本发明属于化妆品领域，具体涉及一种菠萝提取液组合物的美白应用。
背景技术：
：天然化妆品如今越来越受到人们的青睐。天然化妆品，除了配方成分天然以外，同时不添加香精、防腐剂等具有潜在刺激性成分。酶解作为一种广泛应用于食品、药品及化妆品领域的技术，可将大分子成分改造成小分子，并伴随多糖、多肽等其他活性物质产生。植物中含有的酶多种多样，有蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、酯酶等，利用植物中含有的酶可以将大分子蛋白质酶解成寡肽，将淀粉、纤维素酶解成寡糖，将脂肪酶解成甘油、脂肪酸。将这些产物应用在化妆品中，更有利于皮肤吸收功效成分，最终达到一定的功效。技术实现要素：因此，本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种菠萝提取液组合物的美白应用。为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有美白作用的产品中的应用，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、青稞、薏仁、银耳多糖和水；其中，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～10份，燕麦0.1～10份，青稞0.1～5份，薏仁0.1～5份，银耳多糖0.05～2份，水100份；优选地，菠萝0.5～5份，燕麦0.5～5份，青稞0.2～2份，薏仁0.2～2份，银耳多糖0.1～1.5份，水100份；更优选地，菠萝0.5～3份，燕麦0.5～2.5份，青稞0.5～1.5份，薏仁0.5～1.5份，银耳多糖0.2～1份，水100份。根据本发明第一方面的应用，其中，所述菠萝提取液组合物通过以下方法制备：(1)燕麦、青稞、薏仁粉碎过筛；(2)菠萝清洗、去皮、切块，与水混合后打浆得到菠萝预处理液；(3)将步骤(1)中所得燕麦、青稞、薏仁与水混合静置，得到混合预处理液；(4)将步骤(2)所得菠萝预处理液与步骤(3)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却过滤留上清液；(5)向步骤(4)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(1)中，所述燕麦、青稞、薏仁粉碎后过80目筛。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(2)中，菠萝与水的比例为1:0.1～20g/ml，优选为1:0.2～10g/ml，更优选为1:0.5～5g/ml，进一步优选为1:1g/ml。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(3)中，所述静置时间为12～60小时，优选为12～48小时，最优选为24小时。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(4)中，步骤(2)所得菠萝处理液和步骤(3)所得混合预处理液的加入比例为1:1～500g/ml，优选为1:5～200g/ml，更优选为1:10～100g/ml，进一步优选为1:20～50g/ml。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(4)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～75℃；所述加热时间为0.5～5小时，优选为0.5～4小时，更优选为1～3小时，进一步优选为1～2小时；和/或所述搅拌速率为100～800r/min，优选为100～500r/min，更优选为100～400r/min，进一步优选为200～300r/min。根据本发明第一方面的应用，其中，步骤(5)中，所述银耳多糖与步骤(4)所得上清液的比例为1:1～1000g/ml，优选为1:100～800g/ml；更优选为1:100～500g/ml，最优选为1:200～400g/ml；和/或所述均质时间为1～60分钟，优选为5～50分钟，更优选为5～30分钟，进一步优选为10～20分钟。根据本发明第一方面的应用，其中，所述方法还包括以下步骤：(6)对步骤(5)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；更优选地，所述加热灭菌温度为60～90℃，优选为70～80℃，最优选为75℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。根据本发明第一方面的应用，其中，所述具有美白作用的产品包括：所述菠萝提取液组合物；一种或多种选自植物的化妆品成份；优选地，所述化妆品成分选自以下一种或多种：橄榄油、松茸、青刺果油、甜菜碱、灵芝，红景天。本发明菠萝提取液组合物的制备方法包括以下步骤：(1)将青稞、薏仁进行物理破碎后备用，与燕麦、水混合打浆制备预处理液。