本发明涉及医药技术领域，具体涉及使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法。
背景技术：
弓形虫隶属于顶端复合物亚门(apicomplexa)，孢子虫纲(sporozoasida)，球虫亚纲(coccidiasina)真球虫目(eucoccidiorida)，艾美耳亚目(eimeriina)，弓形虫科(toxoplasmatidae)，弓形虫属(toxoplasma)。弓形虫属下只有一个种，为刚地弓形虫(toxoplasmagondii)，常称为弓形虫。但根据不同地域，不同宿主、不同毒力、生活史及其发育时间不同等，可将其分为三种不同的基因型，ⅰ型(rh和gt-1株)、ⅱ型(me49和pru株)与ⅲ型(cep和veg株)。三种基因型虫株具有明显不同的毒力表型，其中i型毒株为强毒株，致死率高，主要为急性感染；而ii型和iii型毒株的毒性低得多，致死率低，急性感染期后转为慢性感染。
弓形虫病是一种由刚地弓形虫引起的专性胞内寄生原虫病。刚地弓形虫能感染包括人在内的所有温血动物，甚至是一些冷血动物，并且能寄生于动物机体的所有有核细胞内。而且弓形虫病的传播途径广泛，宿主主要可通过饮食、垂直传播、器官移植和输血等方式感染。在免疫力强的个体中，弓形虫病通常不表现出症状，或者是轻度的自限性感染。然而，在免疫系统不发达的胎儿和新生儿或在hiv和其它具有细胞免疫力下降的疾病使免疫系统受损的情况下，弓形虫病可能会危及生命。弓形虫病能严重影响人类、家畜和野生动物的健康，被视为一种严重威胁。
针对弓形虫病，目前还没有有效的疫苗，临床治疗多采用化学疗法。弓形虫病的经典化学疗法通常是采用抗菌药物磺胺嘧啶、螺旋霉素和克林霉素或抗疟疾药物乙胺嘧啶和阿托伐醌。这些药物通过不同的作用机制抑制弓形虫的增殖而保护器官免受损害，但不能将其从宿主体中完全清除，也存在很多疗程长、不良反应多、易复发等缺点，并且没有一种药物可清除弓形虫的包囊。
光甘草定(glabridin)是一种异黄烷类化合物，具有抗自由基氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、降血糖血脂等药理活性，因为光甘草定强大的美白作用被人们誉称为"美白黄金"，可消除自由基与肌底黑色素，是皮肤的美白和抗衰老圣物。但未有研究表明光甘草定对弓形虫有活性。本发明人在研究发明中发现光甘草定对寄生原虫弓形虫有显著的活性，可以显著抑制弓形虫的入侵和增殖。因此提出使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法。
技术实现要素：
本发明的目的是提供使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，通过异黄烷类化合物光甘草定对弓形虫具有显著活性，可以显著抑制弓形虫的入侵和增殖，可以用于治疗弓形虫病，光甘草定抗增殖和抗入侵作用甚至优于现在临床所用的药物乙胺嘧啶，使用异黄烷类化合物光甘草定制造的药物不仅对急性弓形虫病有效，还对于弓形虫的慢性感染也有效，以解决技术中的上述不足之处。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，具体步骤如下：
步骤一：利用异黄烷类化合物光甘草定制造药物；
步骤二：利用制造的药物抗弓形虫的入侵。
优选的，在步骤一中所述异黄烷类化合物光甘草定从甘草中提取。
优选的，在步骤一中所述药物由以下重量份的原料组成：异黄烷类化合物光甘草定0.01-0.2份、崩解剂20-30份、填充剂20-30份、助流剂2-6份、粘合剂2-8份、表面活性剂1-3份和矫味剂1-3份。
优选的，所述崩解剂为干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代纤维素、交联pvp中的一种，所述填充剂为甘露醇、乳糖、微晶纤维素中的一种。
优选的，所述助流剂为滑石粉、微粉硅胶中的一种，所述粘合剂为淀粉浆、甲基纤维素、聚维酮中的一种。
优选的，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、硬脂酸中的一种，所述矫味剂为安赛蜜、甜菊苷、海藻酸钠中的一种。
优选的，述药物制作方法的具体步骤如下：
s1：将原料异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂、助流剂、粘合剂、表面活性剂和矫味剂分别过筛备用；
s2：将异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂与混合机中混合均匀制备药粉；
s3：将粘合剂、表面活性剂和矫味剂与药粉在湿法制粒机中制成湿粒；
s4：将湿粒于干燥机中70℃干燥2h，然后过20目筛整粒得颗粒；
s5：上述颗粒中加入助流剂混合均匀后压片即可。
优选的，在步骤二中抗弓形虫的入侵方法包括将药物与弓形虫接触的步骤。
在上述技术方案中，本发明提供的技术效果和优点：
