本发明属于
技术领域：
，具体涉及一种双歧杆菌mn-gup及其菌剂在治疗2型糖尿病中的应用。
背景技术：
：2型糖尿病(t2dm)是世界上常见的代谢紊乱，其特征是由于胰岛素抵抗和相对胰岛素缺乏引起的高血糖症。t2dm的新陈代谢异常可能导致多种严重并发症，例如心血管疾病，糖尿病性视网膜病，神经病和肾病。糖尿病给全球健康带来沉重负担，并成为全世界死亡的主要原因之一。肠道菌群在t2dm的发病机理和代谢紊乱中起重要作用。肠道菌群是一个复杂的整体生态系统，被称为“微生物组”的整个肠道菌群的基因组超过人类核基因组至少100倍。过多摄入高脂肪和果糖食物会扰乱正常肠道菌群，从而诱发全身性，低度的慢性炎症，并引起诸如肥胖症和t2dm的代谢性疾病。患有t2dm的成年人与非糖尿病成年人之间的肠道菌群有很大的不同。双歧杆菌的含量降低，而肠球菌和大肠杆菌显著增加。肠道菌群可能影响宿主的炎症途径和能量代谢，包括葡萄糖，脂质代谢和胰岛素作用等。肠道微生物结构的改变，可能通过参与体内scfas、lps、胆汁酸的合成，诱发机体产生多种机制,继而引发胰岛β细胞的破坏和凋亡、降低机体对胰岛素的敏感性,最终导致t2dm。目前，除生活方式干预外，常见的2型糖尿病干预措施主要是降糖药物干预，如降糖药物二甲双胍、α-糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮类药物(tzds)以及glp-1受体激动剂等药物治疗可以降低糖尿病前期人群发生糖尿病的风险，但这类药物大多都会产生不利的副作用，且容易引起抗药性，降低干预效果。维持肠道菌群平衡是干预2型糖尿病的有效方法之一，而益生菌的使用是调节肠道菌群平衡的关键。益生菌被定义为活微生物，当适量施用时，它们会给宿主带来特定的健康益处。益生菌可以改变肠道菌群，改善总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平并降低血糖水平和胰岛素抵抗。目前还未有相关报道关于一种特异性调节2型糖尿病相关性肠道菌群及恢复健康的肠道菌群以改善、缓解或治疗2型糖尿病的益生菌。技术实现要素：为此，本发明提供了一种双歧杆菌mn-gup及其菌剂在治疗2型糖尿病中的应用。本发明提供一种乳双歧杆菌mn-gup或者主要成分为乳双歧杆菌mn-gup的菌剂在如下a)-k)任一一种中的应用；a)制备治疗糖尿病产品；b)调节肠道菌群多样性和/或肠道菌群平衡；c)降低血糖；d)降低胰岛素抵抗指数；e)缓解胰岛损伤；f)降低血清炎症因子；g)降低糖异生基因的表达量；h)降低脂肪生成基因的表达量；i)调节血清中的leptin、glp-1含量；j)修复肠粘膜；k)缓解体重下降。进一步地，乳双歧杆菌mn-gup或者主要成分为乳双歧杆菌mn-gup的菌剂在如下a)-k)任一一种中的应用；a)制备治疗人或动物糖尿病产品；b)调节人或动物肠道菌群多样性和/或肠道菌群平衡；c)降低人或动物血糖；d)降低人或动物胰岛素抵抗指数；e)缓解人或动物胰岛损伤；f)降低人或动物血清炎症因子；g)降低人或动物糖异生基因表达的表达量；h)降低人或动物脂肪生成基因的表达量；i)调节人或动物血清中的leptin、glp-1含量；j)修复人或动物肠粘膜；k)缓解人或动物体重下降。进一步地，肠道菌群多样性为2型糖尿病特征肠道菌群多样性。进一步的，所述调节肠道菌群多样性是指调节菌群门水平多样性。进一步的，所述调节菌群门水平多样性具体为如下任意一种或几种：(a)厚壁菌门(firmicutes)相对丰度降低；(b)变形菌门(proteobacteria)相对丰度降低；(c)拟杆菌门(bacteroidetes)相对丰度升高；(d)放线菌门(actinobacteria)相对丰度升高；(e)厚壁菌门相对丰度与拟杆菌门相对丰度比值降低。所述调节肠道菌群平衡具体为调节有益菌菌属和有害菌属平衡；所述有害菌属为escherichia-shigella、aerococcus、staphylococcus、kurthia、proteus、dubosiella、enterococcus、clostridium_sensu_stricto_1、desulfovibrio、klebsiella或candidatus_saccharimonas中的任一一种或几种；所述有益菌属为bifidobacterium、faecalibaculum、psychrobacter、g__norank_f__muribaculaceae、lactobacillus、jeotgalicoccus、turicibacter、unclassified_o__lactobacillales、akkermansiaenterorhabdus、alistipes、weissella或bacteroides中的任一一种或几种。