室温静置24小时。(2)将菠萝与水混合打浆，加入(1)中，加热搅拌。过滤。加入银耳多糖，均质得所述面膜液。(3)100℃2h灭菌，无菌条件下灌装。步骤(1)中，所述燕麦和水的比例为1:1～500g/ml，优选为1:10～300g/ml，更优选为1:20～150g/ml，最优选为1:80g/ml；所述青稞和水的比例为1:1～400g/ml，优选为1:10～350g/ml，更优选为1:30～200g/ml，最优选为1:100g/ml；所述薏仁和水的比例为1:1～400g/ml，优选为1:20～300g/ml，更优选为1:50～200g/ml，最优选为1:100g/ml；步骤(2)中，所述菠萝提取液和(1)提取液的比例为1:1～200g/ml，优选为1:1～150g/ml，更优选为1:1～100g/ml，最优选为1:50g/ml；所述加热温度为1～150℃，优选为1～120℃，更优选为20～90℃，最优选为75℃；所述加热时间为0.1～4小时，优选为0.5～3小时，更优选为0.5～2小时，最优选为1小时所述搅拌速率为10～1000r/min，优选为10～800r/min，更优选为20～500r/min，最优选为300r/min。步骤(3)中，所述银耳多糖和提取液的比例为1:1～2000g/ml，优选为1:1～1000g/ml，更优选为1:1～800g/ml，最优选为1:400g/ml所述均质速度为1000～20000r/min，优选为2000～15000r/min，更优选为2500～10000r/min；最优为6000r/min；均质时间为1～60分钟，优选为1～40分钟，更优选为1～30分钟，最优选为20分钟。本发明的应用可以具有但不限于以下有益效果：本发明提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有美白作用的产品中的应用，经试验验证，本发明的菠萝提取液组合物对b16-f10酪氨酸酶活性具有抑制作用。附图说明以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：图1示出了实施例1中220nm样品1的hplc图谱。图2示出了实施例1中220nm样品2的hplc图谱。图3示出了实施例1中220nm空白组的hplc图谱。图4示出了试验例1中为菠萝提取液组合物作用于b16-f10后的酪氨酸酶活性。具体实施方式下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。以下实施例中使用的试剂和仪器如下：试剂：菠萝，购自自广东省湛江市红星农场；燕麦(炒制熟)购自张家口建军燕麦食品有限公司；青稞、薏仁购自北京同仁堂橄榄油购自云南誉成隆经贸有限公司；仪器：均质机，购自ika，型号：t25。b16细胞，黑色素细胞，购自中科院干细胞库；胰酶，裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司；t25，96孔板，6孔板，无菌pbs，购自康宁生命科学有限公司；酪氨酸酶、左旋多巴，购自，sigma；胎牛血清购自浙江天杭生物科技股份有限公司，货号13011-8611；仪器：酶联免疫检测仪，购自thermofisherscientificoy、型号1510-00662c。实施例1本实施例用于说明本发明对菠萝酶液的选择。本实验探究了菠萝作为酶液，燕麦、青稞与薏仁作为底物时，不同品种菠萝所得酶液对产物多肽分子量的影响。实验方法为以下步骤：(1)将不同品种的菠萝清洗去皮切块后与水按照1:1的质量比混合打浆，制得菠萝酶液1为样品1、菠萝酶液2为样品2。其中样品1为巴里菠萝、样品2为金钻凤梨。(2)将燕麦进行物理粉碎与水按照质量比1:25混合(3)预处理液(2)中按照酶液:底物＝1:50的质量比加入(1)。所得的混合液编号分别为样品1、样品2，其中空白组为不加入菠萝酶液的预处理液(2)。(4)将(3)中的混合液于35度保温1小时，后置于95度水浴0.5小时使酶灭活。(5)将(4)中的混合液于5000r/min离心20分钟得到上清液。(6)利用高效液相色谱法对上清液的多肽分子量进行测定。(7)具体测定方法如下：(1)色谱条件色谱柱：tskgel2000swxl300mm×7.8mm流动相：0.05mol/l磷酸盐缓冲液(ph7) 0.3mol/lnacl检测波长：uv220nm流速：1ml/min柱温：25℃样品制备：以流动相为溶剂配制浓度为5mg/ml的样品，再在用微孔膜(0.45μm)过滤后供进样。标准样品：将牛血清蛋白(mr67000)、b12(mr1335)、氧化型谷胱甘肽(mr614)配成混标，每中物质含量均为5mg/ml。(2)标准曲线的测定将三种标准样品按5mg/ml配制，按照上述色谱条件制作标准曲线，采用最小二乘法，求出直线的回归方程为：y＝-0.3913x 7.4563，其回归系数r2＝0.9982由方程的回归系数r2＝0.9982可知，混合标样的标准曲线线性关系较好，可以提高计算的精确程度。