本发明属于生物技术和微生物制品领域，具体地涉及一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物及其应用。
背景技术：
：抗生素的滥用导致的药物耐药性、生态环境、食品中药物残留、生物卫生安全的问题引起了世界的广泛关注，我国政府也颁布了相应的法律法规或措施推进“无抗进程”。新型抗生素替代物的研发成为畜牧业亟待解决的重大科学问题。噬菌体作为一种天然存在的细菌“克星”在“无抗”时代可能扮演着重要的角色。早在1917年噬菌体就用于人体感染的治疗，但随着20世纪40年代抗生素的出现，对噬菌体治疗价值的研究基本上被搁置了。噬菌体是细菌的捕食者，每48h摧毁世界一半的细菌。因此，近年来关于将噬菌体作为抗生素替代制剂的研究受到了普遍关注，尤其是在医学、养殖和食品安全等领域的应用受到了国内外学者的广泛关注，成为了当前的研究热点之一。相继出现了噬菌体制剂产品在食品加工及保鲜、动物饲料添加剂、动物养殖以及人类临床中得到应用，由此可见，噬菌体的发展前景非常广阔。然而，在噬菌体的应用过程中，由于其用量大，绝大多数以液体制剂的形式存在，往往需要加入保存保护剂从而来保证噬菌体的活力。而现有的保护剂对噬菌体保存效果不佳，噬菌体的保存时间短，存活率低，噬菌体容易被污染，并且必须在低温和超低温条件下进行保存，使得噬菌体发展极大程度上受到的限制，因此，噬菌体的保存技术是制约噬菌体广泛应用的重要技术难题。技术实现要素：发明目的：为了克服以上技术问题，本发明提供了一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物，增加噬菌体制剂产品在非低温环境中的保存稳定性，提高并延长了噬菌体制剂产品的保存周期。本发明一个方面提供了一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物：以组分含量计，包括以下组分：在本发明的具体技术方案中，以组分含量计，包括以下组分：本发明另一个方面提供了一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物：由以下组分组成：在本发明的具体技术方案中：由以下组分组成，在本发明的具体技术方案中，所述明胶为2％浓度的明胶。在本发明的具体技术方案中，所述甘油为60％浓度的甘油。在本发明的具体技术方案中，所述水为去离子水或纯化水。在本发明的具体技术方案中，组合物的ph值为6.8-7.5。本发明另一个方面提供了一种噬菌体组合制剂，其特征在于包含噬菌体以及权利要求1-8任一项所述的组合物；在本发明的具体技术方案中，组所述噬菌体为一种噬菌体或者多种噬菌体的组合；在本发明的具体技术方案中，组所述噬菌体选自大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体、副溶血弧菌噬菌体。本发明另一个方面提供了所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将氯化钠、硫酸镁、明胶、磷酸氢二钾和磷酸二氢钠溶于水中，混合均匀；2)将甘氨酸、山梨酸钾加入步骤1)得到的溶液中后再加入甘油，混合均匀；3)调节步骤2)得到的溶液ph值至6.8-7.5，然后灭菌，即得。本发明另一个方面提供了所述的组合物的用于制备噬菌体制剂的用途；在本发明的具体技术方案中，权利要求1-8任一项所述的组合物与噬菌体制剂按照1:1体积比混合均匀，得到具有噬菌体组合制剂；在本发明的具体技术方案中，所述噬菌体为一种噬菌体或者多种噬菌体的组合；所述噬菌体包括大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体和副溶血弧菌噬菌体。作为实施方案，本发明提供了一种噬菌体制剂稳定性的组合物的制备方法，所述方法包括:1)将上述组分含量的氯化钠、硫酸镁、明胶、磷酸氢二钾和磷酸二氢钠溶于水中，升温到20℃，磁力搅拌混匀后备用；2)将上述组分含量的甘氨酸、山梨酸钾加入步骤1)得到的溶液中后再加入组分含量的甘油，磁力搅拌25min；3)调节步骤2)得到的溶液，ph调节到7.2后于121℃高压蒸汽灭菌20min得到所述噬菌体制剂稳定性的组合物；作为实施方案，本发明还提供了一种噬菌体制剂，所述噬菌体制剂包括组合物和噬菌体，其中所述组合物和噬菌体的体积是1:1。作为实验方案，本发明还提供了一种噬菌体制剂产品的制备方法，所述方法包括：在无菌条件下将组合物与噬菌体制剂按照体积比1:1混合均匀，得到具有稳定性的噬菌体制剂产品。