进一步的，所述乳双歧杆菌mn-gup的保藏编号为cgmccno.15578。进一步的，所述动物为哺乳动物；所述动物为患糖尿病动物；所述人为糖尿病患者；优选的，所述糖尿病为2型糖尿病。进一步的，所述血糖为空腹血糖或者餐后血糖；血清炎症因子为tnf-α、il-6和/或il-1β；所述糖异生基因为在糖尿病中表达上升的基因，具体为g6p或pepck；所述脂肪生成基因为fas。所述菌剂的形态包括水溶剂、颗粒、粉末、微粒剂、胶囊剂或滴剂中的任一一种。进一步的，人或动物每千克体重每天的双歧杆菌mn-gup活菌用量为2×108cfu以上，优选为1×109cfu以上；更优选的为2×109cfu以上。本发明技术方案的优点：(1)本发明的乳双歧杆菌mn-gup或者主要成分为乳双歧杆菌mn-gup的菌剂通过综合机制来改善2型糖尿病，如：缓解胰岛损伤；修复肠粘膜；改善2型糖尿病相关炎症反应；提高肠胰岛素glp-1的表达；恢复肠道菌群健康化。(2)本发明利用乳双歧杆菌mn-gup或者主要成分为乳双歧杆菌mn-gup的菌剂，不仅可改善2型糖尿病，而且靶向改善调节2型糖尿病特征性肠道菌群，调节肠道菌群平衡，恢复肠道菌群的健康化。同时，本产品具有食用方便、治疗简单、缓解率高、无毒副作用等特点。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1(a)为本发明实施例2中小鼠结肠上皮粘膜的病理切片通过he染色后进行观察结果；图1(b)为实施例2中小鼠胰腺组织的病理切片通过he染色后进行观察结果；mn-gup低代表mn-gup低剂量组。mn-gup高代表mn-gup高剂量组。具体实施方式以下通过具体实施例来说明本发明的实施方式，除非另外说明，本发明中所公开的实验方法均采用本
技术领域：
常规技术，实施例中所用到的试剂和原料均可由市场购得。本发明使用的u87mg细胞购自上海歌凡生物科技有限公司。表1菌属bacteroides[10]escherichia-shigella[11]bifidobacterium[1]aerococcus[10]faecalibaculum[2]staphylococcus[9]lactobacillus[3]proteus[12]g__norank_f__muribaculaceae[4]kurthia[11]turicibacter[5]dubosiella[13]jeotgalicoccus[6]enterococcus[9]lactococcus[7]clostridium_sensu_stricto_1[14]akkermansia[5]desulfovibrio[15]psychrobacter[8]candidatus_saccharimonas[16]enterorhabdus[9]unclassified_o__lactobacillales[17]weissella[7]klebsiella[18]上述菌属公开文献1.wang,y.n.,etal.,effectsofprobioticsandprebioticsonintestinalmicrobiotainmicewithacutecolitisbasedon16srrnagenesequencing.chinesemedicaljournal,2019.132(15):p.1833-1842.2.zhu,n.h.,etal.,modulationofgrowthperformanceandintestinalmicrobiotainchickensfedplantextractsorvirginiamycin.frontiersinmicrobiology,2019.10:p.16.3.pan,f.w.,etal.,predominantgutlactobacillusmurinusstrainmediatesanti-inflammagingeffectsincalorie-restrictedmice.microbiome,2018