本发明属于纳米材料技术领域，涉及一种可注射型法莫替丁纳米胶束的制备方法。
背景技术：
法莫替丁是h2受体拮抗剂，是一种噻唑的衍生物，除用于治疗消化性溃疡外，还适用于预防和治疗非甾体类消炎药引起的溃疡，防止危重患者发生应激性溃疡及出血、治疗卓-艾氏综合症、胃食管反流病等与酸相关性的疾病。
法莫替丁api为白色或略呈黄白色结晶，在水中几乎不溶，logp值为3.11400，无臭，味略苦。分子式为c8h15n7o2s3，分子量为337.445，化学名称为[1-氨基-3-[[[2-[(二氨基亚甲基)氨基]-4-噻唑基]-甲基]硫代]亚丙基]磺酰胺，结构式如附图1所示。
由于其溶解性差，在水中几乎不溶，对于其剂型的开发增加了难度，尤其在于注射剂。目前，已上市的法莫替丁注射液是用冰醋酸作为助溶剂，直接溶于水中，但其有关物质达到5％，且不能用过度杀灭法进行灭菌，不能保证产品无菌水平和产品质量。cn102225050b公开了一种包合法制备法莫替丁氯化钠注射液的方法，采用磺丁醚-β-环糊精为法莫替丁的包合剂，同时加入了大量冰醋酸，是法莫替丁的5-7倍重量份。包合工艺复杂，目前注射剂中采用环糊精的品种很少，静脉注射环糊精的不良反应为肾毒性和溶血性，同时有致畸和致癌性，因此该制剂安全性值得担忧。cn101972248b公开了一种注射用法莫替丁，含有l-天门冬氨酸，但该注射用粉针的无菌保证度低。cn101716136a公开了一种法莫替丁注射液的制备方法，辅料选用门冬氨酸和依地酸二钠。但依地酸二钠可引起恶心、头痛、尿急、血液凝固性降低等不良反应；静注过快时，可因血钙剧降致心脏停搏。cn100438871c公开了一种法莫替丁注射剂，含有酰胺和酸性物质，酰胺选自烟酰胺、异烟酰胺、尿素等，但目前未见有注射级的酰胺，同时在灭菌过程中，尿素等酰胺类物质本身易降解，因此该制剂安全性值得担忧。
在drugbank数据库中，2015年批准的2,000多种药物中，有14％的药物api，其预logp值大于4，显示出高疏水性。为了使得这些药物获得很好地可注射性，临床上已使用多种方法：①通过研磨或压力均质化将药物尺寸减小为亚微米颗粒。这种做法已成功地应用于口服药物。但是，可注射的api必须严格不含微生物污染，并且此类药物悬浮液通常含有太大的颗粒，无法进行无菌过滤，浮液往往会从溶液中沉降出来，从而可能导致剂量不可控。此外，注射非常大的颗粒具有栓塞的风险。②将疏水性药物与一系列增溶赋形剂一起溶解，包括cremophorel和tween-80在内的非离子表面活性剂已用于许多临床制剂中，但它们会改变药物的性能，并具有产生包括过敏性休克和神经毒性在内的副作用的风险。
技术实现要素：
为了解决疏水性药物临床制剂的问题，本发明通过将法莫替丁加入嵌段共聚物pluronicf127(f127)中，作为适用于输送各种疏水性货物的新型药物输送工具，通过降低温度来调节pluronic的临界胶束浓度，可以去除游离的表面活性剂，从而留下具有极高药物与赋形剂比率的浓缩药物冷冻胶束。
嵌段共聚物(另一类表面活性剂)的胶束已用于药物输送，一些pluronic(poloxamer，聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷的三嵌段共聚物)(peo-ppo-peo))，是批准用于药物的赋形剂。pluronics由于其高载药量和自组装性能从药物载体中脱颖而出。它易于购得，且聚(环氧乙烷)和聚(环氧丙烷)嵌段的长度和比例可以变化，因此可以很容易地改变表面活性剂的参数。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一般情况下，将药物溶解于dcm中，并添加至f127中，并搅拌直至有机溶剂蒸发。将蒸发后的溶液在低温(0℃、4℃或-10℃)下用锥形过滤装置进行离心过滤，直至保留浓缩液体积，以除去多余的表面活性剂。
优选：将100mg法莫替丁溶解于1mldcm中，并添加至10ml10％(w/v)f127中(含3mnacl)，并搅拌直至有机溶剂蒸发(通常3h)。将蒸发后的溶液在低温-12℃下用锥形过滤装置(100000da分子截留器)在3500g下进行离心过滤，直至保留～200μl浓缩液(或浓缩液体积不变)，以除去多余的表面活性剂，并重复洗涤程序三次。
本发明所述的可注射型法莫替丁纳米胶束制作工艺简单、产品稳定性高、安全性高。试验结果表明，该方法制备的可注射型法莫替丁，在20天的储存过程中没有发生尺寸的变化，说明该纳米胶束稳定性好。此外通过低温离心，可去除绝大部分的f127，从而留下纯净浓缩的法莫替丁纳米胶束，提高其安全性，避免了与其他可注射制剂相关的潜在风险。
下面就本发明的思路简要进行描述：
本品的api几乎不溶于水，现有的注射剂所使用的方法，具有安全性及稳定性上的潜在风险。介于此，发明人考虑，使用更为安全有效的赋形剂，既能解决法莫替丁api疏水性的问题，又能避免与其他可注射制剂相关的潜在风险。
