本申请涉及医药技术领域，具体而言，涉及一种核桃壳提取物在制备止泻药物中的应用。
背景技术：
腹泻是胃肠道最常见的疾病之一。腹泻会使肠胃分泌、消化、吸收和运动等功能紊乱，出现食物不能完全分解、吸收量减少和肠胃蠕动加速等症状，大便次数增多、含水量增多、粪便变稀薄。如果不及时治疗可能会影响营养物质的吸收，能量供给不足，丢失大量电解质和脱水、休克、营养不良等。临床上用以治疗腹泻的常用止泻药物有肠道益生菌、肠道黏膜保护剂、抗生素、中药制剂、补液盐等。大部分止泻药是缓解患者的腹泻症状，如果用量过多，反而会导致患者出现腹胀便秘等问题，严重的情况下还会引发肠梗阻等。天然产物具有安全、毒性低、多靶点作用等特点成为开发新药物的热门研究领域。核桃（juglansregial.）为胡桃科胡桃属植物，又名“胡桃”、“羌桃”。核桃具有丰富的营养，被称之为世界“四大干果”之一。我国的核桃种植资源丰富，是世界核桃第一生产大国和第四大出口国。每年我国核桃产量都能达到几百万吨，从此产生大量的副产物—核桃壳。极少量的核桃壳用于提取核桃棕色素和制作活性炭以外大部分被用作燃料焚烧掉，不仅污染环境，又造成了资源的极大浪费。核桃壳含有大量的纤维素、木质素等意外还含有氨基酸、多糖、皂甙、黄酮和香豆素等活性成分。核桃壳具有降脂、抗肿瘤、抗氧化、抗菌等作用。核桃壳在民间用于治疗口腔溃疡、胃溃疡等。发明人在研究新疆薄皮核桃壳的药理作用中发现，新疆薄皮核桃壳水提物对腹泻模型小鼠具有止泻作用。有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种核桃壳提取物在制备止泻药物中的应用，提供一种新的止泻物质，能够治疗腹泻的同时还能够增强机体的免疫机能，提高机体整体的抗病能力。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：适量新疆薄皮核桃壳粉末，加适量蒸馏水，加热回流2h，离心取上清液。残渣再加蒸馏水，重复提取两次。合并上清液，旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，得到核桃壳水提物。核桃壳水提物灌胃昆明种雄性小鼠，灌胃给药30min后各组小鼠灌胃蓖麻油诱导腹泻。记录开始排稀便时间，记录总便数、稀便数，称重稀便和干便重量。实验结果显示核桃壳水提物极显著延长腹泻潜伏时间（p<0.001），极显著降低排稀便次数（p<0.001），极显著降低排便数（p<0.001），显著增加干便量（p<0.05）。为了研究核桃壳水提物对胃肠动力的影响灌胃给药小鼠，给药30min后，每个小鼠灌胃0.5ml5%的混悬于0.5%cmc-na的碳末，30min后，处死小鼠，取出小肠，测量小肠总长和碳末推进距离。实验结果显示核桃壳水提物与空白组比较有极显著降低碳末推进距离（p<0.001）。核桃壳水提物小肠蠕动指数与空白组比较，有极显著降低（p<0.001）。
与现有技术相比，本发明的显著效果和特点为：
（1）不仅降低稀便量，还能降低小肠蠕动，同时升高干便量，不会引起便秘。
（2）与临床应用的止泻药比较，本发明中的核桃壳属于天然产物核桃的废弃物，在药效等同的情况下来源易得、价格低廉，不良反应较少。
（3）核桃壳虽然是废弃物，据文献报道，核桃壳含有氨基酸、多糖、皂甙类、黄酮类和香豆素等活性成分，核桃壳具有增强机体免疫、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒等多种生物活性。而本发明则提出了核桃壳在治疗腹泻中的应用。
附图说明
图1为各给药组腹泻潜伏时间的对比图；
图2为各给药组与模型组腹泻潜伏时间比较得到的腹泻延迟率；
图3为各给药组的稀便数的对比图；
图4为各给药组与模型组排稀便次数比较得到的腹泻抑制率。