本发明的组合物可以使用于不同类型的噬菌体制剂产品，例如包括但不仅限于大肠杆菌噬菌体制剂产品、沙门氏菌噬菌体制剂产品、绿脓杆菌噬菌体制剂产品、副溶血弧菌噬菌体制剂产品。本发明具有有益效果在于：筛选了多种液体保护剂的组合；经37℃加速实验、4℃保存和25℃保存实验证实噬菌体制剂在组合物中对噬菌体制剂产品具有良好的稳定保护作用，本发明的组合物配方与其他保护剂配方相比使噬菌体制剂产品保持长时间的活性和较高的效价，在热加速环境及室温条件下均可使噬菌体制剂产品维持更长时间的稳定性，极大地降低运输及仓储过程的成本。本发明组合物中的各组分协同作用产生了预料不到的技术效果。具体实施方式以下将通过具体实施例，进一步阐明本发明，这些实施例只是为了说明问题，并不以任何方式限制本发明的范围。实施例1本发明组合物的组分的筛选选取12种常见的保护剂添加组分分别进行单因素实验：按表1浓度进行配制并除菌，另设不添加保护剂的对照组1组，共13组；其中1-12组各保护剂百分比均为g/l，余量为去离子水。表113种噬菌体保护剂组分浓度及其除菌方法将上述表1中的保护剂组分，在无菌条件下与大肠杆菌噬菌体按体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。并置于37℃进行恒温加速保存试验，检测其效价，对比各组分的保存效果。结果如表2所示，37℃保存温度下，蔗糖、吐温-80及二甲基亚砜在保存2天后效价降低了1个数量级，保存10天时，下降了3个数量级，保存到30天时，噬菌体失活，本发明组合物中不选用这3种组分；除对照外，甘油、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、明胶、山梨酸钾、甘氨酸、硫酸镁在保存第10天时效价降低了1个数量级，保存到30天时，效价降至6次方，符合筛选要求。其中硫酸镁、明胶、山磷酸钾效果较筛选组分中最佳。综上，噬菌体制剂稳定性组合物的筛选的组分为：甘油、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、明胶、山梨酸钾、甘氨酸、硫酸镁。表237℃下大肠杆菌噬菌体制剂恒温加速试验的效价(pfu/ml)保护剂组分初始2天5天10天30天蔗糖1.90±0.23×10107.10±0.18×1095.60±0.13×1087.60±0.13×107-吐温-801.90±0.14×10105.20±0.12×1092.20±0.12×1081.23±0.13×107-二甲基亚砜1.90±0.25×10104.45±0.09×1095.85±0.32×1083.60±0.13×107-甘油1.90±0.12×10101.76±0.17×10101.05±0.21×10105.30±0.13×1091.50±0.25×106氯化钠1.90±0.15×10101.60±0.21×10101.02±0.18×10104.55±0.22×1092.05±0.14×106磷酸氢二钾1.90±0.22×10101.80±0.28×10101.06±0.32×10104.70±0.32×1093.78±0.27×106磷酸二氢钠1.90±0.26×10101.78±0.33×10101.00±0.09×10105.05±0.19×1092.20±0.33×106明胶1.90±0.16×10102.00±0.20×10101.41±0.11×10108.00±0.31×1095.25±0.12×106山梨酸钾1.90±0.26×10101.90±0.17×10101.40±0.29×10107.75±0.16×1095.75±0.23×106甘氨酸1.90±0.10×10101.75±0.10×10101.08±0.31×10103.45±0.09×1091.70±0.20×106硫酸镁1.90±0.09×10101.88±0.23×10101.37±0.16×10107.88±0.22×1095.80±0.14×106对照1.90±0.30×10108.85±0.07×1093.26±0.22×1087.50±0.11×106-实施例2本发明组合物最佳组分添加量的筛选对上述保护剂组分筛选中，效果最佳的3种硫酸镁、明胶、山磷酸钾进行工作添加量的筛选。硫酸镁将不同添加量的硫酸镁在无菌条件下与大肠杆菌噬菌体按体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。并置于37℃进行恒温加速保存试验，检测其效价，对比各不同添加量的保存效果。