本申请涉及生物医药的
技术领域：
，更具体地说，它涉及一种消毒液及其制备方法和应用。
背景技术：
：髓过氧化物酶(mpo)是一种重要的吞噬小体内颗粒蛋白，其属于哺乳动物血红素过氧化物酶家族，与双氧一种消毒液及其制备方法和应用-水和氯化物结合能够具有杀菌消毒的能力。mpo主要存在于中性粒细胞中，也有少量在单核细胞中，但是一旦单核细胞分化为巨噬细胞，mpo就会消失。当哺乳动物无炎症时，血管外组织中没有mpo的存在，而炎症一旦发生，mpo可以自未完全闭合的吞噬体中逃逸至细胞外，或者在抗体或补体包被的无法吞噬的较大异物的刺激下释放至细胞外，并发挥杀菌作用。研究表明：mpo在双氧水和氯化物存在的前提条件下，以适当的用量，能够与细菌、真菌等结合，以抑制靶微生物的生长，同时也不会损伤宿主细胞。mpo能够在多种炎症性疾病发生时起到抗炎的作用。例如，在急性中耳炎发生时，mpo的表达量增高，能够对肺炎链球菌起到杀菌的作用。又如，在抗中性粒细胞胞浆髓过氧化物酶酶抗体相关性血管炎患者中，mpo的表达量也显著增高，和其它物质(铜蓝蛋白，ceruloplasmin)共同发挥其杀菌作用。将mpo作为杀菌消毒类产品使用时，通常和氯化物、双氧水配合使用。对于伤口感染(大多是细菌感染)，采用含有mpo的物质进行杀菌时，在us20090280102a1中，mpo的用量在0.001～50mg/g的范围内，但是当mpo用量过高时，有引起组织损伤的风险。而降低mpo用量时，其杀菌和对微生物抑制生长的作用又会有所降低。因此，提供一种mpo用量低且能够高效杀菌、抑制细菌生长繁殖的消毒液是十分必要的。技术实现要素：为了在mpo用量低的情况下保证该类消毒液优异的杀菌效果，本申请提供一种消毒液及其制备方法和应用。第一方面，本申请提供一种消毒液，采用如下的技术方案：一种消毒液，包括以下重量份的原料：水1000份，mpo0.01～10份，卤化物7～11份，h2o228～52份，铁盐14.5～23.5份，有机酸；添加有机酸后消毒液的ph为5～6。通过采用上述技术方案，在mpo、卤化物和h2o2共同存在时，能够通过化学反应生成具有强氧化性的物质hocl，并形成具有氧化功能的自由基，以达到优异的杀菌效果。但是，在机体不出现炎症时，是不会有mpo产生的，往往是炎症发生时会有mpo的产生，以发挥其抑制细菌的效果；但是正常情况上下，过量mpo的存在也会造成机体损伤。本申请综合考虑若是mpo在细胞外含量过高时会引起组织损伤的风险，采用在减少mpo用量的同时，通过铁盐和mpo、卤化物以及h2o2之间的相互作用、相互复配，以最终获得杀菌效果优异的消毒液。在降低mpo用量后，虽然消毒液的杀菌能力显著降低；但是，在消毒液中添加铁盐后发现：铁盐和有机酸在复配后使得消毒液具有更强的杀菌能力。有机酸的添加使得消毒液为酸性溶液，在酸性环境下，能够有效提高消毒液的杀菌作用和对微生物生长繁殖的抑制作用；而铁盐本身也具有一定的氧化性，能够进一步提高消毒液的杀菌效果。上述铁盐和有机酸加入消毒液中，有效提高了mpo、卤化物和h2o2所制备得到的消毒液的杀菌效果。本申请的消毒液，对金黄色葡萄球菌的杀菌率达到94％～99.6％；对铜绿假单胞菌的杀菌率高达95％～100％；对大肠埃希菌的杀菌率高达91.6％～99.8％。此外，和普通的消毒液相比，本申请的消毒液是以mpo为主要作用物质的，细菌、真菌等不会对其产生耐药性。在使用本申请的消毒液时需要现配现用，需要将mpo、卤化物和h2o2分别添加至水中，随后加入铁盐和有机酸，以配置成均匀的溶液，即可使用。优选的，所述卤化物为氯化物或者溴化物。进一步优选的，所述氯化物为氯化钠。优选的，水1000份，mpo0.01～10份，卤化物7～11份，h2o228～52份，铁盐18～20.5份，有机酸。通过采用上述技术方案，通过进一步优化各原料之间的配合比例关系，以得到更加显著的杀菌效果。优选的，所述铁盐为氯化铁和硝酸铁中的至少一种。在选择铁盐时，可以选择的物质为多种，如碳酸铁、硫酸铁等。为避免在将铁盐加入后产生气体以及其它沉淀，因此在此处选择氯化铁和硝酸铁。此外，这两种铁盐和有机酸、mpo、卤化物和h2o2之间相互复配，进一步提高了消毒液的氧化性，从而显著提高消毒液的杀菌性能。优选的，所述铁盐为氯化铁和硝酸铁的混合物。经过实验发现，当铁盐为氯化铁和硝酸铁的混合物时，和铁盐仅仅选择为氯化铁或硝酸铁时，制备得到的消毒液的杀菌效果更加优异。优选的，所述氯化铁和硝酸铁的质量比为1:(4～6)。通过采用上述技术方案，进一步优化了铁盐的种类选择，以及选择的多种铁盐之间的添加比例，得到杀菌效果更加优异的消毒液。