本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种稳定性改善的丁苯酞口服冻干粉及其制备方法和用途。
背景技术：
丁苯酞，也称之为芹菜甲素(casno.6066-49-5)是从芹菜籽中提取出的具有生理活性的物质。是我国在脑血管治疗首个拥有自主知识产权的国家一类新药，(商品名：恩必普)，该药物自2004年上市以来具有明显抗脑缺血疗效，能改善脑缺血能量代谢耗竭，缩小局部脑缺血造成的脑梗塞面积、改善脑血流循环，减轻局部脑缺血引起的脑水肿等症状，是治疗急性缺血性脑卒中的有效药物。丁苯酞的原料药为黄色油状液体，水溶性很低，生物利用度差。目前已经上市的剂型为软胶囊和注射液，目前这两种剂型都进入了《国家医保目录》
脑血管病目前是全世界老年人死亡的主要病因之一，目前上市的口服制剂为胶囊形式。胶囊制剂一方面见效慢，对急性的脑缺血患者不利于抢救；另一方面，患有缺血性脑卒中的人群大部分是老年人，胶囊制剂生物利用度低，需要每天服用三次，每次两粒，共计每天服用600mg丁苯酞。对脑卒中患者并不友好，固体颗粒不容易吞咽，急性期脑卒中患者都存在吞咽障碍。
cn1615938a公开了一种以丁苯酞为活性成分的注射用冻干粉针剂，具体是包括一定质量的丁苯酞、乳化剂、助乳化剂、赋形剂和水经过低温动机、真空升华制成冻干粉针剂。但是注射制剂缺乏安全性，而且该药品主要用于治疗脑血管疾病，需长期使用，且注射剂每日需静脉滴注两次，患者不能自行用药，耐受性差。cn1839824a公开了一种含有丁苯酞的注射乳剂药，具体是将调等渗剂，表面活性剂和水配制为水相混合物，按照配比加入丁苯酞、表面活性剂、稳定剂配制为油相，在60-90℃下高速搅拌乳化即得。解决了丁苯酞水溶性差，生物利用率低的问题。但同样，该专利将丁苯酞制备为注射剂，同样缺乏安全性且使用不便。
用于口服的专利有cn1031342151a(片剂)，cn1943571a(滴丸)，cn103830200a(包衣制剂)和cn103169685a(缓释制剂)，上述口服制剂和软胶囊一样，存在老年患者吞服苦难的问题。
文献1(“丁苯酞-羟丙基-β-环糊精包合物的制备与表征”，哈婧等，《河北科技大学学报》，2011年，第32卷第6期，617-622)利用冷冻干燥法制备了丁苯酞和羟丙基β环糊精的包合物，对丁苯酞增溶明显。但根据文献报道，羟丙基倍他环糊精(hp-β-cd)具有一定的肾毒性，在30天的200mg/kg腹腔给药和54mg/kg的静脉注射试验中，大鼠表现出明显的肾毒性，可能是因为hp-β-cd和血液中胆固醇形成稳定复合物导致胆固醇/酯在膀胱和肾盂中聚集，或者和hp-β-cd制备工艺中的杂质有关。因此，以hp-β-cd作为包合物和丁苯酞的药物剂型对肾功能衰退的患者不适用。
文献2(“丁苯酞-磺丁基-β-环糊精包合物的制备与表征”，赵孝先等，《中国现代应用药学》，2016年6月第33卷第6期，762-767)公开了一种采用冷冻干燥丁苯酞-磺丁基-β-环糊精包合物，相比于hp-β-cd作为包合物，具有肾毒性小，水溶性好，溶血作用小的优点，并且具有更好的包合能力。但是该方法没有针对用于口服的冻干粉如何增强生物利用率和稳定性进行研究。
