本发明涉及皮肤状态改善用化妆品组合物、上述化妆品组合物的制备方法以及利用上述化妆品组合物的皮肤状态改善，上述化妆品组合物包含通过生物共聚物封装并稳定对皮肤有益的芍药提取有效物质的微(1μm至1000μm)胶囊颗粒，并具有以该微胶囊颗粒为中心以基质形式包围的纤维状蛋白形式。
背景技术：
人体皮肤不断变化，其中最代表性的变化是由于衰老导致的皮肤功能下降和视觉美感下降。皮肤衰老大致分为因遗传因素引起的内部衰老和因日光等外部环境因素引起的外部衰老。这种外部衰老会在皮肤上形成皱纹，形成皱纹的代表性因素可以例举活性氧、紫外线和胶原蛋白的生物合成减少等。
在皮肤内部衰老的情况下，无法进行人工调节，但在外部衰老的情况下，可以通过去除活性氧、成纤维细胞的增殖以及促进胶原蛋白的生物合成等方式来预防、治疗或延缓衰老。
热休克蛋白(heatshockprotein；以下，hsp)为当细胞、组织或个体暴露在高于生理温度的温度时合成的蛋白质。它以附加分子量的1000单位数字来标记，例如，hsp60、hsp70、hsp90等，其特性随分子量而变化。作为分子伴侣，hsp与不占完整立体结构的蛋白质结合来起到防止其分子间缔合的形成，同时促进再生的作用。因此，hsp大量积累的细胞对高温具有抵抗性。这些hsp的分子伴侣功能也用于正常的细胞，并与合成之后的未成熟蛋白质结合来在蛋白质的高级结构的形成、细胞内运输、细胞小器官的膜渗透等中起到重要作用。因此，为了使在高温或其他应激条件下无法存活的正常状态细胞存活，代表性的hsp也是必不可少的。hsp的另一个重要功能是它可以降解变性的蛋白质。虽然泛素也是代表性的hsp，但它与变性蛋白质共价结合来用作通过蛋白酶体(proteasome)降解的指标。
hsp可以执行抗氧化功能。它起到氧化还原传感器(redoxsensor)的作用，检测并激活氧化应激，起到防止细胞内主要蛋白质受损的作用，并抑制由于活性氧种引起的蛋白质的变性，膜脂质的氧化等而引起的细胞坏死。
hsp可以执行防衰老功能。对于构成皮肤角质层的角质形成细胞，其可以保护细胞免受紫外线等的应激，恢复细胞功能，具有优异的皮肤细胞抗衰老功能，提高再生能力，提高皮肤免疫力，防止色素沉着以及帮助保持健康的皮肤和皮肤组织，并诱导伤口及受损皮肤的再生。它是使衰老皮肤健康和焕然一新的必要生长因子。
芍药(paeonialactiflora)生长在山区。一株植物中长出几根茎并直立，高约60cm，叶子和茎没有毛。根有数个，但很细，两个末端长且呈两端尖尖的粗的圆柱形状。叶子是互生的，最下面的是复合叶子，其中三个小叶子长出两次。小叶呈披针形或椭圆形，但有时分成2至3片，并且叶脉和叶柄是红色的。上部的叶子形状简单，是每片有3小叶的叶子或单叶。叶表面光滑，背面浅绿色，边缘平坦。从五月到六月，一朵花盛开在茎的末端，大而美丽，栽培时一朵花直径约10cm。花的颜色多种多样，例如红色、白色等，并且有许多园艺品种。花萼有5个，绿色，平坦的边缘，一直附着到末端，最外面的一个呈叶形。大约有10个花瓣，但基本种类的花瓣是8到13个，具有类似于倒置蛋的形状，长约5cm。雄蕊很多，黄色，雌蕊有3到5个，雌蕊头向后倾斜，蛋形子房毛很少或没有毛。果实为蛋形，尖端弯曲成钩形，沿内杆线分开，种子为球形。花很漂亮，可以用来园艺。根用作缓解疼痛、腹痛、月经痛、闭经、咯血、贫血和跌打损伤的药材。在中国，早在晋代和明代就已经栽培芍药来用于观赏目的，其栽培历史比牡丹还古老。经过宋代，在清朝时期已经记录有数十品种。它分布在韩国、蒙古和西伯利亚东部。
芍药提取物是以芍药苷(paeoniflorin)作为主要成分的具有蒎烷(pinane)结构的单萜(monoterpene)糖苷。芍药经干燥加工后作为中药剂来流通，韩国芍药种植农户采用的传统干燥方法是粉碎后自然干燥的方法，但由于干燥需要很长时间，因而进行火力干燥(煤炭干燥或热风干燥)。在中国和日本，还利用蒸发干燥法。自然干燥用于保持原来的颜色、气味等，且有利于保持有效成分。
在水或水和醇类混合液剂中以高达90％以上的产率提取芍药苷，而在纯醇类中不易提取芍药苷。
已知芍药苷为较稳定的化合物，因此，在芍药的有效成分的提取及加工过程中，与因热处理而破坏或丢失芍药苷有关的报道很少。但是，由于在提取后，随时间的经过、温度变化以及光照射而引起结块或析出的问题，因此在适用于化妆品、食品等产品时存在稳定性方面的问题。
微胶囊(emulsion)是通过表面活性剂稳定的水相-油相混合状态，上述表面活性剂降低具有亲水性(hydrophilic)和亲油性(hydrophobic)的双层相(phase)的能量。微胶囊通常在油/水相中呈球形，并且在没有外部能量供应的情况下稳定地存在数小时至数天。微胶囊也是通常用于获得以不同溶解率溶解(solubilization)于油相或水相的物质的高溶解率的方法。