.6:p.17.4.smith,b.j.,etal.,changesinthegutmicrobiomeandfermentationproductsconcurrentwithenhancedlongevityinacarbose-treatedmice.bmcmicrobiology,2019.19.5.caslin,b.,etal.,alcoholshiftsgutmicrobialnetworksandamelioratesamurinemodelofneuroinflammationinasex-specificpattern.proceedingsofthenationalacademyofsciencesoftheunitedstatesofamerica,2019.6.lv,x.-c.,etal.,polysaccharidepeptidesfromganodermalucidumamelioratelipidmetabolicdisordersandgutmicrobiotadysbiosisinhigh-fatdiet-fedrats.journaloffunctionalfoods,2019.57:p.48-58.7.wang,w.,etal.,composition,diversityandfunctionofgastrointestinalmicrobiotainwildred-billedchoughs(pyrrhocoraxpyrrhocorax).internationalmicrobiology:theofficialjournalofthespanishsocietyformicrobiology,2019.22(4):p.491-500.8.huh,y.-j.,etal.,bariatric/metabolicsurgeryinducesnoticeablechangesofmicrobiotaandtheirsecretingextracellularvesiclecompositioninthegut.obesitysurgery,2019.29(8):p.2470-2484.9.guo,w.-l.,etal.,hypoglycemicandhypolipidemicmechanismoforganicchromiumderivedfromchelationofgrifolafrondosapolysaccharide-chromium(iii)anditsmodulationofintestinalmicroflorainhighfat-dietandstz-induceddiabeticmice.internationaljournalofbiologicalmacromolecules,2019.10.wang,j.,etal.,perillaoilregulatesintestinalmicrobiotaandalleviatesinsulinresistancethroughthepi3k/aktsignalingpathwayintype-2diabetickkaymice.foodandchemicaltoxicology:aninternationaljournalpublishedforthebritishindustrialbiologicalresearchassociation,2019:p.110965-110965.11.zheng,j.,etal.,buzangtongluodecoctionimprovedhindlimbischemiabyactivatingangiogenesisandregulatinggutmicrobiotaindiabeticmice.journalofethnopharmacology,2020.248:p.112330-112330.12.chen,m.,etal.,intakeofganodermalucidumpolysaccharidesreversesthedisturbedgutmicrobiotaandmetabolismintype2diabeticrats.internationaljournalofbiologicalmacromolecules,2019.13.cox,l.m.,etal.,descriptionoftwonovelmembersofthefamilyerysipelotrichaceae:ileibacteriumvalensgen.nov.,sp.nov.anddubosiellanewyorkensis,gen.nov.,sp.nov.,fromthemurineintestine,andemendationtothedescriptionoffaecalibacteriumrodentium(vol67,pg1247,2017).internationaljournalofsystematicandevolutionarymicrobiology,2017.67(10):p.4289-4289.14.yang,w.-y.,etal.,analysisofgutmicrobiotaandtheeffectoflauricacidagainstnecroticenteritisinclostridiumperfringensandeimeriaside-by-sidechallengemodel.plosone,2019.14(5).15.cui,h.-x.,etal.,apurifiedanthraquinone-glycosidepreparationfromrhubarbamelioratestype2diabetesmellitusbymodulatingthegutmicrobiotaandreducinginflammation.frontiersinmicrobiology,2019.10.16.huang,c.,etal.,dysbiosisofintestinalmicrobiotaanddecreasedantimicrobialpeptidelevelinpanethcellsduringhypertriglyceridemia-relatedacutenecrotizingpancreatitisinrats.frontiersinmicrobiology,2017.8.17.yamaguchiy,adachik,sugiyamat,etal.associationofintestinalmicrobiotawithmetabolicmarkersanddietaryhabitsinpatientswithtype2diabetes[j].digestion,2016:66.18.wen-hunghsuandfang-jungyuandchien-hanchuangandchin-fanchenandchien-tingleeandchien-yulu.occultcoloncancerinapatientwithdiabetesandrecurrentklebsiellapneumoniaeliverabscess[j].thekaohsiungjournalofmedicalsciences,2009.实施例1乳双歧杆菌mn-gup菌粉的制备(1)首先取名称为乳双歧杆菌mn-gup的菌株，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.15578。该菌株的获得方法为：1)从健康广西巴马长寿老人分离出乳双歧杆菌bb-11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.14056；(2)将乳双歧杆菌bb-11搭载于“神舟十一号”返回式飞船，于2016年10月17日发射，2016年11月18日返回地面，而后进行诱变菌株筛选与鉴定，得到一耐氧能力显著高于乳双歧杆菌bb-11的突变株，即动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)mn-gup，并进行了保藏，于2018年04月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.15578，下文将该菌株简称为乳双歧杆菌mn-gup。(3)将发酵菌种mn-gup用mrs活化培养，37℃静置培养16-20h，培养至对数期，活菌数达到109cfu/ml。(4)乳双歧杆菌mn-gup菌液经6000rpm离心2.5h，收集湿菌体，加入菌体保护剂溶液，菌体保护剂溶液的制备方法为：将脱脂乳8g、海藻糖5g、甘油5g、维生素c0.05g溶于蒸馏水81.95g。