发明人在前的专利申请中研究了特定的冷冻干燥工艺条件对于丁苯酞冻干粉的生物利用度进行了研究，发现在冷冻干燥的真空干燥工艺时，将真空干燥分为三个温度段，即低温段，中温段和高温段；低温段温度范围为-20℃至-30℃，低温段停留时间10-30h；所述中温段温度范围为0±5℃，从低温段升温至中温段所用时间3-5h；高温段温度范围为35-45℃。将真空干燥时的温度范围和停留时间控制在上述范围内，得到的丁苯酞冻干粉更加疏松，产品均一稳定，生物利用度高。但经过研究发现，制得的冻干粉剂稳定性还有待加强。
现有技术中有通过内酯对环糊精＝进行改性的文献报道，cn107028913a一种聚己内酯-环糊精给药纳米粒的制备方法，是以ε-己内酯通过开环聚合和β-环糊精反应后得到的星型聚酯，明显改善了姜黄素在水中的溶解度，并具有缓控释放的特性。但是该文献并不涉及药物稳定性的问题。发明人也以ε-己内酯对磺丁基倍他环糊精进行过表面改性，发现效果不佳。
cn110590973a公开了一种环糊精衍生物，具体是环糊精和(r)-β-甲基-γ丁内酯反应。在该专利的反应条件内酯无法开环聚合，只能得到表面丁酸接枝的环糊精衍生物。
因此，开发一类安全性高、生物利用率好，稳定性良好，便于患者服用的口服丁苯酞冻干粉剂具有很高的市场价值和研究意义。
技术实现要素：
为克服现有技术中丁苯酞的药物制剂稳定性、安全性、生物利用率、使用便利性还有待提高，本发明通过磺丁基倍他环糊精钠作为辅料，对油状丁苯酞进行包合，再经过特定的冻干曲线，得到了api溶解度高，生物利用率高、安全可靠、质量稳定的口服冻干粉。
本发明的技术方案通过以下技术方案实现：
一种稳定性改善的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，通过包括以下原辅料用冷冻干燥法制备得到：丁苯酞，4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠；所述4-甲基丁内酯改性磺丁基倍他环糊精钠具有如下的结构简式：
其中
环糊精是一大类要药用辅料，经常用于包合不溶性的药物以改善药物制剂的溶解性能。发明人经过大量实验研究发现，采用磺丁基倍他环糊精钠(sbe-β-cd-na)对丁苯酞进行包合，其安全性好、包合率高，能够复配制备为性能优异的口服冻干粉。磺丁基倍他环糊精钠是阴离子型高水溶性环糊精衍生物，能够很好的与丁苯酞包合形成非共价复合物，提高药物稳定性、水溶性、安全性、降低肾毒性、缓和药物溶血性、控制药物释放速率的优点；但是发现得到的口服冻干粉稳定性还有所欠缺，特别是在较高湿度环境下放置一段时间后，有效成分丁苯酞的纯度有所下降，而且小鼠的动物学实验表明较高湿度环境下放置一段时间后，再对小鼠灌胃给药，生物利用度有所下降。磺丁基倍他环糊精钠还有一些表面的羟基没有反应，特别是6位的伯羟基，反应活性比2位和3位的仲羟基反应活性高，方便进行醚化、酯化、氧化、交联等化学改性方式。发明人预料不到地发现使用4-甲基丁内酯(γ-戊内酯)对磺丁基倍他环糊精钠进行改性后，再对丁苯酞包合，冷冻干燥所得的冻干粉，稳定性有明显的提升。而申请人同样以γ-丁内酯，β-丁内酯，δ-戊内酯，ε-己内酯对磺丁基倍他环糊精钠进行改性，但是丁苯酞冻干粉的稳定性并没有明显提升。
现有技术中采用内酯开环聚合对环糊精进行改性有报道，比如.
文献1j.am.chem.soc.2004,126,42,13588–13589；
文献2phys.chem.b2016,120,29,7174–7181；
文献3macromolecules2007,40,9,3154–3158；
文献4polymerchemistry2012,3,1119-1122.
