本发明涉及美容技术领域，具体为一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法。
背景技术：
胚胎干细胞(embryonicstemcell,escs)是早期胚胎中分离出来的一类细胞，具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性，可分化成三胚层的任意细胞，具有发育成多种组织的能力，参与部分组织的形成。
胚胎干细胞在培养过程中会分泌多种因子，主要包括与多能性相关的因子、转录因子、mrna和microrna等，这些因子可以抑制细胞衰老过程，改变靶细胞表观遗传特征，使效应细胞逆转至低分化状态，起到与组织干细胞类似的作用，如修复血管、抑制炎症、促进组织干细胞增殖分化等功能，在损伤修复以及组织再生中发挥着重要作用。
市场上大多数美容制剂的活性成分单一，个体针对性不强，产品效果不佳，且产品同质化严重等问题。而胚胎干细胞分泌的因子可提供细胞生长和分化所需要的各种营养和物质信息，可快速激活人体的修护系统，根据不同肌肤问题进行智能修护。因此，开发一种能够超越单一细胞因子的最佳修护功效的美容制剂是亟待解决的问题。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明提供了一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，解决了上述背景技术中提出的问题。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，包括以下步骤：
s1：将胚胎干细胞接种到扩增培养基进行培养，收集胚胎干细胞培养上清液，提取培养上清液中的细胞分泌物；
s2：对提取出的培养分泌物进行浓缩和过滤，得到胚胎干细胞培养提取物。
优选的，所述s1对胚胎干细胞进行培养时，采用基质胶包被细胞培养板。
优选的，所述s2步骤中收集稳定培养2天的干细胞培养上清进行浓缩。
优选的，所述s2步骤中的在细胞培养上清浓缩过程中，先后使用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，得到浓缩液。
一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的应用方法，包括以下步骤：
s01：对受试者的皮肤进行皮肤检测，得到受试者的皮肤数据报告；
s02：受试者使用胚胎干细胞培养提取物进行皮肤护理，每天早晚取1ml外敷于面部皮肤表层；
s03：连续使用7天、30天后分别再次进行皮肤测试，得到受试者的皮肤数据报告，比较使用前后皮肤状态。
本发明提供了一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，具备以下有益效果：
1、该皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，本发明优选人胚胎干细胞作为培养提取物的来源。胚胎干细胞的培养上清中富含表皮生长因子、血管内皮生长因子和干细胞因子等活性因子成分，这些因子能够促进体内干细胞的生长和增殖，促进皮肤内的成纤维细胞等分泌更多的胶原蛋白，这些生物效应具有传统化妆品不可比拟的优势，能够显著缓解的皮肤的老化。
2、该皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，本发明采用无血清培养基培养胚胎干细胞，安全可靠，不会像传统的血清培养法可能会引起免疫排斥反应。
3、该皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，本发明采用切向流超滤浓缩纯化胚胎干细胞培养液，纯化效率高，适合大规模生产胚胎干细胞培养提取物。
4、该皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，本发明制备的胚胎干细胞培养提取物具有显著的美容与抗衰老效果，使用过本胚胎干细胞培养提取物的受试者，皱纹消失，弹力改善，肤色变白，毛孔缩小，皮肤变得光滑水嫩，持续效果好。
附图说明
图1为本发明皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备步骤图；
图2为本发明皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的应用步骤图；
图3为本发明30人次使用胚胎干细胞培养提取物前后的面部皮肤改善情况图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，包括以下步骤：
s1：将胚胎干细胞接种到扩增培养基进行培养，收集胚胎干细胞培养上清液，提取培养上清液中的细胞分泌物；
s2：对提取出的培养分泌物进行浓缩和过滤，得到胚胎干细胞培养提取物。
本领域技术人员可以理解为：