为此，以往基本上使用多元醇类作为表面活性剂，上述多元醇包括甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、聚乙二醇等物质。但是，这些属于简单的表面活性剂，因而其缺点是很难以物质的高溶解度的目的来使用。
甘油丙烯酸酯/丙烯酸共聚物具有很高的亲水性，其分子量大于1.67e-18g(100万道尔顿)，并且通常包括被甘油部分酯化(典型地，约50％被酯化)的聚丙烯酸骨架。甘油丙烯酸酯/丙烯酸共聚物形成保水的包合物(clathrate)，其被视为在释放时为皮肤提供润滑性及保湿性。
技术实现要素：
本发明涉及皮肤状态改善用化妆品组合物，上述化妆品组合物的制备方法及利用上述化妆品组合物的皮肤状态改善，上述化妆品组合物包含通过生物共聚物封装并稳定对皮肤有益的芍药提取有效物质的微(1μm至1000μm)胶囊颗粒，并具有以该微胶囊颗粒为中心以基质形式包围的纤维状蛋白形式。
为了解决上述问题，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，其包含：微胶囊，由内含有效成分的生物共聚物、碱性氨基酸及聚甘油酯组成；以及纤维状蛋白，用于稳定上述微胶囊。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述微胶囊的尺寸为2微米以下。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述生物共聚物为选自由丙烯酸酯/丙烯酸共聚物、丙烯酸酯/二甲硅油共聚物、丙烯酸酯/硬脂醇聚醚-20甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/辛基丙烯酰胺共聚物、丙烯酸酯/棕榈油醇聚醚-25丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯共聚物、丙烯酸/丙烯腈共聚物、丙烯酰胺/丙烯酸钠共聚物以及丙烯酰胺/丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物组成的组中的一种以上。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述碱性氨基酸为选自由赖氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)及组氨酸(histidine)组成的组中的一种以上。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述有效成分包含芍药苷(paeoniflorin)或其化妆品学上可接受的盐。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述聚甘油酯为选自由聚甘油硬脂酸酯、聚甘油肉豆蔻酸酯、聚甘油月桂酸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、聚甘油二硬脂酸酯及聚甘油三硬脂酸酯组成的组中的一种以上。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述纤维状蛋白为选自由卵磷脂及明胶组成的组中的一种以上。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物的制备方法，包括：通过加热并溶解生物共聚物、碱性氨基酸及有效成分来制备均匀混合液的步骤；在上述步骤中加入聚甘油酯之后进行冷却并高速搅拌来制备微胶囊的步骤；以及在上述步骤中加入纤维状蛋白之后通过搅拌来稳定微胶囊的步骤。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物的制备方法，生物共聚物和碱性氨基酸的重量比为1：1。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物的制备方法，生物共聚物和聚甘油酯的重量比为1：5。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物的制备方法，生物共聚物和纤维状蛋白的重量比为1：1。
并且，本发明的解决问题的手段在于，提供一种皮肤状态改善用化妆品组合物，上述皮肤状态改善为皮肤皱纹改善、皮肤再生、皮肤弹性改善、抑制皮肤衰老、皮肤伤口再生、痤疮改善或皮肤美白。
本发明涉及皮肤状态改善用化妆品组合物，上述化妆品组合物的制备方法以及利用上述化妆品组合物的皮肤状态改善，上述化妆品组合物包含通过生物共聚物封装并稳定对皮肤有益的芍药提取有效物质的微(1μm至1000μm)胶囊颗粒，并具有以该微胶囊颗粒为中心以基质形式包围的纤维状蛋白形式。