未发现有文献报道4-甲基丁内酯改性后的磺丁基倍他环糊精对药物除了增溶，能够起改善稳定作用。
虽然原因未明，但申请人意外地发现磺丁基倍他环糊精钠表面羟基引发4-甲基-丁内酯开环聚合后得到的改性磺丁基倍他环糊精钠，和丁苯酞一起制备为包合物，虽然包封率、增溶倍数有少许下降，但是稳定性得到了明显改善，这对于实际药物的生产，贮存，使用具有极大的优势，因此虽然包封率、增溶倍数性能有所下降，但仍在令人满意的程度，而同时稳定性得到大幅提升，更有利于此类药物的开发和临床的使用。
发明人发现，直接以β-环糊精作为反应底物和内酯较难得到内酯开环聚合物的改性产物。原因可能是一方面β-环糊精的溶解度不够，还有一方面原因是β-环糊精羟基之间的氢键作用力很强，阻止了催化剂和羟基的配位，进而无法通过羟基引发内酯的开环聚合。而磺丁基倍他环糊精的部分羟基已经被反应，剩余一定数量的伯羟基可以进行表面改性，同时磺丁基倍他环糊精的溶解性良好，作为反应底物和内酯在较温和的条件下发生开环聚合的反应得到改性的环糊精。
所述4-甲基-丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠通过包括以下步骤的制备方法得到：氩气气氛下，将磺丁基倍他环糊精钠，4-甲基丁内酯，引发剂投入到有机溶剂中混匀，回流条件下反应，冷却后反应液倾入冰乙醚中，析出沉淀，重结晶，最终得到4-甲基-丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠，为白色结晶。
所述有机溶剂沸点高于反应温度，比如dmf，甲苯等。有机溶剂使用前用作无水处理，比如使用氢化钠。
进一步地，所述加热回流反应在100-120℃反应24-48h，重结晶是用水溶解后，投入到无水乙醇和/或丙酮中进行重结晶。
进一步地，所述引发剂选自有机锡化合物，比如辛酸亚锡，二月桂酸二丁基锡，二月桂酸二辛基锡。
进一步地，磺丁基倍他环糊精钠，4-甲基丁内酯，引发剂的物质的量比为1：15-30：0.001-0.01。
优选地，所述4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠的分子量为2500-5000。
优选地，所述丁苯酞口服冻干粉包括以下质量份的原辅料：20-30份丁苯酞，600-1100份4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。
进一步地，所述丁苯酞口服冻干粉还包括以下质量份的辅料：5000-6000份注射用水，0.1-20份矫味剂。
所述矫味剂选自三氯蔗糖、阿斯巴甜、木糖醇、山梨醇、柠檬酸、乙基麦芽酚、葡萄香精中的至少一种。
本发明还提供了所述稳定性改善的丁苯酞口服冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
将丁苯酞，4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠加入到部分灭菌注射用水中，可选地，还加入矫味剂，搅拌，加入剩余灭菌注射用水至全量，继续搅拌，滤芯过滤，进行冷冻干燥即得。
优选地，原辅料所加入的灭菌注射用水占全部灭菌注射用水的50-90％，更优选60-70％。
优选地，所述加热搅拌，加热温度是30-80℃，优选40-70℃；搅拌速度为200-400r/min，优选为300-350r/min；搅拌时间为1-5h。
所述冷冻干燥的工艺包括预冻和真空干燥，进行真空干燥时，分为低温段，中温段和高温段；所述低温段温度范围为-33℃至-25℃，低温段停留时间10-30h；所述中温段温度范围为0±5℃，从低温段升温至中温段所用时间3-5h；所述高温段温度范围为35-45℃。
优选地，所述冷冻干燥具有以下的冻干曲线：
预冻：1)，t0-t1，t1；2)，t1-t1，t2；
真空干燥：抽真空，使体系压力≤20pa，3)t1-t2，t3；4)t2-t2，t4；5)t2-t3，t5；6)t3-t4，t6；7)t4-t4，t7。
上述每个阶段的t代表温度，t为时间，表示在该区间温度的升温/降温所用时间或者在该温度下的维持时间。当区间温度不同时，即为升温/降温所用时间，当温度相同时，即在该温度下的维持时间；
其中t0为0-30℃；t1为-50℃至-40℃，t1为0.5-1h；t2为1-5h；t2为-33℃至-25℃，t3为1-2h；t4为10-30h；t3为0±5℃，t5为3-5h；t4为35℃至45℃，t6为0.5-1h；t7为3-5h。
优选地，t0为20±5℃，t1为-50℃至-45℃，t1为0.5-1h；t2为2-3h；t2为-31℃至-28℃，t3为1-2h；t4为20-25h；t3为0±2℃，t5为3-5h；t4为35℃至45℃，t6为0.5-1h；t7为3-5h。