首先考虑赋形剂的筛选，发明人列举了四种赋形剂：pluronic、tween，cremophor、tergitol和brij进行比较，看低温剥离技术是否是pluronic所特有的性质。
将3ml0.5mg/ml的近红外nir染料5,9,14,18,23,27,32,36-八丁氧基-2,3-萘酞菁(onc，sigma#412074)的二氯甲烷(dcm)溶液滴加到15ml10％(w/v)的各种表面活性剂溶液中，包括pluronicf127，cremophorel，tween80，tergitolnp40和brij97中。将溶液搅拌3小时，以3,500g离心10分钟，并将上清液在4℃下离心过滤75分钟。将水加回到浓缩物中，并在4℃下进行3次洗涤程序。在860nm处测量所得上清液的吸光度(染料的吸光度峰)，并且将数值乘以在吸光度测量期间使用的稀释倍数。
如附图2所示，当进行低温离心过滤时，只有pluronic可以自由除去表面活性剂，而保留浓缩药物。其他表面活性剂则不行，可能是因为它们无法诱导形成动态冷冻的胶束，或者因为它们不适合进行临界胶束浓度(cmc)转换以去除低温表面活性剂并增加药物浓度。
为了避免在去离子水中剥离表面活性剂时发生聚集，考虑在赋形剂中加入高渗盐水来改善胶束的稳定性。
将100mg法莫替丁溶解于1mldcm中，并分别添加至含0m、1m、2m和3m的10ml10％(w/v)f127中，并搅拌直至有机溶剂蒸发(通常3h)。将蒸发后的溶液在低温-12℃下用锥形过滤装置(100000da分子截留器)在3500g下进行离心过滤，直至保留～200μl浓缩液(或浓缩液体积不变)，以除去多余的表面活性剂，并重复洗涤程序三次。并使用hplc定量法莫替丁的浓度。
如附图3所示，添加3m氯化钠后，药物浓缩物能够在表面活性剂剥离后形成稳定的纳米颗粒。加入盐是为了避免在去离子水中剥离表面活性剂时发生聚集，尽管这是一种高浓度的盐，但是静脉内给药通常在给药前稀释药物浓缩物，可以将高渗盐水转换为生理水平。据推测，盐使溶液更具极性，从而使疏水性药物能够更稳定地分配到冷冻的胶束芯中。
附图说明
附图1为法莫替丁的结构式。
附图2为赋形剂的筛选。
附图3为高渗盐浓度的筛选。
附图4为f127的选择性剥离。
附图5为法莫替丁纳米胶束的粒径稳定性。
具体实施方式
通过下面给出的本发明的实施例，进一步阐述该纳米胶束的性能，但本发明并不受实施实例的限定。
实施例1
将100mg法莫替丁溶解在1mldcm中，并添加到10ml10％f127(w/v)中并搅拌直到有机溶剂蒸发。用水将溶液稀释至1000ml，并进行渗滤(sartoriusvivaflow#1501008vs)以去除未结合的f127，收集5份滤液(每份200ml)用于药物和f127定量。
如附图4所示，当溶液的温度降至-12℃，并且可以通过渗滤选择性地除去绝大多数f127，从而留下纯净和浓缩的药物胶束。
实施例2
为了评价制备完成的法莫替丁纳米胶束在去离子水中的粒径稳定性。检测时间为20天，每天吸取20μl的法莫替丁纳米胶束于1.5ml的离心管中，再用去离子水将其稀释至1ml，然后用纳米粒度及电位仪测定法莫替丁纳米胶束的水合粒径，每2天平行测定多次(n≥3)，记录得到的数据取平均值，即可做出法莫替丁纳米胶束的水合粒径稳定性结果。
由附图5可以看出法莫替丁纳米胶束在4℃储存20天后，检测到的纳米材料的水合粒径没有显着增加，表明制备的法莫替丁纳米胶束纳具有高结构稳定性并且在水性环境中分散性良好。
1.一种可注射型法莫替丁纳米胶束的制备，其特征是将药物溶解于dcm中，并添加至f127中，并搅拌直至有机溶剂蒸发，将蒸发后的溶液在低温（0℃、4℃或-10℃）下用锥形过滤装置进行离心过滤，直至保留浓缩液体积，以除去多余的表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的法莫替丁纳米胶束，其特征是将100mg法莫替丁溶解于1mldcm中，并添加至10ml10%（w/v）f127中（含3mnacl），并搅拌直至有机溶剂蒸发（通常3h），将蒸发后的溶液在低温-12℃下用锥形过滤装置（100000da分子截留器）在3500g下进行离心过滤，直至保留～200μl浓缩液（或浓缩液体积不变），以除去多余的表面活性剂，并重复洗涤程序三次。
3.根据权利要求1所述的法莫替丁纳米胶束，其特征是当溶液的温度降至-12℃，并且可以通过渗滤选择性地除去绝大多数f127，从而留下纯净和浓缩的药物胶束。
4.根据权利要求1所述的法莫替丁纳米胶束，其特征是在4℃储存20天后，检测到的纳米材料的水合粒径没有显着增加，表明制备的法莫替丁纳米胶束纳具有高结构稳定性并且在水性环境中分散性良好。
技术总结