异黄烷类化合物光甘草定对弓形虫具有显著活性，可以显著抑制弓形虫的入侵和增殖，可以用于治疗弓形虫病，光甘草定抗增殖和抗入侵作用甚至优于现在临床所用的药物乙胺嘧啶，使用异黄烷类化合物光甘草定制造的药物对急性弓形虫病有效。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的光甘草定对弓形虫的抗入侵作用图；
图2为本发明的光甘草定对细胞内rh的抗增殖作用图；
图3为本发明的光甘草定对细胞内rh-2f的抗增殖作用图；
图4为本发明的光甘草定对细胞内pru的抗增殖作用图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合附图对本发明作进一步的详细介绍。
实施例1：
本发明提供了使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，具体步骤如下：
步骤一：利用异黄烷类化合物光甘草定制造药物；
所述异黄烷类化合物光甘草定从甘草中提取；
所述药物由以下重量份的原料组成：异黄烷类化合物光甘草定0.01-0.2份、崩解剂20-30份、填充剂20-30份、助流剂2-6份、粘合剂2-8份、表面活性剂1-3份和矫味剂1-3份；所述崩解剂为干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代纤维素、交联pvp中的一种，所述填充剂为甘露醇、乳糖、微晶纤维素中的一种；所述助流剂为滑石粉、微粉硅胶中的一种，所述粘合剂为淀粉浆、甲基纤维素、聚维酮中的一种；所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、硬脂酸中的一种，所述矫味剂为安赛蜜、甜菊苷、海藻酸钠中的一种。
所述药物制作方法的具体步骤如下：
s1：将原料异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂、助流剂、粘合剂、表面活性剂和矫味剂分别过筛备用；
s2：将异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂与混合机中混合均匀制备药粉；
s3：将粘合剂、表面活性剂和矫味剂与药粉在湿法制粒机中制成湿粒；
s4：将湿粒于干燥机中70℃干燥2h，然后过20目筛整粒得颗粒；
s5：上述颗粒中加入助流剂混合均匀后压片即可。
步骤二：利用制造的药物抗弓形虫的入侵，抗弓形虫的入侵方法包括将药物与弓形虫接触的步骤。
实施例2：
所述药物由以下重量份的原料组成：异黄烷类化合物光甘草定0.2份、崩解剂30份、填充剂30份、助流剂6份、粘合剂8份、表面活性剂3份和矫味剂3份；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠，所述填充剂为甘露醇，所述助流剂微粉硅胶，所述粘合剂为淀粉浆，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠，所述矫味剂为甜菊苷。
所述药物制作方法的具体步骤如下：
s1：将原料异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂、助流剂、粘合剂、表面活性剂和矫味剂分别过筛备用；
s2：将异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂与混合机中混合均匀制备药粉；
s3：将粘合剂、表面活性剂和矫味剂与药粉在湿法制粒机中制成湿粒；
s4：将湿粒于干燥机中70℃干燥2h，然后过20目筛整粒得颗粒；
s5：上述颗粒中加入助流剂混合均匀后压片即可。
实施例3：
测定实施例2制备的含有用异黄烷类化合物光甘草定的药物对弓形虫的抗入侵作用：
将药物配置为含有以下浓度光甘草定的实验样品：1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、8μg/ml、10μg/ml。
方法1：间接免疫荧光法测定光甘草定对弓形虫rh的抗入侵作用：
步骤：将含有各浓度光甘草定的1×105个/ml的rh速殖子在培养箱中处理1h后接种于单层vero细胞中，0.25％dmso为阴性对照组，10μg/ml的乙胺嘧啶(pyr)为阳性对照。入侵2h后尽量用pbs将未入侵的速殖子洗去。固定、抗原修复和封闭后用小鼠抗弓形虫单克隆抗体对细胞外的弓形虫进行标记，二抗为山羊抗小鼠lggh&l(alexa
结果：如图1所示，弓形虫入侵2h时阴性对照组的入侵率为13.9％，阳性对照组的为5.39％。光甘草定对rh的入侵作用呈剂量依赖，浓度越高入侵率越低。光甘草定在最低浓度(1μg/ml)下的入侵率都比阴性对照组更低，为12.84％，在10μg/ml浓度下的入侵率仅为1.34％，比同等浓度下的乙胺嘧啶的抗入侵效果要好。光甘草定在2μg/ml开始的入侵率就同阴性对照组的入侵率存在显著性的降低(p<0.0001)。
方法2：间接免疫光法测定光甘草定对细胞内rh的抗增殖作用：
步骤：将1×105个/ml的rh速殖子接种于单层vero细胞中，入侵4h后用dpbs将未入侵的rh速殖子洗去，再加入浓度为5μg/ml的光甘草定作用24h和48h，同时设置空白对照组、阴性对照组和阳性对照组。之后进行固定、抗原修复、封闭和通透，选择用弓形虫抗体对弓形虫进行标记，二抗为山羊抗兔lggh&l(alexa