菌体保护剂溶液加入质量为湿菌体质量的5倍，得到浓缩菌液，将浓缩菌液在-50℃下冷冻真空干燥24h，制得乳双歧杆菌mn-gup菌粉，活菌数大于3*1011cfu/g。实施例2乳双歧杆菌mn-gup缓解2型糖尿病及特征肠道菌群试验取实施例1制备的乳双歧杆菌mn-gup菌粉，活菌数为3*1011cfu/g，用于本实验。一、乳双歧杆菌mn-gup菌对t2dm小鼠模型的改善作用选择的6周龄60只雄性spf级c57bl/6j雄性小鼠，将所有鼠圈养在动物室中，恒温21～25℃和湿度40～70％，房间保持12小时光照/黑暗循环。饲养过程遵守实验动物管理与保护的有关准则。小鼠先喂普通饲料适应环境1周(记为试验第1周)。然后随机分成4组，每组15只小鼠，分别为对照组、模型组、hfd mn-gup-低剂量组和hfd mn-gup-高剂量组。对照组：试验第2-13周饲喂普通饲料；模型组：给予高脂饲料喂养。高脂饲料饮食诱导5周后，高脂饲料组(hfd)小鼠腹腔注射链脲佐菌素(stz)(30mg/kg/d)连续三天，对照组注射生理盐水。注射72小时后hfd和stz处理的小鼠的空腹血糖水平高于11.1mmol/l的小鼠被认为t2dm小鼠模型，经检测诱导组小鼠血糖均高于11.1mmol/l。造模成功后，t2dm小鼠饲喂正常饲料到13周；hfd mn-gup-低剂量组：与模型组的区别在于：试验第2-13周，每千克小鼠每天饲喂活菌数为2×109cfu的乳双歧杆菌mn-gup菌粉；hfd mn-gup-高剂量组：与模型组的区别在于：试验第2-13周，每千克小鼠每天饲喂活菌数为1×1010cfu的乳双歧杆菌mn-gup菌粉。每周记录给食量、撒食量、剩食量，摄入总热量(摄食量×每公斤饲料热量)、食物利用率、称量体重1次。试验结束后，称体重，检测瘦素(leptin)、glp-1、空腹胰岛素含量、空腹血糖及餐后2h血糖；计算胰岛素抵抗指数(homa-ir)，上述公式中禁食胰岛素含量即为空腹胰岛素含量。测定所有小鼠造模后一周(第7周)和处死前一周(第13周)的口服糖耐量。具体方法为：小鼠禁食不禁水16h后(两小时后测定餐后2h血糖，再过14h测空腹血糖和空腹胰岛素含量)，灌胃2g/kg·bw的葡萄糖(将葡萄糖配制成葡萄糖水溶液，按照葡萄糖水溶液中葡萄糖含量为40％(g/ml)，然后分别在第0min(即为空腹血糖)、30min、60min、90min、120min时取大鼠尾静脉血，利用血糖仪和配套的血糖试纸测定血糖值并记录取血后，用碘伏擦拭小鼠被针刺的部位，以防感染。根据血糖值使用orgin9.0软件绘制血糖变化曲线并计算出糖耐量曲线下面积(areaundercerve，auc)，auc数值大小直接反映小鼠的葡萄糖耐受量。结果见(1)-(4)。(1)小鼠体重变化表2小鼠体重增重/g注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。对各组小鼠第2-13周体重变化进行分析，每组中15只小鼠体重变化试验结果取平均值，并进行差异显著性分析，如表2所示。与对照组相比，糖尿病模型组体重显著降低。与模型组相比，mn-gup高剂量组的小鼠体重明显增加，结果表明乳双歧杆菌mn-gup菌粉可有效缓解小鼠体重下降。(2)小鼠空腹血糖对各组小鼠的空腹血糖进行分析，每组中15只小鼠的空腹血糖取平均值，并进行差异显著性分析，如下表所示。模型组的空腹血糖显著高于对照组，与模型组相比，mn-gup高、低剂量组都可以显著降低小鼠空腹血糖，说明乳双歧杆菌mn-gup菌粉可有效降低小鼠空腹血糖。表3小鼠空腹血糖注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)(3)小鼠餐后血糖对各组小鼠的餐后血糖进行分析，每组中15只小鼠的餐后血糖取平均值，并进行差异显著性分析，如下表所示。与对照组相比，模型组餐后2h血糖显著升高，与模型组相比，各干预组(低剂量组和高剂量组)餐后2h血糖显著降低，上述结果说明mn-gup菌粉显著调节2型糖尿病小鼠的餐后血糖恢复正常。表4小鼠餐后血糖注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。(4)小鼠胰岛素抵抗情况对各组小鼠的auc指数和胰岛素抵抗指数进行分析，每组中15只小鼠的auc指数和胰岛素抵抗指数取平均值，并进行差异显著性分析，如下表所示。与对照组相比，模型组auc指数和胰岛素抵抗指数显著增加；与模型组相比，mngup菌粉组小鼠auc指数和胰岛素抵抗指数均显著降低。