进一步地，t1为-50℃至-40℃区间范围的任意温度，比如-40℃，-42℃，-45℃，-50℃；t1为0.5-1h之间的任意时间段，比如30min，40min，50min，60min；
t2为2-3h之间的任意时间段，比如2h，2.5h，3h；
t2为-33℃至-25℃区间范围的任意温度，比如-25℃，-28℃，-31℃，-33℃；t3为1-2h之间的任意时间段，比如1h，1.5h，2h；
t4为20-25h之间的任意时间段，比如20h，22h，25h；
t5为3-5h之间的任意时间段，比如3h，3.5h，4h，4.5h，5h；
t4为35℃至45℃区间范围的任意温度，比如35℃，37℃，40℃，45℃；t6为0.5-1h之间的任意时间段，比如30min，40min，50min，60min；
t7为3-5h之间的任意时间段，比如3h，3.5h，4h，4.5h，5h。
发明人对冷冻干燥的冻干曲线进行了细致的研究，优化冷冻干燥的工艺参数，保证得到了质量稳定均一的产品，更加疏松，提高了产品的复溶性，可以改善患者的依从性，同时提高生物利用度。发明人还预料不到地发现，在预冻结束，进行真空干燥时，要从-40℃至-50℃升高至35℃至45℃的温度进行加热真空干燥，分为了不同的三个阶段，即低温段，中温段和高温段。低温段是-25℃至-33℃的温度区间，在该温度区间停留时间较长，达到10-30h；优选地，低温段为-28℃至-31℃，在低温段停留时间20-25h，在该温度段缓慢升温能够充分使药剂有足够的时间进行分子内部的调整；之后是在中温段，从低温段温度区间到0℃附近，中温段升温缓慢，升温时间3-5h，这样使得最终所得冻干粉更加疏松，产品均一稳定，溶解速度快；最后是高温段35-45℃，该温度段主要是在相对较高温度下去除药剂中的残留水分，可以适当提高升温速率。
本发明还提供了所述丁苯酞口服冻干粉在制备治疗脑血管疾病药物中的用途。
由于现有的丁苯酞制剂主要为软胶囊或者注射剂，软胶囊服用苦难，特别是对于老年患者；注射剂不够安全，需要每日往返医院进行，存在使用便利上的不足，本发明研制的冻干口服制剂，符合“能口服就不注射”的用药原则，方便患者在家自行用药，节省去医院的时间和滴注的痛苦，可以提高患者用药依从性。
本发明提供的丁苯酞口服冻干粉解决了胶囊制剂和注射液的弊端，冻干粉复溶后为液体，更易于患者服用。此外，丁苯酞胶囊剂血浆达峰时间60-80min，本发明丁苯酞口服冻干粉复溶后，口服液达峰时间小于30min，服药后可以快速起效，对于抢救脑卒中病人具有重要的意义。同时本发明丁苯酞口服冻干粉具有很好的稳定性，将丁苯酞口服冻干粉平铺(2cm)在表面皿中,将表面皿置于稳定性试验箱(温度：25℃，湿度：40rh％)中存放10天，能够保持很好的丁苯酞纯度，溶解性和生物利用度。
具体实施方式
丁苯酞采购自苏州二业制药有限公司，磺丁基倍他环糊精钠采购自西安德立生物化工有限公司，平均取代度约为4.3。
真空冷冻干燥仪器为北京松源华兴科技有限公司，型号：lgj-20f。
包合率的测试是通过在229nm处测试其不同浓度吸光度，作出标准曲线。精密称量5mg各实施例制得冻干粉末，溶于乙醇水溶液(v/v＝1：1)，定容后在229nm处测试吸光度，根据标准曲线线性方程计算浓度，根据包合物中丁苯酞含量除以原料中加入丁苯酞的量计算包合率。
制备例1
在氮气气氛下，向含有无水处理的mdf溶剂的反应器投入磺丁基倍他环糊精钠、4-甲基丁内酯、辛酸亚锡；其中磺丁基倍他环糊精钠，4-甲基丁内酯、辛酸亚锡的摩尔比为1：20：0.005，升温至110℃，回流搅拌条件下反应24h，冷却至室温，反应液直接倾入冰乙醚中，析出沉淀，沉淀用水溶解，无水乙醇重结晶，重结晶2次，获得白色结晶，为产品4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。经过gpc分子量测试，重分子量约为3620，pdi＝1.31。
制备例2
其他条件和制备例1相同，区别在于磺丁基倍他环糊精钠、4-甲基丁内酯的摩尔比为1:15。经过gpc分子量测试，所得产物重均分子量约为2850，pdi＝1.28。
制备例3
其他条件和制备例1相同，区别在于磺丁基倍他环糊精钠、4-甲基丁内酯的摩尔比为1:30。经过gpc分子量测试，所得产物重均分子量约为4360，pdi＝1.33。
实施例1