关系式中x代表洗脱时间，y代表分子量对数。这样当面膜样品进行hplc分析时，即可通过洗脱图谱中每种物质洗脱峰的出现时间计算其对应的分子量。(3)分子量测定结果图1至图3分别示出了实施例1中样品1、样品2和空白组的hplc图谱。样品1、样品2和空白组的出峰时间、面积和分子量如下表1所示。表1样品1、样品2和空白组的出峰时间、面积和分子量实验结果与讨论：空白组样品中，分子量为262946.30da的多肽含量为6.14％，分子量为69342.58da多肽含量为71.11％，分子量为2266.84da的多肽含量为6.95％，分子量为1661.12da的多肽含量为81.29％，分子量为142.01da的多肽含量为11.76％；样品1中，分子量为1357.09da的多肽含量为40.55％，分子量为962.50da的多肽含量为43.80％，分子量为145.33da的多肽含量为15.65％；样品2，分子量为1495.12da的多肽含量为88.49％，分子量为148.08da的多肽含量为11.51％。结果表明，与空白组相比，加入菠萝酶液所得的上清液中，分子量为1600da以下的多肽占比增加，尤其在样品1中，在菠萝中蛋白酶的作用下，分子量在1000以下的多肽含量为59.45％。由此说明，菠萝蛋白酶能够降解燕麦中的高分子量的多肽成为较低分子量多肽，并且对比样品1、样品2的多肽分子量分布结果，最终选定后续实验中选用制备样品1所用的菠萝制备酶液。实施例2本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。1.原料处理(食品级)燕麦、青稞、薏仁：将燕麦、青稞、薏仁粉碎后过80目备用。菠萝：清洗、去皮、切块。1:1(g/ml)与水混合后打浆制得菠萝预处理液备用。2.面膜液制备(1)燕麦、青稞、薏仁和水添加比例如表1，混合后室温静置24小时。表2混合预处理液的添加比例原料质量份数水100燕麦2青稞1.25薏仁1.25(2)菠萝预处理液与步骤(1)所得混合预处理液按照质量比1：20(g/ml)混合，40℃加热2小时，300rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤除去杂质，留上清液(不透明)。(3)加入质量比为1：200(g/ml)银耳多糖，均质机均质20分钟，得到菠萝提取液组合物。3、灭菌处理将菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。75℃灭菌2小时。实施例3本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。1.原料处理(食品级)燕麦、青稞、薏仁：将燕麦、青稞、薏仁粉碎后过80目备用。菠萝：清洗、去皮、切块。1:1(g/ml)与水混合后打浆制得菠萝预处理液备用。2.面膜液制备(1)燕麦、青稞、薏仁和水添加比例如表2，混合后室温静置24小时。表3混合预处理液的添加比例原料质量份数水100燕麦1青稞0.5薏仁0.5(2)菠萝预处理液与步骤(1)所得混合预处理液按照质量比1：50(g/ml)混合，75℃加热1小时，200rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤除去杂质，留上清液(不透明)。(3)加入质量比为1：400(g/ml)银耳多糖，均质机均质10分钟，得到菠萝提取液组合物。3、灭菌处理将菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。75℃灭菌2小时。试验例1本试验例用于说明实施例2中菠萝提取液组合物(菠萝1)对作用于b16-f10的酪氨酸酶活性。将b16-f10黑素瘤细胞进行铺6孔板，细胞数量为5x104个，过夜培养。弃掉旧培养基，更换新鲜不含血清的培养基，加入1μm的α-msh进行刺激，建立细胞模型，同时加入菠萝提取液组合物(菠萝1)为1.25％，作用48小时后进行检测。阳性对照选择浓度为100μg/ml的曲酸。结果如图4所示。图4为菠萝提取液组合物作用于b16-f10黑素瘤细胞后的酪氨酸酶活性，α-msh为模型组，曲酸为阳性对照，菠萝1为菠萝提取液组合物，经过统计学差异分析可以得到菠萝1样品，p<0.05，具有显著性。表4示了试验例1中为菠萝提取液组合物作用于b16-f10后的酪氨酸酶活性显著性差异分析，模型组与空白组有显著的统计学差异，模型建立成功，菠萝提取液组合物对模型组酪氨酸酶有降低的作用。表4菠萝提取液组合物作用于b16-f10后的酪氨酸酶活性显著性差异分析空白组α-msh曲酸菠萝1平均值63.8728175110057.8391819588.45995329误差3.5632265193.3864183592.3277851386.308142069尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。当前第1页1 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技术特征：1.一种菠萝提取液组合物在制备具有美白作用的产品中的应用，其特征在于，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、青稞、薏仁、银耳多糖和水；