1.细胞培养上清预处理：取胚胎干细胞培养上清(新鲜或者－20℃复温)，3000g离心15min去除死细胞和碎片，上清转移到灭菌后的1l蓝盖瓶中(不要倒太干净)。
2.过滤除大颗粒：先后使用0.45μm和0.22μm水系膜过滤第1步上清，滤膜使用前用70％酒精浸泡除菌。0.22μm过滤后的上清转移至蓝盖瓶内。
3.切向流超滤浓缩细胞上清：
1)将进液/回流管路放入第2步准备的细胞上清中，滤出管路放入1l废液瓶中，开启蠕动泵并调速至压力指示2.5bar，持续循环与浓缩至浓缩液剩约10～15ml；
2)降低循环速度至20-40ml/min并持续循环系统1-2min以增加样品回收率。
3)取出进液管，将系统中剩余的样品泵到样品瓶，进液管加约10mldpbs清洗并泵入样品瓶。
4.0.22μm膜过滤：使用millipore0.22μm过滤器过滤收集浓缩液，得到胚胎干细胞培养提取物，于－80℃冷藏备用。
进一步，s1对胚胎干细胞进行培养时，采用基质胶包被细胞培养板。
本领域技术人员可以理解为，使得培养效果较好。
进一步，s2步骤中收集稳定培养2天的干细胞培养上清进行浓缩。
本领域技术人员可以理解为，使得干细胞培养上清浓缩效果较好。
进一步，s2步骤中的在细胞培养上清浓缩过程中，先后使用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，得到浓缩液。
本领域技术人员可以理解为，使得得到的浓缩液中含有的杂质较少。
实施例二
请参阅图2，一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的应用方法，包括以下步骤：
s01：对受试者的皮肤进行皮肤检测，得到受试者的皮肤数据报告；
s02：受试者使用胚胎干细胞培养提取物进行皮肤护理，每天早晚取1ml外敷于面部皮肤表层；
s03：连续使用7天、30天后分别再次进行皮肤测试，得到受试者的皮肤数据报告，比较使用前后皮肤状态。
本领域技术人员可以理解为：
1.稳定性试验
所得胚胎干细胞培养提取物放置于－20℃条件下保存。在六个月以后观察，无明显变化。
2.有效性测试
挑选30位受试者，先对受试者的皮肤进行检测(cbs-807皮肤分析系统)检测皮肤的弹性、毛孔大小、水分、皱纹和肤色，得到受试者的皮肤报告，受试者试用所得胚胎干细胞培养提取物，采用外敷方式将胚胎干细胞培养提取物敷在皮肤表层，每天早晚洁面后涂抹相应样品2次，每次分别涂抹1ml，在连续使用7、30天后分别再次进行皮肤检测。结果见图三。
由图3可知，本发明提供的胚胎干细胞培养提取物具有良好的抗衰美容效果，可以有效改善面部皮肤弹性、水分、皱纹、斑点和毛孔粗大等问题，对面部皮肤具有修复作用。另外选择5名面部有皱纹、色斑、肤质粗糙的受试者，每天早晚洁面后，将胚胎干细胞提取物涂抹在面部，连续使用7天。总体上，5名受试者在连续使用7天，面部的皱纹变淡变浅，皮肤变白，更加细腻光滑。男性受试者使用本发明胚胎干细胞提取物，其眼周部皱纹消失，肤色变白，肤质更加细腻。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
1.一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
s1：将胚胎干细胞接种到扩增培养基进行培养，收集胚胎干细胞培养上清液，提取培养上清液中的细胞分泌物；
s2：对提取出的培养分泌物进行浓缩和过滤，得到胚胎干细胞培养提取物。
2.根据权利要求1所述的一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，其特征在于：所述s1对胚胎干细胞进行培养时，采用基质胶包被细胞培养板。
3.根据权利要求1所述的一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，其特征在于：所述s2步骤中收集稳定培养2天的干细胞培养上清进行浓缩。
4.根据权利要求1所述的一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的制备方法，其特征在于：所述s2步骤中的在细胞培养上清浓缩过程中，先后使用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，得到浓缩液。
5.一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞培养提取物的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
s01：对受试者的皮肤进行皮肤检测，得到受试者的皮肤数据报告；
s02：受试者使用胚胎干细胞培养提取物进行皮肤护理，每天早晚取1ml外敷于面部皮肤表层；
s03：连续使用7天、30天后分别再次进行皮肤测试，得到受试者的皮肤数据报告，比较使用前后皮肤状态。
技术总结