准确称取25份丁苯酞，850份制备例1制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠，4份三氯蔗糖，在配液罐中加入4000份灭菌注射用水，控制搅拌速度300r/min，温度控制在50℃，搅拌时间2h，搅拌完成后停止加热，之后加入1500份灭菌注射用水，继续搅拌1h，津腾0.22μmpes滤器过滤，进行如下冻干曲线的冷冻干燥程序：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，25h；5)-28℃至0℃，4h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
具体冻干程序是：1)药液在25℃在40min内快速降温至-40℃；2)在-40℃下维持3h完成预冻；抽真空至5pa；3)1h从-40℃升温至-25℃；4)在-25℃下维持25h；5)4h从-25℃升温至0℃；6)在1h从0℃升温至40℃；7)在40℃维持4h，完成冷冻干燥程序，得到白色疏松块状物，即产品丁苯酞口服冻干粉。
对口服冻干粉进行标准检测，结果如下表1所示：
表1
实施例2
其他条件和实施例1相同，区别在于850份制备例1制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠替换为660份制备例2制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。
实施例3
其他条件和实施例1相同，区别在于850份制备例1制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠替换为1010份制备例3制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。
对比例1
其他条件和实施例1相同，区别在于850份制备例1制得的4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠替换为400份磺丁基倍他环糊精钠。
应用例1动物实验数据：
1、大鼠药代试验
1.1对wistar大鼠(鼠龄6～8周，体重180±20g，雌)，给予丁苯酞软胶囊剂(对照组)和实施例1-3(实验组1-3)，以及对比例(实验组4)分别得到的丁苯酞冻干粉剂，对于胶囊剂，具体是将胶囊破开，用植物油稀释到10mg/ml，按照动物体重折算后灌胃给药，给药剂量120mg/kg，n＝8；对于冻干粉剂，具体是用水将口服冻干粉稀释到10mg/ml，按照动物体重折算后灌胃给药，给药剂量120mg/kg，n＝8。
比较了胶囊剂和本发明口服冻干粉的药代动力学性能，wistar大鼠给予相同剂量(120mg/kg)上述后，其药代动力学数据如下表2所示：
表2
从表2数据可知，在药代动力学(pk)试验数据中，在相同给药剂量(120mg/kg)下，本发明的丁苯酞口服冻干粉的cmax，auc0-t，auc0-∞都比软胶囊剂高，说明本发明的口服冻干粉的生物利用度更高；tmax更低，说明丁苯酞口服冻干粉吸收速度更快，药物起效快；同时，冻干粉剂的t1/2也比对照组偏低，说明口服冻干粉更容易排出体外，不会在体内蓄积。此外，对照组即丁苯酞软胶囊剂的部分数据的标准偏差(sd)较大，有些甚至高于了平均值(mean)，说明数据的比较离散；也能反映出本发明得到的丁苯酞口服冻干粉质量更加稳定均一。从实施例1-3和对比例的比较可以看出，对磺丁基倍他环糊精钠上的羟基诱导引发进行4-甲基丁内酯开环聚合后，生物利用度有少许的下降，但仍保持了一个令人满意的程度，包合率和增溶倍数足够满足丁苯酞药物制成口服药剂的需要。
本发明还测试了4-甲基丁内酯对磺丁基倍他环糊精钠改性后，是否会对最终产品冻干粉剂的安全性产生影响，测试了实施例1-3得到的口服冻干粉剂对小鼠的急性毒性试验证实，以最大给药量5g/kg条件下经口灌胃，未见明显的毒性作用。给药后15天，对小鼠进行解剖，体表和脏器官未见明显异常。说明4-甲基丁内酯对磺丁基倍他环糊精钠的改性是安全的。
实施例4
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，20℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，10h；5)-28℃至0℃，4h；6)0℃至45℃，1h；7)45℃至45℃，4h。
实施例5
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，30h；5)-28℃至0℃，4h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例6