其中，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～10份，燕麦0.1～10份，青稞0.1～5份，薏仁0.1～5份，银耳多糖0.05～2份，水100份；
优选地，菠萝0.5～5份，燕麦0.5～5份，青稞0.2～2份，薏仁0.2～2份，银耳多糖0.1～1.5份，水100份；
更优选地，菠萝0.5～3份，燕麦0.5～2.5份，青稞0.5～1.5份，薏仁0.5～1.5份，银耳多糖0.2～1份，水100份。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述菠萝提取液组合物通过以下方法制备：
(1)燕麦、青稞、薏仁粉碎过筛；
(2)菠萝清洗、去皮、切块，与水混合后打浆得到菠萝预处理液；
(3)将步骤(1)中所得燕麦、青稞、薏仁与水混合静置，得到混合预处理液；
(4)将步骤(2)所得菠萝预处理液与步骤(3)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却过滤留上清液；
(5)向步骤(4)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述燕麦、青稞、薏仁粉碎后过80目筛。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，菠萝与水的比例为1:0.1～20g/ml，优选为1:0.2～10g/ml，更优选为1:0.5～5g/ml，进一步优选为1:1g/ml。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述静置时间为12～60小时，优选为12～48小时，最优选为24小时。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，步骤(2)所得菠萝处理液和步骤(3)所得混合预处理液的加入比例为1:1～500g/ml，优选为1:5～200g/ml，更优选为1:10～100g/ml，进一步优选为1:20～50g/ml。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～75℃；
所述加热时间为0.5～5小时，优选为0.5～4小时，更优选为1～3小时，进一步优选为1～2小时；和/或
所述搅拌速率为100～800r/min，优选为100～500r/min，更优选为100～400r/min，进一步优选为200～300r/min。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的应用，其特征在于，步骤(5)中，所述银耳多糖与步骤(4)所得上清液的比例为1:1～1000g/ml，优选为1:100～800g/ml；更优选为1:100～500g/ml，最优选为1:200～400g/ml；和/或
所述均质时间为1～60分钟，优选为5～50分钟，更优选为5～30分钟，进一步优选为10～20分钟。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的应用，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(6)对步骤(5)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；
优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；
更优选地，所述加热灭菌温度为60～90℃，优选为70～80℃，最优选为75℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的应用，其特征在于，所述具有美白作用的产品包括：
所述菠萝提取液组合物；和/或
一种或多种选自植物的化妆品成份；
优选地，所述化妆品成分选自以下一种或多种：橄榄油、松茸、青刺果油、甜菜碱、灵芝，红景天。
技术总结本发明提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有美白作用的产品中的应用，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、青稞、薏仁、银耳多糖和水。经试验验证，本发明的菠萝提取液组合物作用于B16‑F10黑素瘤细胞后对酪氨酸酶活性具有抑制作用。
技术研发人员：鹿发展;邵雪;王昌涛;吴迪;高思宇;安全
受保护的技术使用者：云南白药集团股份有限公司;北轻家化(黄山)科技有限公司
技术研发日：2021.04.16
技术公布日：2021.08.03
