本发明涉及脑缺血防治技术领域，具体涉及水飞蓟宁在制备预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤药物中的应用。
背景技术：
水飞蓟宁(silydianin)是从菊科水飞蓟属植物水飞蓟(奶蓟)果实中提取的黄酮类单体小分子化合物，分子式：c25h22o10，分子量482，为白色针状晶体。cas号：29782-68-1。具有取材方便、价格低的特点。
脑缺血指的是脑供血不足，可由多种疾病导致，这些疾病主要包括脑血管动脉硬化、脑血管痉挛、椎基底动脉受压迫等。脑缺血包括短暂性脑缺血发作与脑梗死两种类型。脑缺血如果持续较长时间，会引起脑组织坏死等变化，造成不可逆性损伤。脑缺血多见于老年人，但是随着国民生活水平的不断提高，脑缺血的发病年龄有年轻化的趋势。虽然脑的重量仅为体重的2％，但耗氧量则占全身耗氧量的20％，所需血供占心输出量的15％，因此脑组织对缺血或缺氧非常敏感。脑组织主要由神经元和胶质细胞组成，其中神经元是神经功能的主要执行者。与胶质细胞相比较，神经元极易受到缺血性损伤，这是脑缺血所致神经功能障碍的主要病理基础。鉴于脑缺血可以导致神经元的氧气和葡萄糖供应不足，因此氧糖剥夺(oxygenglucosedeprivation，ogd)已经被广泛地用于体外模拟脑缺血的病理过程。研究发现，脑缺血可以通过蛋白酶体功能障碍、能量代谢障碍、钙离子超载、内质网应激反应等多种途径导致神经元损伤或死亡。目前对脑缺血所致的神经功能障碍尚缺乏有效的预防和治疗药物。因此，预防和治疗脑缺血后神经元损伤已经成为减轻脑缺血后神经功能障碍的主要策略。
截至目前，水飞蓟宁(silydianin)对神经系统疾病，尤其是对脑缺血后神经元损伤和死亡的防治作用未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供水飞蓟宁的新用途，即水飞蓟宁在制备预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤药物中的应用。具体地说，水飞蓟宁能够防治脑缺血后神经元损伤和死亡。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供一种水飞蓟宁在制备预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤药物中的应用。
作为优选的实施方式，所述水飞蓟宁的浓度为2.0～4.0mmol/l。
作为更优选的实施方式，所述水飞蓟宁的浓度为2.0mmol/l。
作为更优选的实施方式，所述水飞蓟宁的浓度为4.0mmol/l。
本发明的有益效果是：本发明通过实施例1证实，水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺所诱导的人sh-sy5y细胞损伤和死亡。本发明通过实施例2证实，水飞蓟宁能够以浓度依赖的方式抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的线粒体组分中aif的减少，同时还抑制了细胞核组分中aif的增加，水飞蓟宁能够显著地抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的aif核转位。本发明通过实施例3证实，在氧糖剥夺(ogd)能够显著地上调dna双链断裂的标志物γ-h2ax的蛋白水平的前提下，水飞蓟宁以浓度依赖的方式抑制了氧糖剥夺(ogd)诱导的γ-h2ax的表达上调，水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺(ogd)所导致的人sh-sy5y细胞dna双链损伤。本发明通过实施例4证实，在氧糖剥夺(ogd)能够显著地上调ubiquitin所标记蛋白的数量的前提下，水飞蓟宁以浓度依赖的方式抑制了氧糖剥夺(ogd)诱导的ubiquitin所标记蛋白的数量上调，水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺(ogd)所导致的蛋白聚集。
本发明通过实验证实，水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺(ogd)对神经元的损伤作用，具有预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤和死亡的作用。
本发明开拓了水飞蓟宁的新用途，为防治脑缺血这一影响老年人生存质量的神经系统常见疾病提供了新的防治途径和防治方法。
附图说明
图1为实施例1中水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)对人sh-sy5y细胞的杀伤作用的实验结果图。
图2为实施例2中水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞内aif核转位的实验结果图。
图3为实施例3中水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞dna双链断链的实验结果图。
图4为实施例4中水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞蛋白聚集的实验结果图。
具体实施方式