结果如表3所示，37℃保存温度下，添加量15g/l和40g/l在保存第5天后效价下降了1个数量级，保存30天后下降了5个数量级；从表3中可以看出，添加量在20-35g/l之间，在保存第10天时效价降低了1个数量级，保存到30天时，效价仍有6次方；其中添加量为30g/l的保存效果最佳，选择30g/l作为组合物添加量使用。表337℃下不同硫酸镁添加量对大肠杆菌噬菌体制剂保存效果的影响(pfu/ml)明胶不同添加量的明胶在无菌条件下与大肠杆菌噬菌体按体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。并置于37℃进行恒温加速保存试验，检测其效价，对比各不同添加量的保存效果。结果如表4所示，37℃保存温度下，添加量1g/l和11g/l在保存第5天后效价下降了1个数量级，保存30天后下降了5个数量级；从表4中可以看出，添加量在3-8g/l之间，在保存第10天时效价降低了1个数量级，保存到30天时，效价仍有6次方；其中添加量为5g/l的保存效果最佳，选择5g/l作为组合物添加量使用。表437℃下不同明胶添加量对大肠杆菌噬菌体制剂保存效果的影响(pfu/ml)山梨酸钾将不同添加量的山梨酸钾在无菌条件下与大肠杆菌噬菌体按体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。并置于37℃进行恒温加速保存试验，检测其效价，对比各不同添加量的保存效果。结果如表5所示，37℃保存温度下，添加量0.01g/l和0.25g/l在保存第5天后效价下降了1个数量级，保存30天后下降了5个数量级；从表5中可以看出，添加量在0.05-0.20g/l之间，在保存第10天时效价降低了1个数量级，保存到30天时，效价仍有6次方；其中添加量为0.10g/l的保存效果最佳，选择0.10g/l作为组合物添加量使用。表537℃下不同山梨酸钾添加量对大肠杆菌噬菌体制剂保存效果的影响(pfu/ml)实施例3本发明组合物最佳组合的筛选对上述筛选出的最佳保护剂组分进行组合，筛选最佳组合物。组合物1将氯化钠6g/l、硫酸镁30g/l、明胶5ml/l、甘氨酸0.1g/l、水按照上述组分添加量配制成组合物1；组合物2将氯化钠6g/l、硫酸镁30g/l、明胶5ml/l、甘氨酸0.1g/l、磷酸二氢钠0.1g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、水按照上述组分添加量配制成组合物2；组合物3将氯化钠6g/l、硫酸镁30g/l、明胶5ml/l、甘氨酸0.1g/l、磷酸二氢钠0.1g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、甘油20ml/l、水按照上述组分添加量配制成组合物3组合物4将氯化钠6g/l、硫酸镁30g/l、明胶5ml/l、甘氨酸0.1g/l、磷酸二氢钠0.1g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、甘油20ml/l、山梨酸钾0.1g/l、水按照上述组分添加量配制成组合物4将上述4种组合物在无菌条件下与大肠杆菌噬菌体按体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。并置于37℃进行恒温加速保存试验，检测其效价，对比不同组合物的保存效果。结果如表6所示，在37℃保存温度下，组合物在保存第10天时效价降低了1个数量级，保存到30天时，不同组合物的保存结果存在差异，但存在协同作用；组合物4的结果最佳，选择组合物4作为本发明的组合物。表637℃下不同保护剂组合对大肠杆菌噬菌体制剂保存效果的影响(pfu/ml)组合物初始2天5天10天30天组合物11.90±0.23×10101.80±0.36×10101.55±0.08×10106.65±0.10×1096.89±0.33×106组合物21.90±0.31×10101.90±0.21×10101.58±0.28×10107.10±0.11×1097.00±0.24×106组合物31.90±0.22×10101.85±0.28×10101.60±0.11×10107.85±0.27×1097.24±0.18×106组合物41.90±0.15×10102.00±0.09×10101.71±0.34×10109.95±0.31×1098.80±0.28×106实施例4制备稳定噬菌体组合物本发明提高噬菌体制剂稳定性的组合物由以组分含量计的以下组分构成：提高噬菌体制剂稳定性的组合物的制备方法，所述方法包括：1)将上述组分含量的氯化钠、硫酸镁、明胶、磷酸氢二钾和磷酸二氢钠溶于水中，升温到20℃，磁力搅拌混匀后备用；2)将上述组分含量的甘氨酸、山梨酸钾加入步骤1)得到的溶液中后再加入组分含量的甘油，磁力搅拌25min；3)调节步骤2)得到的溶液，ph调节到7.2后于121℃高压蒸汽灭菌20min得到所述噬菌体制剂稳定性的组合物；对比保护剂sm液的制备sm液的制备，精确称取氯化钠5.89g，硫酸镁2g，1mtris-hcl(ph＝7.5)50ml，2％明胶5ml，加纯化水定容到1000ml，经过0.22μm滤膜过滤除菌后，得到sm液。