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，18℃至-40℃，40min；2)，-40℃至-40℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-40℃至-31℃，1h；4)-31℃至-31℃，25h；5)-31℃至0℃，4h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例7
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-25℃，1h；4)-25℃至-25℃，25h；5)-25℃至0℃，4h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例8
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-33℃，1h；4)-33℃至-33℃，25h；5)-33℃至0℃，4h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例9
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，20h；5)-28℃至0℃，2h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例10
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，25h；5)-28℃至0℃，1h；6)0℃至40℃，1h；7)40℃至40℃，4h。
实施例11
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，25h；5)-28℃至0℃，4h；6)0℃至45℃，1h；7)45℃至45℃，4h。
实施例12
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，25h；5)-28℃至0℃，4h；6)0℃至35℃，1h；7)35℃至35℃，4h。
实施例13
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-28℃，1h；4)-28℃至-28℃，25h；5)-28℃至40℃，4h；6)40℃至40℃，4h。
实施例14
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于冻干曲线为区别在于冷冻干燥的程序为：预冻：1)，25℃至-45℃，40min；2)，-45℃至-45℃，3h；真空干燥：抽真空至5pa左右，3)-45℃至-15℃，4h；4)-15℃至-15℃，25h；5)-15℃至40℃，3h；6)40℃至40℃，4h。
应用例2
将上述实施例所得冻干品按照应用例1中相同的条件进行wistar大鼠给予相同剂量(120mg/kg)其药代动力学数据，以及在恒温恒湿箱(25℃，40rh％)中存放10天，用hplc法测试丁苯酞峰面积相对于在进行恒温恒湿箱存放之前的峰面积保持率(以在在恒温恒湿箱中存放前的峰面积为100％)。结果如下表3所示：
表3
对冻干曲线的具体参数进行探究，从表3数据可以发现，和申请人之前以磺丁基倍他环糊精钠为包合物制备得到的丁苯酞冻干粉剂的小鼠药代动力学实验比较，冻干曲线的参数改变对改性以及以未改性的磺丁基倍他环糊精钠作为包合物的丁苯酞冻干粉剂的生物利用度的影响趋势是接近的。说明磺丁基倍他环糊精钠为包合物的丁苯酞冻干曲线工艺也适用于4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。4-甲基丁内酯改性后的磺丁基倍他环糊精钠作为包合物，制备得到的丁苯酞冻干粉剂，虽然生物利用度有所下降，但是从表3可以看出，稳定性得到了明显的改善，具体是本发明改性后的冻干粉剂在25℃，40rh％条件下贮存10天后，丁苯酞的含量基本没有下降，hplc峰面积保持率在97％左右；而对比例的磺丁基倍他环糊精为包合物的冻干粉剂在25℃，40rh％条件下贮存10天后，丁苯酞hplc峰面积保持率下降至93.2％。发明人预料不到地发现，内酯对磺丁基倍他环糊精改性，包合难容药物后稳定性得到了提升的效果，目前只在4-甲基丁内酯作为内酯的情况下发现，而对于其他内酯，比如γ-丁内酯，β-丁内酯，δ-戊内酯，ε-己内酯并没有发现明显的改善丁苯酞冻干粉剂的稳定性的现象。
应用例3
为进一步验证本发明4-甲基丁内酯改性后的磺丁基倍他环糊精钠丁苯酞包合物冻干粉剂稳定性是否对生物利用度有影响，还对优选实施例1-3和对比例1的丁苯酞冻干粉剂在25℃，40rh％恒温恒湿箱中存放10天后，进行大鼠的药代动力学实验，实验条件和操作同应用例1，结果如下表4所示：
表4