与模型组比较**为有极显著差异（p＜0.01）；*为有显著差异（p＜0.05）。
具体实施方式
下面通过具体实例对本发明的技术方案进行详细说明。但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明所作的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。
实验材料
材料和试剂
新疆薄皮核桃壳，购买于新疆阿克苏市。
盐酸洛哌丁胺胶囊（国药准字h10910085，西安杨森制药有限公司，产品批号：jfj0348）。蓖麻油（国药准字z42020991，湖北科田药业有限公子，产品批号，200507）。蒸馏水、滤纸、活性碳等。
实验仪器
bj-200型高速多功能粉碎机（德清拜杰电器有限公司）。
dt-500电子天平（江苏常熟双杰测试仪器厂）。
dgsy-ⅲ电热恒温水浴锅（北京市意成科技开发公司）。
re-3000a旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
tdl-5离心机（上海安亭科学仪器厂）。
cryodos冷冻干燥仪（西班牙telstar）等。
实验动物
清洁级昆明种小鼠（scxk（蒙）2016-0001），雄性，体重25±5g。小鼠饲养于温度23±2℃，湿度40%-50%，人工光照明暗各12h的动物室内。
实验方法
（1）核桃壳水提物的制备
核桃壳清理干净，粉碎，过80目筛子。称取50g粉末，加500ml蒸馏水，加热回流2h，过滤，滤渣加300ml水，加热回流1.5h，过滤，滤渣第三次加200ml水，加热回流1.5h，过滤。滤渣弃掉。合并滤液，旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥，得到3.2615g提取物，提取率为6.52%。
（2）核桃壳水提物的止泻实验
取清洁级昆明种雄性小鼠40只，体重25±5g。随机分成模型组、阳性组，核桃壳水提物低剂量、中剂量和高剂量组等五组，每组8只小鼠。实验前禁食18h，自由饮水。核桃壳低、中和高剂量组灌胃核桃壳水提物，灌胃量分别为100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg。阳性组灌胃盐酸洛派丁胺，给药量为10mg/kg，模型组灌胃同等量的蒸馏水即0.5ml。灌胃给药30min后各组小鼠灌胃0.5ml的蓖麻油，小鼠单笼饲养，笼下铺置滤纸。记录开始排稀便时间。每1h换一次滤纸，记录总便数、稀便数，称重稀便和干便重量，连续观察4h。
（3）小肠推进实验
取清洁级昆明种雄性小鼠40只，体质量25±5g。随机分成空白组、阳性组，核桃壳水提物低、中和高剂量组等五组，每组8只小鼠。实验前禁食18h，自由饮水。各组灌胃药物和量与止泻实验相同。给药30min后，每个小鼠灌胃0.5ml5%的混悬于0.5%cmc-na的碳末。30min后，处死小鼠，取出小肠，测量小肠总长和碳末推进距离。
（4）急性毒性实验：
雄性昆明种小鼠20只，随机分为实验组和空白组，每组10只。实验前禁食16h，自由饮水。实验组一次灌胃2000mg/kg的核桃壳水提物，空白组灌胃同等量的蒸馏水。观察小鼠的摄食和饮水变化，记录死亡和特殊的病症情况，连续观察一周。
（5）数学统计方法
对所得数据进行统计学处理，以均数±标准差表示，组间显著性检验采用t检验判定。p值的求算方法为：给药组与腹泻模型组比较得到。（p<0.01为极显著差异，p<0.05为显著差异）
3实验结果与分析
（1）急性毒性实验结果分析