表5小鼠胰岛抵抗情况注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。二、乳双歧杆菌mn-gup对2型糖尿病小鼠的肠道通透性和胰岛损伤的影响结肠上皮粘膜屏障：饲喂试验结束后，取对照组、模型组(hfd)、hfd mn-gup-低剂量组和hfd mn-gup-高剂量组小鼠结肠上皮粘膜的病理切片通过he染色后进行观察，见图1(a)。胰岛损伤的病理学观察：饲喂试验结束后，取对照组、模型组(hfd)、hfd mn-gup-低剂量组和hfd mn-gup-高剂量组小鼠胰腺组织的病理切片通过he染色后进行观察，见图1(b)。图1中的mn-gup低代表mn-gup低剂量组。mn-gup高代表mn-gup高剂量组。从图1中可以看出：对照组中，上皮和黏膜结构完整，无炎性浸润。在糖尿病模型组小鼠中，部分上皮细胞受损并从粘膜表面脱离，平滑肌变薄并脱落。乳双歧杆菌mngup可使糖尿病小鼠上皮正常化，黏膜更完整，杯状细胞增多，上皮细胞脱落减少，乳双歧杆菌mngup菌粉对肠粘膜具有显著的修复作用，并呈剂量效应。正常对照组小鼠的胰岛细胞呈圆形或椭圆形，且具有清晰的细胞特征；模型组中的小鼠胰岛细胞体积减少，细胞结构不规则，细胞形态不完整，干预组中，菌粉组均能显著改善小鼠胰岛细胞的体积，并呈剂量依赖效果。三、乳双歧杆菌mn-gup对2型糖尿病小鼠肝脏炎症因子分泌及糖异生、脂肪生成基因表达谱的影响炎症因子：按照elisa试剂盒说明书的方法检测饲喂试验结束后小鼠血清中tnf-α、il-1β和il-6的含量，每组15只小鼠进行试验，试验结果取平均值，并进行差异显著性分析。结果见表6(mn-gup低代表mn-gup低剂量组，mn-gup高代表mn-gup高剂量组)。从表6可以看出，与对照组相比，模型组炎症因子il-6表达量显著升高；与模型组相比，mn-gup低剂量组各炎症因子没有显著变化，mn-gup高剂量组tnf-α、il-6、il-1β的表达量显著降低，综上所述，mngup菌粉高剂量对糖尿病小鼠的血清炎症因子有显著影响。表6小鼠血清炎症因子(pg/ml)注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。糖异生和脂肪生成基因：通过realtimepcr测定试验结束后小鼠糖异生基因(在糖尿病中表达上升)(g6p、pepck)、脂肪生成基因fas的表达差异，每组15只小鼠进行试验，试验结果取平均值，并进行差异显著性分析，结果见表7和表8。从表7小鼠肝脏糖异生基因表达可以看出：与对照组相比，模型组小鼠糖异生基因pepck的相对表达量显著升高，g6p基因的相对表达量也有所升高。与模型组相比，mn-gup菌粉高、低剂量组组g6p和pepck的相对表达量显著降低。结果说明mn-gup菌粉对糖尿病小鼠糖异生基因的相对表达量影响显著。表7小鼠肝脏糖异生基因注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。从表8小鼠肝脏脂肪生成基因表达可以看出：与对照组相比，模型组fas的相对表达量显著升高；与模型组相比，fas的相对表达量显著降低，mngup菌粉显著调节了脂肪生成基因的相对表达能力。表8小鼠肝脏脂肪生成基因表达注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。四、乳双歧杆菌mn-gup对2型糖尿病小鼠的乙酸和glp-1含量的影响,(1)气相法测定乙酸的组成及含量：饲喂试验结束后，每组15只小鼠进行试验,每只小鼠取新鲜粪便于离心管中，加入稀释液(去离子水)，均质并离心，取上清液过膜后加于气相瓶中，运用气相色谱法测定小鼠粪便中乙酸含量。试验结束后，结果取平均值，并对差异显著性进行分析，见下表。表9小鼠粪便中乙酸含量注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)；乙酸的单位为ug/g(粪便)从上表中可以看出，与对照组相比，模型组小鼠粪便中乙酸的含量显著降低；与模型组相比，高剂量组乙酸含量显著增加。mn-gup菌粉可显著增加糖尿病小鼠粪便中乙酸含量。(2)leptin和glp-1含量的检测：按照elisa试剂盒说明书的方法检测饲喂试验结束后，各组小鼠的血清中leptin和glp-1含量，每组15只小鼠进行试验，试验结果取平均值，并进行差异显著性分析，结果见下表。