对比保护剂60％甘油保护剂60％甘油的制备，精确量取60份的甘油，精确量取20份的去离子水，两者混匀后121℃灭菌20min，得到60％甘油；按照上述1的制备方法的得到本发明噬菌体制剂稳定性的组合物(以下简称“组合物”)，按照上述2和3的制备方法得到传统噬菌体保护剂sm液保护剂(以下简称sm液)和传统噬菌体保护剂60％甘油保护剂(以下简称60％甘油)。实施例5本发明组合物对不同噬菌体在37℃恒温加速保存试验的影响大肠杆菌噬菌体将实施例4所得组合物、sm液和60％甘油与大肠杆菌噬菌体制剂混合。取大肠杆菌噬菌体pd07和大肠杆菌噬菌体pd185按1:1混合成噬菌体鸡尾酒组合。在无菌条件下将大肠杆菌噬菌体鸡尾酒组合分别与本发明组合物、sm液和60％甘油按体积比1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂。将以上加入保护剂的大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂置于37℃下进行恒温加速试验，以sm液和60％甘油作为对照，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体鸡尾酒制剂中噬菌体的效价稳定性的影响。结果如表7所示，37℃保存温度下，本发明组合物中大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂在保存10天后噬菌体效价开始下降一个数量级，保存30天下降4个数量级，在保存60天时效价仍有4次方；sm液中大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂于第5天后效价开始下降1个数量级，保存10天效价下降2个数量级，在保存30天时，效价降至2次方，在保存60天时噬菌体完全失活；60％甘油中大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂，在保存3天后开始下降1个数量级，保存10天下降3个数量级，在保存30天时，完全失活。通过该结果说明较sm液和60％甘油相比，本发明组合物对大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂更具有稳定的保护效果。表737℃下大肠杆菌噬菌体鸡尾酒制剂恒温加速试验的效价(pfu/ml)沙门氏菌噬菌体将实施例4所得组合物、sm液和60％甘油与沙门氏菌噬菌体混合取沙门氏菌噬菌体sp8，在无菌条件下分别与本发明组合物、sm液和60％甘油按照体积比为1:1混合均匀，得到沙门氏菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的沙门氏菌噬菌体制剂置于37℃下进行恒温加速试验，以sm液和60％甘油作为对照，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。结果如表8所示，37℃保存温度下，本发明组合物中沙门氏菌噬菌体在保存10天后开始下降1个数量级，保存30天下降2个数量级，在保存60天时效价降至6次方；sm液中沙门氏菌噬菌体，在保存5天开始下降1个数量级，保存10天下降2个数量级，在保存60天时，效价降至4次方；60％甘油中沙门氏菌噬菌体，在保存5天开始下降1个数量级，保存10天下降2个数量级，在保存60天时，完全失活。通过该结果说明较sm液和60％甘油相比，本发明组合物对沙门氏菌噬菌体更具有稳定的保护效果。