核桃壳水提物的急性毒性实验，采取一次灌胃大剂量的核桃壳水提物的方法。灌胃量为2000mg/kg的核桃壳水提物，连续观察一周。刚灌胃时小鼠有些烦躁，跳动。给药组与空白组比较摄食和饮水量未发生明显变化，没出现死亡和特殊的病症的异常情况，未能测出ld50，ld50>2000mg/kg。给药组灌胃之前的体重27.53±4.05，一周观察后的体重33.51±3.57，与同时期的空白组比较没有明显差异，表明核桃壳水提物的一般急性毒性反应较小，对小鼠基本没有毒性反应。
（2）核桃壳提取物对腹泻的影响
小鼠灌胃给药后30min，灌胃0.2ml的蓖麻油，开始记录开始排稀便的腹泻时间，每组统计得到腹泻潜伏时间，结果见表1。模型组的腹泻潜伏时间为66.7±4.7n，高剂量组的腹泻潜伏时间为96.5±15.6min，与模型组比较（p=0.000877<0.001），具有极显著延长腹泻潜伏期，腹泻延迟率44.7%。中剂量组的腹泻潜伏时间为88.0±19.4min，与模型组比较（p=0.023<0.05），具有显著延长作用，腹泻延迟率32.0%。低剂量组的腹泻潜伏时间为79.5±17.7min，与模型组比较（p=0.083，0.05<p<1）作用趋势，但无显著性差异。阳性组的腹泻潜伏时间为110.8±13.1min，与模型组比较（p=1.34×10-5<0.001），具有极显著延长，腹泻延迟率66.2%。高剂量组腹泻潜伏时间与阳性组的比较（p=0.11），没有差异。中剂量组与阳性组比较（p=0.04），有显著差异，低剂量组与阳性组比较（p=0.0038）有极显著差异。腹泻延迟率的计算公式如下。
表1核桃壳水提物对蓖麻油致泻小鼠腹泻潜伏时间的影响
注：与模型组比较**p<0.01表示极显著性差异，*p<0.05显著性差异。
小鼠灌胃给药30min后，灌胃0.2ml的蓖麻油。每1h记录总便数、稀便数，称稀便和干便重量，连续观察4h。计算得到共4h的总便数、稀便数，稀便重量和干便重量。按以下公式计算排便抑制率和腹泻抑制率，结果见表2。
各组的排稀便总数分别为模型组12.0±3.2次，阳性组3.5±1.1次，低剂量组11.3±1.5次，中剂量组5.2±1.7次，高剂量组4.5±1.1次。给药组分别与模型组比较，阳性组（p=0.0001）、中剂量组（p=0.001）和高剂量组的（p=0.0003）都极显著降低排稀便次数。低剂量组（p=0.91）与模型组比较没有明显变化。中剂量组（p=0.07）和高剂量组（p=0.13）与阳性组比较没有明显差异。低剂量组（p=5.16×10-7）与模型组比较有显著差异。阳性组的腹泻抑制率为70.8%，低剂量组、中剂量组和高剂量组的腹泻抑制率分别为1.4%、56.9%和62.5%。
各组排便总数分别为腹泻模型组17.2±2.3次，低剂量组16.0±2.1次，中剂量组10.8±2.7次，高剂量组的排便总数为9.7±1.2次和阳性组6.8±1.3次。各给药组与模型组比较，阳性组（p=2.59×10-6），中剂量组（p=0.0014），高剂量组排便数（p=3.59×10-5）极显著降低。低剂量组（p=0.38）的排便数与模型组比较没有明显降低。阳性组的排便抑制率为60.2%，中剂量组和高剂量组的排便抑制率分别为36.9%和43.7%稍低于阳性组。
表2核桃壳水提物对蓖麻油致腹泻小鼠的排便的影响
注：与模型组比较**p<0.01表示极显著性差异，*p<0.05显著性差异。
各组的稀便重量分别为模型组0.9±0.1g，阳性组0.3±0.3g，低剂量组0.7±0.2g，中剂量组0.5±0.2g，高剂量0.4±0.2g。与模型组比较，阳性组（p=0.0008）、中剂量组（p=0.002）和高剂量（p=0.00025）极显著降低。低剂量组（p=0.02）与模型组比较显著降低。中剂量组（p=0.22）和高剂量（p=0.55）与阳性组比较没有显著差异。低剂量组（p=0.03）与阳性组比较有显著差异。