表10小鼠血清中leptin、glp-1的变化注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。leptin和glp-1含量的单位为pg/ml(血清)从上表中可以看出，与对照组相比，模型组小鼠血清中leptin的含量显著升高；与模型组相比，高、低剂量组leptin含量显著降低，高剂量组glp-1含量显著升高，mn-gup菌粉显著影响了小鼠血清中的leptin、glp-1含量。五、乳双歧杆菌mn-gup对肠道菌群调节作用。通过对粪便的16srdna测序确定(illuminamiseq平台高通量基因组测序)和重点分析饲喂试验结束后各组小鼠的血清中肠道菌群的特征性变化，同时确定受益生菌影响的几类主要肠道菌属。1、每组15只小鼠分析肠道菌群α多样性指数，试验结果取平均值，并进行差异显著性分析，结果见下表。表11肠道菌群α多样性指数的变化注：a表示与对照组有显著差异(p<0.05),b表示与模型组有显著差异(p<0.05)。与对照组相比，模型组物种多样性shannon指数显著降低；与模型组相比，mn-gup-低组物种丰富度sobs、chao指数和物种多样性shannon指数显著升高，说明mn-gup-低剂量组菌群丰富度和菌群多样性增加；mn-gup-高组sobs指数显著升高，说明mn-gup-高剂量组菌群丰富度增加。综上可知，乳双歧杆菌mngup对糖尿病小鼠肠道菌群α多样指数有显著影响。2、饲喂试验结束后，取对照组、模型组、mn-gup-低组和mn-gup-高组每组15只小鼠，检测门水平菌群相对丰度并取平均值。某个菌门在四个组中任意一个组的平均相对丰度大于1％，将该菌属列出，结果见下表。表12肠道菌群门水平相对丰度的变化注：模型组中( /-)表示与对照组相比，相对丰度增加/减少；mn-gup-低(高)组中( /-)表示与模型组相比，相对丰度增加/减少。与对照组相比，模型组中厚壁菌门(firmicutes)、变形菌门(proteobacteria)相对丰度升高，拟杆菌门(bacteroidetes)和放线菌门(actinobacteria)相对丰度降低，厚壁菌相对丰度/拟杆菌相对丰度的比值升高。与模型组相比，mn-gup-低剂量组和mn-gup-高剂量组厚壁菌门(firmicutes)、变形菌门(proteobacteria)相对丰度降低，拟杆菌门(bacteroidetes)和放线菌门(actinobacteria)相对丰度升高，厚壁菌门相对丰度/拟杆菌门相对丰度的比值降低。因此，mn-gup菌粉干预后糖尿病小鼠肠道菌群各优势菌门向正常组转移。3、饲喂试验结束后，取对照组、模型组、mn-gup-低组和mn-gup-高组每组15只小鼠，检测属水平菌群相对丰度并取平均值，选取某个有害菌属在四个组中任意一个组的平均相对丰度大于1％，将该菌属列出，结果见下表，表13各组小鼠肠道菌群有害菌属水平相对丰度变化注：模型组中 (-)表示与对照组相比，相对丰度增加(减少)；mn-gup-低(高)组中 (-)表示与模型组相比，相对丰度增加(减少)。从上表可以看出，与2型糖尿病相关有害菌属为11种，与对照组相比，模型组5个菌属有害菌相对丰度增加，6个菌属有害菌相对丰度降低。与模型组比，mn-gup-低组有4个菌属有害菌相对丰度降低，7个菌属有害菌相对丰度增加；与模型组比，mn-gup-高组有7个菌属有害菌相对丰度降低，4个菌属有害菌相对丰度增加。与模型组相比，mn-gup组(mn-gup-高组和mn-gup-低组)的菌群结构更接近于对照组。4、饲喂试验结束后，取对照组、模型组、mn-gup-低组和mn-gup-高组每组15只小鼠，检测属水平菌群相对丰度并取平均值，某个有益菌属在四个组中任意一个组的平均相对丰度大于1％，将该菌属列出，结果见下表。表14各组小鼠肠道菌群有益菌属水平相对丰度变化注：模型组中 (-)表示与对照组相比，相对丰度增加(减少)；mn-gup-低(高)组中 (-)表示与模型组相比，相对丰度增加(减少)。在属水平对照组、模型组、mn-gup-低组和mn-gup-高组四个组中任意一个组的相对丰度大于1％的菌属进行分析，其中有益菌属13种，与对照组相比，模型组有10个菌属有益菌相对丰度降低，3个菌属有益菌相对丰度增加；mn-gup-低组有11个菌属有益菌相对丰度增加，2个菌属有益菌相对丰度降低；mn-gup-高组有9个菌属有益菌相对丰度增加，4个菌属有益菌相对丰度降低。与模型组相比，mn-gup组(mn-gup-高组和mn-gup-低组)的菌群结构更接近于对照组。综上表13和表14，乳双歧杆菌mn-gup发酵乳可以调节肠道菌群平衡。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页1 2 3