从表4数据可以看出，本发明提供的4-甲基丁内酯改性后的磺丁基倍他环糊精钠丁苯酞包合物冻干粉剂在25℃，40rh％条件下存放10天后，生物利用度下降幅度很小。而对比例的磺丁基倍他环糊精钠丁苯酞包合物冻干粉剂想相同条件下存放10天后，丁苯酞含量下降，生物利用度降低。说明本发明利用4-甲基丁内酯对磺丁基倍他环糊精改性以提高丁苯酞冻干粉剂的稳定性是成功的。
1.一种稳定性改善的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，通过包括以下原辅料用冷冻干燥法制备得到：丁苯酞，4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠；所述4-甲基丁内酯改性磺丁基倍他环糊精钠具有如下的结构简式：
其中
2.根据权利要求1所述的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，所述4-甲基-丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠通过包括以下步骤的制备方法得到：惰性气体或稀有气体气氛下，将磺丁基倍他环糊精钠，4-甲基丁内酯，引发剂投入到有机溶剂中混匀，回流条件下反应，冷却后反应液倾入冰乙醚中，析出沉淀，重结晶，最终得到4-甲基-丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠，为白色结晶。
3.根据权利要求2所述的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，所述加热回流反应在100-120℃反应24-48h；所述重结晶是用水溶解后，投入到无水乙醇和/或丙酮中进行重结晶；所述引发剂选自有机锡化合物，选自辛酸亚锡，二月桂酸二丁基锡，二月桂酸二辛基锡。
4.根据权利要求2所述的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，磺丁基倍他环糊精钠，4-甲基丁内酯，引发剂的物质的量比为1：15-30：0.001-0.01；和/或所述4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠的分子量为2500-5000。
5.根据权利要求1所述的丁苯酞口服冻干粉，其特征在于，所述丁苯酞口服冻干粉包括以下质量份的原辅料：20-30份丁苯酞，600-1100份4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠。
6.权利要求1-5任一项所述稳定性改善的丁苯酞口服冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
将丁苯酞，4-甲基丁内酯改性的磺丁基倍他环糊精钠加入到部分灭菌注射用水中，可选地，还加入矫味剂，搅拌，加入剩余灭菌注射用水至全量，继续搅拌，滤芯过滤，进行冷冻干燥即得。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述加热搅拌，加热温度是40-70℃；搅拌速度为300-350r/min；搅拌时间为1-5h。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的工艺包括预冻和真空干燥，进行真空干燥时，分为低温段，中温段和高温段；所述低温段温度范围为-33℃至-25℃，低温段停留时间10-30h；所述中温段温度范围为0±5℃，从低温段升温至中温段所用时间3-5h；所述高温段温度范围为35-45℃。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥具有以下的冻干曲线：
预冻：1)，t0-t1，t1；2)，t1-t1，t2；
真空干燥：抽真空，使体系压力≤20pa，3)t1-t2，t3；4)t2-t2，t4；5)t2-t3，t5；6)t3-t4，t6；7)t4-t4，t7；
其中t0为0-30℃；t1为-50℃至-40℃，t1为0.5-1h；t2为1-5h；t2为-33℃至-25℃，t3为1-2h；t4为10-30h；t3为0±5℃，t5为3-5h；t4为35℃至45℃，t6为0.5-1h；t7为3-5h。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，t0为20±5℃，t1为-50℃至-45℃，t1为0.5-1h；t2为2-3h；t2为-31℃至-28℃，t3为1-2h；t4为20-25h；t3为0±2℃，t5为3-5h；t4为35℃至45℃，t6为0.5-1h；t7为3-5h。
技术总结