表837℃下沙门氏菌噬菌体制剂恒温加速试验的效价(pfu/ml)时间噬菌体组合物sm液60％甘油1天sp82.00±0.14×10112.00±0.15×10112.10±0.18×10113天sp82.00±0.16×10112.00±0.17×10111.90±0.22×10115天sp81.78±0.34×10118.90±0.14×10105.00±0.16×101010天sp89.80±0.13×10108.00±0.24×1092.50±0.12×10915天sp83.00±0.24×10106.80±0.26×1081.20±0.13×10730天sp85.20±0.09×1081.10±0.31×1061.90±0.17×10560天sp85.50±0.12×1065.60±0.12×104-绿脓杆菌噬菌体将实施例4所得组合物、sm液和60％甘油与绿脓杆菌噬菌体混合取绿脓杆菌噬菌体asp11，在无菌条件下分别与本发明组合物、sm液和60％甘油按照体积比为1:1混合均匀，得到绿脓杆菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的绿脓杆菌噬菌体制剂置于37℃下进行恒温加速试验，以sm液和60％甘油作为对照，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。结果如表9所示，37℃保存温度下，本发明组合物中绿脓杆菌噬菌体在保存10天后噬菌体效价开始下降1个数量级，保存30天下降4个数量级，在保存60天时效价降至4次方；sm液中绿脓杆菌噬菌体，在保存3天开始下降1个数量级，保存10天下降2个数量级，在保存30天时，效价降至2次方，在保存60天时，完全失活；60％甘油中绿脓杆菌噬菌体，在保存3天开始下降1个数量级，保存10天下降4个数量级，在保存30天时，完全失活。通过该结果说明较sm液和60％甘油相比，本发明组合物对绿脓杆菌噬菌体更具有稳定的保护效果。表937℃下绿脓杆菌噬菌体制剂恒温加速试验的效价(pfu/ml)时间噬菌体组合物sm液60％甘油1天asp112.00±0.14×10102.10±0.18×10101.90±0.11×10103天asp111.90±0.22×10109.80±0.11×1094.50±0.17×1095天asp111.55±0.12×10101.60±0.08×1097.80±0.22×10810天asp119.75±0.10×1091.00±0.14×1085.50±0.14×10615天asp115.60±0.08×1089.80±0.25×1067.20±0.19×10430天asp118.45±0.13×1066.20±0.12×102-60天asp113.50±0.30×104--副溶血弧菌噬菌体将实施例4所得组合物、sm液和60％甘油与副溶血弧菌噬菌体混合取副溶血弧菌噬菌体pg31，在无菌条件下分别与本发明组合物、sm液和60％甘油按照体积比为1:1混合均匀，得到副溶血弧菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的副溶血弧菌噬菌体制剂置于37℃下进行恒温加速试验，以sm液和60％甘油作为对照，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。结果如表10所示，37℃保存温度下，本发明组合物中副溶血弧菌噬菌体在保存10天后噬菌体效价开始下降1个数量级，保存30天下降4个数量级，在保存60天时效价降至4次方；sm液中副溶血弧菌噬菌体，在保存3天开始下降1个数量级，保存10天下降3个数量级，在保存30天时，效价降至2次方，在保存60天时，完全失活；60％甘油中副溶血弧菌噬菌体，在保存3天开始下降1个数量级，保存10天下降4个数量级，在保存30天时，完全失活。通过该结果说明较sm液和60％甘油相比，本发明组合物对副溶血弧菌噬菌体更具有稳定的保护效果。表1037℃下副溶血弧菌噬菌体制剂恒温加速试验的效价(pfu/ml)时间噬菌体组合物sm液60％甘油1天pg312.50±0.15×10102.20±0.14×10102.30±0.15×10103天pg312.35±0.26×10108.10±0.16×1095.50±0.09×1095天pg311.80±0.13×10106.20±0.13×1081.80±0.12×10810天pg319.88±0.31×1092.00±0.25×1072.50±0.33×10615天pg311.20±0.11×1081.80±0.12×1065.10±0.19×10430天pg319.80±0.18×1063.00±0.21×102-60天pg311.50±0.15×104--实施例6本发明组合物对不用噬菌体在4℃和25℃长期稳定性保存试验的影响大肠杆菌噬菌体取大肠杆菌噬菌体，在无菌条件下分别与实施例4所得组合物或sm液，按照体积比为1:1混合均匀，得到大肠杆菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的大肠杆菌噬菌体制剂置于4℃和25℃下进行长期稳定性保存试验，同时以sm液作为对照，保存前半年，每30天测定其效价，半年后，每半年测定其效价，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。