技术特征：1.乳双歧杆菌mn-gup或者主要成分为乳双歧杆菌mn-gup的菌剂在如下a)-k)任一一种中的应用；
a)制备治疗糖尿病产品；
b)调节肠道菌群多样性和/或肠道菌群平衡；
c)降低血糖；
d)降低胰岛素抵抗指数；
e)缓解胰岛损伤；
f)降低血清炎症因子；
g)降低糖异生基因的表达量；
h)降低脂肪生成基因的表达量；
i)调节血清中的leptin、glp-1含量；
j)修复肠粘膜；
k)缓解体重下降。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，调节肠道菌群多样性是指调节菌群门水平多样性。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述调节菌群门水平多样性具体为如下任意一种或几种：
(a)厚壁菌门(firmicutes)相对丰度降低；
(b)变形菌门(proteobacteria)相对丰度降低；
(c)拟杆菌门(bacteroidetes)相对丰度升高；
(d)放线菌门(actinobacteria)相对丰度升高；
(e)厚壁菌门相对丰度与拟杆菌门相对丰度比值降低。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述调节肠道菌群平衡具体为调节有益菌菌属和有害菌属平衡。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述有害菌属为escherichia-shigella、aerococcus、staphylococcus、kurthia、proteus、dubosiella、enterococcus、clostridium_sensu_stricto_1、desulfovibrio、klebsiella或candidatus_saccharimonas中的任一一种或几种；所述有益菌属为bifidobacterium、faecalibaculum、psychrobacter、g_norank_f_muribaculaceae、lactobacillus、jeotgalicoccus、turicibacter、unclassified_o_lactobacillales、akkermansiaenterorhabdus、alistipes、weissella或bacteroides中的任一一种或几种。
6.根据权利要求1-5任一一项所述的应用，其特征在于，所述乳双歧杆菌mn-gup的保藏编号为cgmccno.15578。
7.根据权利要求1-6任一一项所述的应用，其特征在于，所述糖尿病为2型糖尿病。
8.根据权利要求1-7任一一项所述的应用，其特征在于，所述血糖为空腹血糖或者餐后血糖；所述血清炎症因子为tnf-α、il-6和/或il-1β；所述糖异生基因为在糖尿病中表达上升的基因，具体为g6p或pepck；所述脂肪生成基因为fas。
9.根据权利要求1-8任一所述的应用，其特征在于，人每千克体重每天的乳双歧杆菌mn-gup活菌用量为2×108cfu以上，优选为1×109cfu以上。
技术总结本发明属于技术领域，具体涉及一种双歧杆菌MN‑Gup及其菌剂在治疗2型糖尿病中的应用。本发明提供了乳双歧杆菌MN‑Gup或者主要成分为乳双歧杆菌MN‑Gup的菌剂能够通过综合机制来改善2型糖尿病，如：缓解胰岛损伤、修复肠粘膜、改善相关炎症反应、提高肠胰岛素GLP‑1的表达和恢复肠道菌群健康化等等。解决了目前缺乏一种特异性调节2型糖尿病相关性肠道菌群及恢复健康的肠道菌群以改善、缓解或治疗2型糖尿病的益生菌的问题。
技术研发人员：陈建国;韩雨婷;孙二娜;孙健;康小红;朱振华;房洪涛;史苏华
受保护的技术使用者：内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司
技术研发日：2020.09.29
技术公布日：2021.08.03