结果：如图2所示，24h时阴性对照组中可见大量的纳虫泡和速殖子，阳性对照组中可见速殖子，但光甘草定中只见零星散在的速殖子。48h时阴性对照组中可见视野中已被弓形虫rh占据，阳性对照组中还可见速殖子，光甘草定也可见很少的速殖子。光甘草定虽然不能完全清除细胞内的rh速殖子，但是可以抑制rh的增殖，大量减少细胞内rh的数量，抗增殖效果甚至优于乙胺嘧啶。
方法3：生物化学发光法测定光甘草定对细胞内的rh-2f的抗增殖作用：
步骤：将1×105个/mlrh-2f速殖子接种于单层vero细胞的96孔板中，入侵2h后用dpbs将未入侵的速殖子清除，加入浓度为5μg/ml的光甘草定，同时设置阴性对照组和阳性对照组。24h后加入glolysisbuffer裂解细胞，再加入
结果：如图3所示，将阴性对照组rh-2f的存活率记为100％计算各活性化合物的rh-2f存活率，阳性对照乙胺嘧啶的为15.54％，光甘草定的rh-2f存活率为6.66％。结果表明光甘草定对细胞内rh-2f的抗增殖作用效果显著，优于阳性对照乙胺嘧啶。
方法4：间接免疫光法测定光甘草定对细胞内pru的抗增殖作用：
步骤：将1×105个/ml的pru速殖子接种于12孔板中的单层vero细胞的爬片中，入侵6h后加入浓度为5μg/ml的光甘草定作用24h，同时设置空白对照组、阳性对照和阴性对照。固定、封闭，通透和染色。小鼠抗弓形虫单克隆抗体为一抗，二抗为山羊抗小鼠lggh&l(alexa
结果：如图4所示，24h时，阴性对照组中可见大量的pru纳虫泡，阴性对照组中可见许多pru速殖子和纳虫泡，但光甘草定中未见有pru纳虫泡，只见极少量的pru速殖子。结表明光甘草定作用24h可以显著降低pru的数量并抑制pru纳虫泡的形成。
总结：
实验结果显示异黄烷类化合物光甘草定对弓形虫具有显著活性，可以用于治疗弓形虫病，光甘草定抗增殖和抗入侵作用甚至优于现在临床所用的药物乙胺嘧啶。光甘草定在10μg/ml浓度下的入侵率仅为1.34％，光甘草定作用细胞内的弓形虫24后，弓形虫的存活率仅为6.66％，均优于10μg/ml的乙胺嘧啶。光甘草定不仅对ⅰ型强毒株rh和rh-2f有显著的抑制作用，还对ⅱ型弱毒株pru有显著的抑制作用，使用异黄烷类化合物光甘草定制造的药物不仅对急性弓形虫病有效，还可能对于弓形虫的慢性感染也有效。
某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述附图和描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。
1.使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：具体步骤如下：
步骤一：利用异黄烷类化合物光甘草定制造药物；
步骤二：利用制造的药物抗弓形虫的入侵。
2.根据权利要求1所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：在步骤一中所述异黄烷类化合物光甘草定从甘草中提取。
3.根据权利要求1所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：在步骤一中所述药物由以下重量份的原料组成：异黄烷类化合物光甘草定0.01-0.2份、崩解剂20-30份、填充剂20-30份、助流剂2-6份、粘合剂2-8份、表面活性剂1-3份和矫味剂1-3份。
4.根据权利要求3所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：所述崩解剂为干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代纤维素、交联pvp中的一种，所述填充剂为甘露醇、乳糖、微晶纤维素中的一种。
5.根据权利要求4所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：所述助流剂为滑石粉、微粉硅胶中的一种，所述粘合剂为淀粉浆、甲基纤维素、聚维酮中的一种。
6.根据权利要求5所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、硬脂酸中的一种，所述矫味剂为安赛蜜、甜菊苷、海藻酸钠中的一种。
7.根据权利要求6所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：所述药物制作方法的具体步骤如下：
s1：将原料异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂、助流剂、粘合剂、表面活性剂和矫味剂分别过筛备用；
s2：将异黄烷类化合物光甘草定、崩解剂、填充剂与混合机中混合均匀制备药粉；
s3：将粘合剂、表面活性剂和矫味剂与药粉在湿法制粒机中制成湿粒；
s4：将湿粒于干燥机中70℃干燥2h，然后过20目筛整粒得颗粒；
s5：上述颗粒中加入助流剂混合均匀后压片即可。
8.根据权利要求1所述的使用异黄烷类化合物光甘草定治疗弓形虫病的方法，其特征在于：在步骤二中抗弓形虫的入侵方法包括将药物与弓形虫接触的步骤。
技术总结