各组的干便重量分别为模型组0.2±0.1g，阳性组0.3±0.1g，低剂量组0.2±0.1g，中剂量组0.3±0.1g，高剂量0.5±0.1g。高剂量（p=0.002）与模型组比较极显著增加。阳性组（p=0.02）和中剂量组（p=0.04）与模型组比较显著增加，低剂量组（p=0.64）与模型组没有差异。低剂量组（p=0.08）、中剂量组的（p=0.86）和高剂量（p=0.06）与阳性组比较没有差异。
（3）核桃壳提取物对小肠蠕动的影响
小肠长度是从幽门至回盲肠部。从幽门至碳末前端的距离为碳末推进距离。
计算各组小鼠的小肠平均总长度、碳末堆进平均距离。按以下公式计算小肠蠕动指数和小肠推进抑制率。
结果列于表3。给药组和空白组比较小肠长度没有显著差异。空白组的碳末推进距离为45.82±3.40cm，阳性组的碳末推进距离为20.48±1.86cm。阳性组与空白组比较，有极显著降低（p=1.840×10-8）；中、高剂量组的碳末推进距离分别为33.61±1.73cm，23.71±0.95cm，与空白组比较有极显著降低（p=1.40×10-5，p=2.80×10-8）。低剂量组的碳末推进距离为44.92±2.99cm，与空白组比较（p=0.64）没有差异。空白组的小肠蠕动指数为84.49±1.26%，阳性组的小肠蠕动指数为38.34±3.14%，阳性组与空白组比较，有极显著降低（p=1.36×10-11）。低、中和高剂量组的蠕动指数分别为81.72±3.22%，61.85±4.21%，44.49±1.28，分别与空白组比较，有极显著降低（p=4.17×10-10，p=6.82×10-7，p=0.0013）。阳性组的小肠堆进抑制率为55.30%；低、中和高剂量组的小肠堆进抑制率分别为1.96%、26.65%和48.25%。
表3核桃壳对小肠蠕动的影响
注：与模型组比较**p<0.01表示极显著性差异，*p<0.05显著性差异。
（4）体内抗腹泻指数的计算
体内抗腹泻指数（adi）使用aye-than等人提出的公式计算。
在体内，是排泄频率、开始腹泻和肠道运动频率等对腹泻综合影响的一种测量。各给药组adi结果如表4所示，体内腹泻指数分别为阳性组63.78%，低、中、高剂量组的3.76%、36.47%、51.29%。核桃壳水提物的adi呈剂量依赖性，剂量越大adi越大。
表4核桃壳水提物的体内腹泻指数
4结论
核桃壳水提物灌胃给药实验小鼠，灌胃蓖麻油使小鼠腹泻，记录腹泻开始的时间、记录总便数和稀便数等数据，进行分析后得到核桃壳水提物的止泻指标。核桃壳水提物延长腹泻潜伏时间，推迟腹泻的发生。减少排便和排稀便次数，降低小肠推进和蠕动，但不降低干便量。核桃壳水提物具有止泻的同时不会引起便秘。
以上所述实施例仅为本发明的优选实施例而已，而不是全部的实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.一种核桃壳提取物在制备止泻药物中的应用，其特征在于，核桃壳提取物是新疆薄皮核桃壳的水提物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核桃壳水提物的制备具体操作如下：
将核桃壳洗净、晾干后粉碎过60~100目筛，粉末用水以液料比10~6:1在80~100℃温度条件下，按0.5~2h/次回流提取2~3次，合并滤液浓缩后干燥得到核桃壳水提物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述核桃壳水提物的止泻作用是延长腹泻潜伏时间。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述核桃壳水提物的止泻作用是降低排稀便次数。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述核桃壳水提物的止泻作用是降低碳末推进距离，降低小鼠小肠蠕动指数。
技术总结