开了一种基于磁纳米颗粒的脱氯增强方法。该方法具体包括将原厌氧脱氯混合培养物在厌氧环境中进行磁功能化；将磁功能化的培养物接种至含有四氯乙烯的厌氧培养瓶中，恒温震荡培养；定期测定四氯乙烯含量，当其脱氯启动时利用永磁体分离上清菌液与沉淀；将上清菌液中的菌体在厌氧环境中重新进行磁功能化，将其接种至新的含有四氯乙烯的厌氧培养瓶中进行传代。本发明通过施用磁颗粒和缩短传代时间，富集了群落中的快生长微生物，大大提高该厌氧脱氯混合培养物对四氯乙烯的脱氯速率。
技术研发人员：沈超峰;陈柯蓁;刘泽钒;唐晴;羊嘉文;陈靖文
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：2021.04.21
技术公布日：2021.08.03