试验结果如表11所示，4℃保存温度下，本发明组合物中大肠杆菌噬菌体效价在保存90天后降低1个数量级，在保存1年半时下降2个数量级，保存2年下降3个数量级；sm液中大肠杆菌噬菌体在保存60天时下降1个数量级，在保存1年时下降2个数量级，保存1年半时下降3个数量级，保存2年时下降4个数量级；25℃保存温度下，本发明组合物中大肠杆菌噬菌体在保存30天后开始下降1个数量级，在保存2年时效价在2次方；sm液中大肠杆菌噬菌体在保存30天后开始下降1个数量级，在保存2年时效价在1次方。通过该实验说明较sm液相比，本发明组合物对大肠杆菌噬菌体更具有稳定的保护作用，同时可使大肠杆菌噬菌体在室温条件下具有较长的存放时间，利于噬菌体制剂的生产及应用。表114℃和25℃下大肠杆菌噬菌体与长期稳定性保存试验中的效价(pfu/ml)沙门氏菌噬菌体取沙门氏菌噬菌体，在无菌条件下分别与实施例4所得组合物或sm液，按照体积比为1:1混合均匀，得到沙门氏菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的沙门氏菌噬菌体制剂置于4℃和25℃下进行长期稳定性保存试验，同时以sm液作为对照，保存前半年，每30天测定其效价，半年后，每半年测定其效价，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。试验结果如表12所示，4℃保存温度下，本发明组合物中沙门氏菌噬菌体效价在保存1年时降低1个数量级，保存2年时，下降2个数量级；sm液中沙门氏菌噬菌体在保存1年时下降1个数量级，保存2年时，下降2个数量级，效价是本发明组合物的50％左右。25℃保存温度下，本发明组合物中沙门氏菌噬菌体在保存90天后开始下降1个数量级，在保存1年时下降2个数量级，在保存2年时效价降2个数量级；sm液中沙门氏菌噬菌体在保存90天后开始下降1个数量级，在保存2年时下降4个数量级。通过该实验说明较sm液相比，本发明组合物对沙门氏菌噬菌体更具有稳定的保护作用，同时可使沙门氏菌噬菌体在室温条件下具有较长的存放时间，利于噬菌体制剂的生产及应用。表124℃和25℃下沙门氏菌噬菌体与长期稳定性保存试验中的效价(pfu/ml)绿脓杆菌噬菌体取绿脓杆菌噬菌体，在无菌条件下分别与实施例4所得组合物或sm液，按照体积比为1:1混合均匀，得到绿脓杆菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的绿脓杆菌噬菌体制剂置于4℃和25℃下进行长期稳定性保存试验，同时以sm液作为对照，保存前半年，每30天测定其效价，半年后，每半年测定其效价，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。试验结果如表13所示，4℃保存温度下，本发明组合物中绿脓杆菌噬菌体效价在保存30天后降低1个数量级，保存120天时效价降低2个数量级，保存1年半降低3个数量级，保存2年效价降至5次方；sm液中绿脓杆菌噬菌体在保存30天时下降1个数量级，保存90天时降低2个数量级，保存1年时降低3个数量级，保存2年时，效价降低至4次方。25℃保存温度下，本发明组合物中绿脓杆菌噬菌体在保存30天时开始降低1个数量级，在保存2年时效价降至2次方；sm液中绿脓杆菌噬菌体在保存90天时降低1个数量级，在保存2年时，完全失活。通过该实验说明较sm液相比，本发明组合物对绿脓杆菌噬菌体更具有稳定的保护作用，同时可使绿脓杆菌噬菌体在室温条件下具有较长的存放时间，利于噬菌体制剂的生产及应用。表134℃和25℃下绿脓杆菌噬菌体与长期稳定性保存试验中的效价(pfu/ml)副溶血弧菌噬菌体取副溶血弧菌噬菌体，在无菌条件下分别与实施例4所得组合物或sm液，按照体积比为1:1混合均匀，得到副溶血弧菌噬菌体制剂。将以上加入保护剂的副溶血弧菌噬菌体制剂置于4℃和25℃下进行长期稳定性保存试验，同时以sm液作为对照，保存前半年，每30天测定其效价，半年后，每半年测定其效价，对比本发明组合物与常规保护剂对噬菌体效价稳定性的影响。