本发明涉及医药
技术领域：
，尤其涉及八角莲萃取物在制备具有抗癌活性药物的用途。
背景技术：
：肿瘤的扩散与增生是造成人体器官组织被侵犯的重要因素之一，抑制肿瘤的转移与血管生成，继而减少癌症死亡的发生，俨然已成为抗癌研究的重要指标。八角莲(学名：dysosmaversipellis(hance)m.chengexying)是小檗科，鬼臼属多年生草本植物，是民间常用的中草药，入药能散风祛痰，消毒解肿，杀虫，有其特殊的解毒功效，可治蛇咬伤。其根茎含鬼臼毒素(podophyllotoxin)，山荷叶素(diphyllin)，山柰酚(kaempferol)及槲皮素(quercetin)等化学成分。目前对于八角莲的研究主要基于中药特性出发，作为中药复方使用，主治化痰散结，清热解毒，祛瘀消肿。主治痰饮咳嗽，咽喉肿痛，痄腮，瘰疬瘿瘤，痈肿疔疮，毒蛇咬伤，跌打损伤，风毒麻痹，乳癌。尚未见有关于八角莲提取物及其应用研究的报道。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是对八角莲提取物进行抗癌活性研究，进一步发掘八角莲的医药价值。为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：本发明提供八角莲萃取物在制备具有抗癌活性药物的用途。本发明提供八角莲萃取物在制备预防或治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的用途。本发明八角莲萃取物在制备预防或治疗乳腺癌药物中的用途。进一步地，所述八角莲萃取物是从八角莲中提取分离得到的以下至少一个部位：甲醇提取部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位及水溶性部位。优选地，所述八角莲萃取物是从八角莲中提取分离得到的以下至少一个部位：甲醇提取部位、二氯甲烷部位及正丁醇部位。本发明提供八角莲萃取物在制备具有抗癌活性药物的用途，所述具有抗癌活性药物中含有所述八角莲萃取物以及药学上可以接受的载体或稀释剂。本发明的八角莲萃取物的提取分离方法，包括如下步骤：将八角莲药材用6～10倍质量的甲醇进行两次浸泡提取，收集两次萃取液混合，离心分离得到甲醇提取部位；将甲醇提取部位用二氯甲烷和水进行分级萃取，得到二氯甲烷部位，将剩余水相提取液用正丁醇萃取，分别得到正丁醇部位和水溶性部位；将甲醇提取部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位及水溶性部位分别浓缩结晶并干燥。本发明用mcf7(人乳腺癌细胞)、hl60(人急性早幼粒白血病细胞)、ccd966sk(人类皮肤纤维母细胞)分别对二氯甲烷部位、甲醇提取部位、正丁醇部位及水溶性部位进行细胞毒活性试验筛选，结果表明二氯甲烷部位、甲醇提取物、正丁醇部位对hl60细胞具有非常显著的抑制作用，其ic50的平均值都小于1ug/ml，细胞毒杀活性均超过国际标准(ic50≤4μg/ml)。ic50为50％抑制浓度即b/b0＝50％时所对应的浓度，半数抑制是用来衡量抗体灵敏度的半数抑制越低，说明抗体的灵敏度越高。本发明的八角莲抗癌活性部位为甲醇提取物、水溶性部位、二氯甲烷部位以及正丁醇部位中的至少一种，可以用于制备抗肿瘤药物，尤其是制备预防或治疗急性早幼粒细胞白血病药物，具有剂量低，毒副作用小的特点。本发明采用的分离提纯方法简易可行，得到甲醇提取部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位的萃取物的活性较强，超过了国际标准，具有开发为抗癌(尤其是白血病)新药的前景。附图说明图1为八角莲甲醇提取部位对细胞株ccd966sk、hl60的48小时的细胞毒性实验结果。图2为八角莲甲醇提取部位对细胞株mcf7的48小时的细胞毒性实验结果以及八角莲正丁醇部位对细胞株ccd966sk的48小时的细胞毒性实验结果。图3为八角莲二氯甲烷部位对细胞株ccd966sk的48小时的细胞毒性实验结果以及八角莲正丁醇部位对细胞株hl60的48小时的细胞毒性实验结果。图4为八角莲二氯甲烷部位对细胞株hl60的48小时的细胞毒性实验结果以及八角莲正丁醇部位对细胞株mcf7的48小时的细胞毒性实验结果。图5为八角莲二氯甲烷部位对细胞株mcf7的48小时的细胞毒性实验结果以及八角莲水溶性部位对细胞株ccd966sk的48小时的细胞毒性实验结果。图6为八角莲水溶性部位对细胞株hl60的48小时的细胞毒性实验结果以及八角莲水溶性部位对细胞株mcf7的48小时的细胞毒性实验结果。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下将描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。应当理解，当在本说明书和所附权利要求书中使用时，术语“包括”和“包含”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添加。