本发明通过实验证实水飞蓟宁能够抑制脑缺血所诱导的神经元损伤和死亡，而且两者之间具有量效关系。体外研究实验显示，采用2.0mmol/l和4.0mmol/l水飞蓟宁处理人sh-sy5y细胞1小时，能够显著抑制氧糖剥夺(ogd)所致的神经元损伤及死亡。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)对人sh-sy5y细胞的杀伤作用
水飞蓟宁(购自成都瑞芬思公司)，使用时用dmso配制成母液，稀释后给药。
人sh-sy5y细胞(购自中国吉凯生物技术公司)，采用氧糖剥夺(ogd)制作“脑缺血后神经元损伤和死亡”的细胞模型，ldh(乳酸脱氢酶)释放法检测细胞的损伤和死亡。
将人sh-sy5y细胞接种于96孔板中的dmem培养基中，二氧化碳孵箱过夜，提前1小时分别与不同浓度的水飞蓟宁(2.0mmol/l和4.0mmol/l)一起孵育，氧糖剥夺24小时后检测乳酸脱氢酶(ldh)释放程度。
实验结果如图1所示。结果显示：未经氧糖剥夺处理的control组、2mmol/l水飞蓟宁组和4mmol/l水飞蓟宁组的ldh释放od值分别为0.3937、0.395714286和0.398，如表1所示。经过氧糖剥夺处理后，control组的ldh释放od值升高到0.6567，但是水飞蓟宁(2mmol/l和4mmol/l)提前预处理1小时则抑制了氧糖剥夺所诱导的ldh释放，其od值分别下降到0.6478571和0.635714286，并且4mmol/l水飞蓟宁组的抑制作用更明显(p<0.05)，如表2所示。
表1
表2
**：p＜0.05，水飞蓟宁4mmol/l ogd组与ogd组比较。
经过上述证实，水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺所诱导的人sh-sy5y细胞损伤和死亡。
实施例2水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞内aif核转位
aif(apoptosisinducingfactor)由线粒体释放并进入细胞核是导致细胞程序性死亡的主要原因之一。为了阐明水飞蓟宁对氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞死亡的抑制作用，本实验将人sh-sy5y细胞接种于培养皿中的dmem培养基中，二氧化碳孵箱过夜，提前1小时与不同浓度的水飞蓟宁(2.0mmol/l和4.0mmol/l)一起孵育，氧糖剥夺24小时后，收集细胞，裂解后，采用差速离心的方法分离线粒体组分和细胞核组分，然后采用蛋白印迹分析方法检测水飞蓟宁对氧糖剥夺(ogd)所致aif核转位的影响。
实验结果如图2所示。结果显示：水飞蓟宁能够以浓度依赖的方式抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的线粒体组分中aif的减少，同时还抑制了细胞核组分中aif的增加，这说明水飞蓟宁能够显著地抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的aif核转位。图2中的tomm20为线粒体的标志性蛋白，h2a为细胞核标志性蛋白。
实施例3水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞dna双链断链
dna是遗传信息的载体，dna的双链断裂是导致dna溶解和细胞死亡的基础。为了说明水飞蓟宁对细胞的保护作用，本实验采用蛋白印迹的方法检测了水飞蓟宁对氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞dna双链断裂的影响。
实验结果如图3所示。结果显示：氧糖剥夺(ogd)能够显著地上调dna双链断裂的标志物γ-h2ax的蛋白水平，但是水飞蓟宁以浓度依赖的方式抑制了氧糖剥夺(ogd)诱导的γ-h2ax的表达上调。这说明水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺(ogd)所导致的人sh-sy5y细胞dna双链损伤。
实施例4水飞蓟宁抑制氧糖剥夺(ogd)所诱导的人sh-sy5y细胞蛋白聚集
蛋白聚集已经被证实是导致神经元死亡的主要因素。为了说明水飞蓟宁对细胞的保护作用，本实验采用蛋白印迹的方法检测了水飞蓟宁对氧糖剥夺(ogd)所诱导蛋白聚集的影响。
实验结果如图4所示。结果显示：氧糖剥夺(ogd)能够显著地上调ubiquitin所标记蛋白的数量，但是水飞蓟宁以浓度依赖的方式抑制了氧糖剥夺(ogd)诱导的ubiquitin所标记蛋白的数量上调。这说明水飞蓟宁能够抑制氧糖剥夺(ogd)所导致的蛋白聚集。
本发明公开了一种水飞蓟宁在制备预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
1.水飞蓟宁在制备预防和/或治疗脑缺血后神经元损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述水飞蓟宁的浓度为2.0～4.0mmol/l。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述水飞蓟宁的浓度为2.0mmol/l。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述水飞蓟宁的浓度为4.0mmol/l。
技术总结