试验结果如表14所示，4℃保存温度下，本发明组合物中副溶血弧菌噬菌体效价在保存60天时降低1个数量级，在保存120天时降低2个数量级，在保存2年时效价降低至7次方；sm液中副溶血弧菌噬菌体在保存30天时下降1个数量级，在保存90天时降低2个数量级，在保存1年时降低3个数量级，在保存2年时效价降低至6次方。25℃保存温度下，本发明组合物中副溶血弧菌噬菌体在保存30天时降低1个数量级，在保存90天时降低2个数量级，在保存2年时，效价降低至3次方；sm液中副溶血弧菌噬菌体在保存30天时降低1个数量级，在保存2年时效价降至2次方。通过该实验说明较sm液相比，本发明组合物对副溶血弧菌噬菌体更具有稳定的保护作用，同时可使副溶血弧菌噬菌体在室温条件下具有较长的存放时间，利于噬菌体制剂的生产及应用。表144℃和25℃下副溶血弧菌噬菌体与长期稳定性保存试验中的效价(pfu/ml)从以上实验结果可以看出，对于传统的甘油保护剂以及sm保护剂而言，本发明的方案实现了噬菌体稳定性上几个数量级的提高，产生了预料不到的技术效果。本发明的组合物中包含了既包含了sm保护剂中的一部分盐，还包含了甘油试剂中的甘油，但是产生了远远超过这两种产品组合的效果，也证明了本发明的组合物各组分之间配合能够产生协同作用，而非各组分之间的简单叠加。当前第1页1 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技术特征：1.一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物，其特征在于：以组分含量计，包括以下组分：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：以组分含量计，包括以下组分：
3.一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物，其特征在于：由以下组分组成：
4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于：所述明胶为2％浓度的明胶。
5.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于：所述甘油为60％浓度的甘油。
6.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于：所述水为去离子水或纯化水。
7.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于：组合物的ph值为6.8-7.5。
8.一种噬菌体组合制剂，其特征在于包含噬菌体以及权利要求1-8任一项所述的组合物；
优选地，所述噬菌体为一种噬菌体或者多种噬菌体的组合；
更优选地，所述噬菌体选自大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体、副溶血弧菌噬菌体。
9.权利要求1-8任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将氯化钠、硫酸镁、明胶、磷酸氢二钾和磷酸二氢钠溶于水中，混合均匀；
2)将甘氨酸、山梨酸钾加入步骤1)得到的溶液中后再加入甘油，，混合均匀；
3)调节步骤2)得到的溶液ph值至6.8-7.5，然后灭菌，即得。
10.根据权利要求1-8任一项所述的组合物的用于制备噬菌体制剂的用途；
优选地，权利要求1-8任一项所述的组合物与噬菌体制剂按照1:1体积比混合均匀，得到具有噬菌体组合制剂；
更优选地，所述噬菌体为一种噬菌体或者多种噬菌体的组合；所述噬菌体包括大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体和副溶血弧菌噬菌体。
技术总结本发明涉及一种提高噬菌体制剂稳定性的组合物及其应用。具体公开了提高噬菌体制剂稳定性的组合物，包括以下组分：氯化钠6g/L、硫酸镁20‑35g/L、磷酸氢二钾0.1g/L、磷酸二氢钠0.1g/L、明胶3‑8mL/L、山梨酸钾0.05‑0.2g/L、甘氨酸0.1g/L、甘油20mL/L、水余量。还公开了所述组合物的用于制备噬菌体制剂的用途。本发明的组合物配方与其他保护剂配方相比使噬菌体制剂产品保持长时间的活性和较高的效价，在热加速环境及室温条件下均可使噬菌体制剂产品维持更长时间的稳定性，极大地降低运输及仓储过程的成本。
技术研发人员：潘强;任慧英;孙虎芝;庄莹;王佳存;庄盈婷;李大任;张召佐
受保护的技术使用者：青岛诺安百特生物技术有限公司
技术研发日：2020.12.21
技术公布日：2021.08.03