当选择的铁盐为硝酸铁和氯化铁的混合物时，制备得到的消毒液对金黄色葡萄球菌的杀菌率高达99.4％，对铜绿假单胞菌的杀菌率高达100％，对大肠埃希菌的杀菌率高达98.6％。优选的，所述有机酸选自柠檬酸、醋酸、酒石酸、苹果酸和乳酸中的一种。通过采用上述技术方案，添加的有机酸为常用天然有机酸，在为消毒液提供酸性环境的同时，对非靶标物质(即，除了要抑制的细菌之外的细胞或组织)的损伤小。而将有机酸选择为柠檬酸时，其能够很好的和硝酸铁相互作用，使得消毒液的酸性和氧化性提高后，具有更优异的杀菌效果。第二方面，本申请提供一种上述消毒液的制备方法，采用如下的技术方案：一种上述消毒液的制备方法，包括以下步骤：将mpo、卤化物和h2o2分别添加至水中，随后加入铁盐和有机酸后搅拌均匀。优选的，添加有机酸至溶液的ph为5～6。通过采用上述技术方案，在上述的ph条件下，制备得到的消毒液的杀菌效果优异。由于mpo在弱碱和中性条件下具有较好的杀菌性能，因此，溶液的ph不宜过低；但是同时，为了使得铁盐和有机酸在复配后，有效进消毒液发挥更好的抑制微生物生长繁殖的能力，将消毒液的ph调节至5～6的范围内，以使得消毒液具有优异的杀菌性能。第三方面，本申请提供一种上述消毒液的应用，采用如下的技术方案：一种上述消毒液的应用，所述消毒液可以用于皮肤、黏膜消毒，以及制备促进皮肤、黏膜伤口愈合的制剂。本申请制备得到的消毒液，其应用较为广泛。如用于抑制革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌、孢子、真菌、病毒和朊病毒的生长繁殖。具体的作用微生物可以是细菌类的，如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、绿色链球菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、嗜酸乳杆菌、痤疮丙酸杆菌、蜡样芽孢杆菌、产芽孢梭菌、阴道加特纳菌、霍乱沙门氏菌、牛型分枝杆菌、地分枝杆菌和耻垢分枝杆菌。原核生物如：沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体。霉菌和酵母菌如：烟曲霉，黄曲霉，红色毛癣菌、串珠镰刀菌、白色念珠菌、假丝酵母菌和新型隐球菌。病毒如鼻病毒、艾滋病毒、乳头瘤病毒、单纯疱疹病和新冠病毒。本申请的消毒液可以作用于以上微生物但是不限于以上列举的微生物。优选的，所述消毒液的使用方式包括：直接涂覆在伤口处或制备成敷料后敷于伤口处。本申请的消毒液可以用于抑制伤口处的细菌、真菌等微生物的生长繁殖，也适用于抑制包括眼部、呼吸道、食道、尿道、阴道、肛门等皮肤和黏膜组织的细菌、真菌等微生物的生长繁殖。综上所述，本申请具有以下有益效果：1、由于本申请通过降低mpo的用量，并添加铁盐和有机酸，实现在低mpo用量的前提下得到一种高效杀菌的消毒液。2、本申请的消毒液中优选的铁盐是硝酸铁和氯化铁，在同等条件下制备得到的消毒液的杀菌效果优于仅添加单一氯化铁的消毒液。说明书附图图1是分别对实验组大鼠使用实施例5的消毒液、对照组大鼠使用对比例5的消毒液后的烧伤伤口的示意图。具体实施方式以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。实施例本申请的原料若无特殊说明均为普通市售获得。其中，mpo购自sigma-aldrich公司。mh琼脂培养基为普通市售，购自长沙三行生物科技有限公司，环凯品牌，型号为028050。金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)为购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(chinageneralmicrobiologicalculturecollectioncenter，cgmcc)的atcc25923菌株；铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)为购自cgmcc的atcc27853菌株；大肠埃希菌(escherichiacoli)为购自上海烜雅生物科技有限公司的大肠埃希氏菌的标准菌株，其货号为xy-wsw-1699。实施例1一种消毒液，包括以下原料：水100g，mpo0.001g，氯化钠0.7g，h2o22.8g，氯化铁0.29g，硝酸铁1.16g，柠檬酸。