还应当理解，在此本发明实施例说明书中所使用的术语仅仅是出于描述特定实施例的目的而并不意在限制本发明实施例。如在本发明实施例说明书和所附权利要求书中所使用的那样，除非上下文清楚地指明其它情况，否则单数形式的“一”、“一个”及“该”意在包括复数形式。八角莲萃取物的提取分离方法：将八角莲药材801.43g用甲醇(6.4l)进行两次浸泡提取(1st3days；2nd4days)，收集两次萃取液混合，离心分离得到甲醇提取物(crudeextract)；将甲醇提取物用二氯甲烷、水分级萃取，得到二氯甲烷部位(ch2cl2layer)，将剩余水相提取液用正丁醇萃取，分别得到正丁醇部位(buohlayer)和水溶性部位(h2olayer)。将八角莲各提取物进行冷冻干燥后称重，结果见表1：表1八角莲提取物的收率提取物重量(g)收率％crudeextract132.78116.57buohlayer15.352220.97ch2cl2layer30.478552.56h2olayer19.384826.48(1)对上述抗癌活性部位提取物进行细胞毒杀试验(mtt法)：配制八角莲提取物溶液：将八角莲提取物用dmso稀释，分别配制成100、1000、2500、5000及10000μg/ml的溶液，再分别用培养液稀释50倍。a.不同细胞株包括hl60、mcf7、ccd966sk，预先于96孔培养皿中培养，调整细胞浓度分别为6×10^4/孔、1×10^4/孔、1.5×10^4/孔，待细胞完全贴附后，更换新的培养液。b.添加等体积的八角莲提取物溶液，使八角莲提取物的最终浓度分别为1、10、25、50及100g/ml。c.培养48小时后，再添加500μg/mlmtt反应4小时。d.移除mtt，以dmso溶裂细胞，使反应后的mtt结晶产物均匀溶解。e.以od570nm读取各培养皿的吸光值进行统计分析，结果见表2以及图1-6。表2八角莲提取物的细胞毒性实验结果表2、图1-6的结果可知，甲醇提取部位(crudeextract)、二氯甲烷部位(ch2cl2layer)以及正丁醇部位(buohlayer)对于癌细胞株hl60的生长活性具有非常显著的抑制作用，其ic50均小于1ug/ml。在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详细描述的部分，可以参见其他实施例的相关描述。以上所述，为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。当前第1页1 2 3
技术特征：1.八角莲萃取物在制备具有抗癌活性药物的用途。
2.八角莲萃取物在制备预防或治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的用途。
3.八角莲萃取物在制备预防或治疗乳腺癌药物中的用途。
4.如权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于，所述八角莲萃取物是从八角莲中提取分离得到的以下至少一个部位：甲醇提取部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位及水溶性部位。
5.如权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于，所述八角莲萃取物是从八角莲中提取分离得到的以下至少一个部位：甲醇提取部位、二氯甲烷部位及正丁醇部位。
6.如权利要求1～3任一项所述的用途，所述药物中含有八角莲萃取物以及药学上可以接受的载体或稀释剂。
7.八角莲萃取物的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
将八角莲药材用6～10倍质量的甲醇进行两次浸泡提取，收集两次萃取液混合，离心分离得到甲醇提取部位；将甲醇提取部位用二氯甲烷和水进行分级萃取，得到二氯甲烷部位，将剩余水相提取液用正丁醇萃取，分别得到正丁醇部位和水溶性部位；
将甲醇提取部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位及水溶性部位分别浓缩结晶并干燥。
技术总结本发明公开了八角莲萃取物在制备具有抗癌活性药物的用途，涉及医药技术领域。具体地，本发明还公开了八角莲萃取物在制备预防或治疗急性早幼粒细胞白血病药物以及在制备预防或治疗乳腺癌药物中的用途。本发明的八角莲萃取物的抗癌活性部位为甲醇提取物、水溶性部位、二氯甲烷部位以及正丁醇部位中的至少一种，可以用于制备抗肿瘤药物，尤其是制备预防或治疗急性早幼粒细胞白血病药物，具有剂量低，毒副作用小的特点。
技术研发人员：吴宇建;席美华;蔡庆瑞;方奕闵;吴靖苡;吴鑫阳;吴宣德
受保护的技术使用者：三益创价生物科技(深圳)有限公司
技术研发日：2021.05.12
技术公布日：2021.08.03