将上述用量的mpo、氯化钠和h2o2分别添加至水中，搅拌均匀；随后加入硝酸铁、氯化铁和柠檬酸后搅拌均匀即可，加入柠檬酸后溶液的ph为5.5。实施例2-15实施例2-13和实施例1的区别在，实施例2-13制备消毒液的原料不同，具体见表1。表1实施方案水/gmpo/g氯化钠/gh2o2/g氯化铁/g硝酸铁/g实施例11000.0010.72.80.291.16实施例210011.15.20.342.01实施例31000.650.93.60.31.5实施例41000.650.93.60.251.25实施例51000.650.93.60.321.58实施例61000.650.93.60.341.71实施例71000.650.93.60.361.79实施例81000.650.93.60.381.52实施例91000.650.93.60.271.63实施例10本实施例和实施例5的区别在于，以等重量的氯化铁替换硝酸铁，即铁盐只选择为氯化铁，其它同实施例9。对比例1-3对比例1-3和实施例5的区别在于，制备消毒液的原料用量和/或原料种类不同，具体见表2。表2对比例4对比例4和实施例5的区别在于，对比例4得消毒液中没有添加柠檬酸。对比例5对比例5和实施例5的区别在于，对比例5中的消毒液中没有添加柠檬酸、氯化铁和硝酸铁。性能检测试验将上述制备得到的消毒液做杀菌实验，分别检测各实施例和各对比例中的消毒液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的抑制效果。具体步骤为：金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)的活化与培养：将保存在-80℃的金黄色葡萄球菌接种在接种环上，并转接在无菌mh琼脂培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养24h后使得金黄色葡萄球菌活化。随后挑取细菌至0.9％无菌生理盐水内，并调整细菌含量为1000cfu/ml，随后备用。铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)的活化与培养：将保存在-80℃的铜绿假单胞菌接种在接种环上，并转接在无菌mh琼脂培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养24h后使得铜绿假单胞菌活化。随后挑取细菌至0.9％无菌生理盐水内，并调整细菌含量为1000cfu/ml，随后备用。大肠埃希菌(escherichiacoli)的活化与培养：将保存在-80℃的大肠埃希菌接种在接种环上，并转接在无菌mh琼脂培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养24h后使得大肠埃希菌活化。随后挑取细菌至0.9％无菌生理盐水内，并调整细菌含量为1000cfu/ml，随后备用。将实施例1制备得到的消毒液和细菌含量为1000cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌悬液以体积比为1:1的比例混合(此时的混合液中的菌含量为500cfu/ml)，在室温保温3h后，取1ml的混合物涂平板于mh琼脂培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养24h后计算菌落形成单元(cfu)。随后以同样的方式将实施例1制备得到的消毒液分别和大肠埃希菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液混合，随后保温后涂平板于mh琼脂培养基上，培养后计算菌落形成单元(cfu)。然后依次对实施例2-16和对比例1-6制备得到的消毒液做与实施例1相同的处理后，分别计算菌落形成单元(cfu)。具体结果见表3。表3从表3的数据结果中看出，本申请的消毒液，对细菌的杀菌效果优异。其中，将本申请的消毒液加入含有1000cfu/ml金黄色葡萄球菌的菌悬液中4h后(消毒液：菌悬液＝1:1，v/v)，对金黄色葡萄球菌的杀菌率达到94％～99.6％，高于对比例85.2％～93％的杀菌率。将本申请的消毒液加入含有1000cfu/ml铜绿假单胞菌的菌悬液中4h后(消毒液：菌悬液＝1:1，v/v)，对铜绿假单胞菌的杀菌率高达95％～100％，高于对比例80.8％～85.8％的杀菌率。将本申请的消毒液加入含有1000cfu/ml的大肠埃希菌菌悬液中4h后(消毒液：菌悬液＝1:1，v/v)，对大肠埃希菌的杀菌率高达91.6％～99.8％，远高于对比例78.8％～86.4％的杀菌率。从实施例3-7以及对比例1-2的数据结果看出，其中，在添加有柠檬酸的条件下，铁盐(氯化铁和硝酸铁)的总用量对消毒液的杀菌率有影响：其中，当铁盐(氯化铁和硝酸铁)的总用量为1.9g时，消毒液的杀菌率最佳。其次，通过比较实施例5、8-9的数据结果表明，氯化铁和硝酸铁的重量比在1:(4～6)的范围内时，制备得到的消毒液的杀菌率最高。从对比例3-4的数据结果中看出，而本申请消毒液优异的杀菌能力，是通过氯化铁、硝酸铁、柠檬酸和mpo体系(mpo、双氧水和氯化钠)之间相互协配后实现的，彼此之间是缺一不可的。本申请的消毒液可以用于制备促进黏膜伤口或者皮肤表面伤口愈合的制剂。消毒液的使用方式包括：直接涂覆在伤口处或制备成敷料后敷于伤口处。以本申请的实施例5和对比例5制备得到的消毒液进行动物实验，具体的实验步骤为：雄性sd大鼠(8周大)购自斯莱克景达公司。每个实验组四只大鼠，分为两组：实验组和对照组。实验所用的所有动物都单独饲养，并饲养1周以适应实验室条件。在手术前24h时修剪和梳理背毛。手术当日，首先将大鼠麻醉：注射1％戊巴比妥钠(6ml/kg)至腹腔；随后创建烧伤伤口：将圆柱形的玻璃容器(直径为1厘米，内充满94℃的热水)放在大鼠的背部皮肤上15s，随后每个伤口接种5×108cfu的金黄色葡萄球菌(atcc43300)。然后于实验组大鼠伤口处对应使用实施例5的消毒液，于对照组大鼠伤口处对应使用对比例5的消毒液。每周使用对应的消毒液对伤口进行三次治疗。随后用异氟烷麻醉大鼠并在标准高度下拍照。对所有大鼠一直饲喂，直到伤口愈合后对该类大鼠进行安乐死。随后收集全部实验大鼠伤口周围0.5cm的皮肤区域进行进一步观察测定。具体结果见图1，图1中展示的分别是对大鼠制作创面第一天(即图1中的d0所显示的图片)，对具有创面的大鼠分别采用实施例5和对比例5的消毒液第七天(即图1中的d7所显示的图片)以及第二十天(图1中的d20所显示的图片)后的伤口大小图。图中的结果显示：对大鼠伤口施用实施例5和对比例5的消毒液，大鼠的伤口均有所恢复，但是显然施用实施例5的消毒液，大鼠的伤口恢复更快，在第7天和第20天后，施用实施例5消毒液的大鼠的伤口面积更小。本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。当前第1页1 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技术特征：1.一种消毒液，其特征在于，包括以下重量份的原料：
水1000份，mpo0.01~10份，卤化物7~11份，h2o228~52份，铁盐14.5~23.5份，有机酸；添加有机酸后消毒液的ph为5~6。
2.根据权利要求1所述的消毒液，其特征在于，包括以下重量份的原料：水1000份，mpo0.01~10份，卤化物7~11份，h2o228~52份，铁盐18~20.5份，有机酸。
3.根据权利要求1所述的消毒液，其特征在于，所述铁盐为氯化铁和硝酸铁中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的消毒液，其特征在于，所述铁盐为氯化铁和硝酸铁的混合物。
5.根据权利要求4所述的消毒液，其特征在于，所述氯化铁和硝酸铁的质量比为1:(4~6)。
6.根据权利要求1所述的消毒液，其特征在于，所述有机酸选自柠檬酸、醋酸、酒石酸、苹果酸和乳酸中的一种。
7.一种权利要求1-6任一所述消毒液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将mpo、卤化物和h2o2分别添加至水中，随后加入铁盐和有机酸后搅拌均匀。
8.一种权利要求1-6任一所述消毒液的应用，其特征在于，所述消毒液可以用于皮肤、黏膜消毒，以及制备促进皮肤、黏膜伤口愈合的制剂。
技术总结本申请涉及生物医药的技术领域，具体公开了一种消毒液及其制备方法和应用。消毒液包括以下重量份的原料：水1000份，MPO 0.01~10份，卤化物7~11份，H2O2 28~52份，铁盐14.5~23.5份，有机酸，添加有机酸后消毒液的pH为5~6；其制备方法为：将MPO、卤化物和H2O2分别添加至水中，随后加入铁盐和有机酸后搅拌均匀。本申请的消毒液可以用于皮肤、黏膜消毒，以及制备促进皮肤、黏膜伤口愈合的制剂，其具有组织损伤小、杀菌效果优异且不会产生耐药的特点。
技术研发人员：张晋玮;唐齐玉
受保护的技术使用者：张晋玮
技术研发日：2021.05.10
技术公布日：2021.08.03