以下，将更详细地描述本发明。
本发明涉及具有以基质形式包围微胶囊的形式的化妆品组合物，其包含：微胶囊颗粒，通过生物共聚物封装芍药提取有效物质；以及纤维状蛋白，用于防止上述微胶囊颗粒的相互凝集，以能够在化妆品组合物中长期保持稳定。
本发明的一例涉及包含芍药提取物作为有效成分的皮肤状态改善用化妆品组合物。
在本发明中，微胶囊可以由生物共聚物、聚甘油酯及碱性氨基酸形成。
在本发明中，生物共聚物可以是选自由丙烯酸酯/丙烯酸共聚物、丙烯酸酯/二甲硅油共聚物、丙烯酸酯/硬脂醇聚醚-20甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/辛基丙烯酰胺共聚物、丙烯酸酯/棕榈油醇聚醚-25丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯共聚物、丙烯酸/丙烯腈共聚物、丙烯酰胺/丙烯酸钠共聚物、丙烯酰胺/丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物、交联聚合物-2及聚乙烯醇组成的组中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，碱性氨基酸可以是选自赖氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)、组氨酸(histidine)中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，聚甘油酯可以是选自由聚甘油硬脂酸酯、聚甘油肉豆蔻酸酯、聚甘油月桂酸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、聚甘油二硬脂酸酯及聚甘油三硬脂酸酯组成的组中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，纤维状蛋白可以是选自胶原蛋白、明胶、卵磷脂中的一种以上，但不限于此。
本发明的结构可以由如下方式形成：将生物共聚物和碱性氨基酸混合体与有效成分混合来形成混合物，由聚甘油酯作为模板(template)混合形成微胶囊颗粒，并且为了稳定颗粒而依次投入的纤维状蛋白以基质形式包围胶囊颗粒。
在本发明中，模板是指用于诱导由自发或加热引发的聚合反应形式的表面活性剂的球形形态，并且是指聚合反应沿着表面活性剂的表面发生并使最终聚合形成球形的形式。
在本发明中，上述微胶囊的特征在于，具有在显微镜下观察的球形，其直径为1微米至1000微米(μm)。
在本发明中，相对于组合物的总重量，上述生物共聚物成分的含量可以为0.001重量百分比至5.0重量百分比、0.001重量百分比至4.0重量百分比、0.001重量百分比至3.0重量百分比、0.001重量百分比至2.0重量百分比、0.001重量百分比至1.0重量百分比、0.001重量百分比至0.1重量百分比，例如，可以包含0.08重量百分比的上述生物共聚物成分。
在本发明中，相对于组合物的总重量，上述碱性氨基酸成分的含量可以为0.001重量百分比至5.0重量百分比、0.001重量百分比至4.0重量百分比、0.001重量百分比至3.0重量百分比、0.001重量百分比至2.0重量百分比、0.001重量百分比至1.0重量百分比、0.001重量百分比至0.1重量百分比，例如，可以包含0.08重量百分比的上述碱性氨基酸成分。
在本发明中，相对于化妆品组合物的总重量，聚甘油酯的含量可以为0.001重量百分比至5.0重量百分比、0.001重量百分比至4.0重量百分比、0.001重量百分比至3.0重量百分比、0.001重量百分比至2.0重量百分比、0.001重量百分比至1.0重量百分比，例如，可以包含0.4重量百分比的聚甘油酯。
在本发明中，相对于生物共聚物1，上述生物共聚物和碱性氨基酸的重量比可以为0.01重量比至5.0重量比、0.01重量比至4.0重量比、0.01重量比至3.0重量比、0.01重量比至2.0重量比、0.01重量比至1.0重量比、0.01重量比至0.1重量比，例如，能够以1.0的重量比混合。
在本发明中，相对于生物共聚物1，上述生物共聚物和聚甘油酯的重量比可以为1重量比至10重量比、1重量比至7重量比、1重量比至5重量比、1重量比至2重量比，例如，能够以5的重量比混合。
在本发明中，术语“提取物”包括溶剂粗提取物、特定溶剂可溶提取物(溶剂分馏物)及溶剂粗提取物的溶剂分馏物，上述芍药提取物可以是溶液、浓缩物或粉末状态。
在本发明中，芍药可以使用选自由根、茎、叶及花组成的组中的一种以上，例如，可以使用芍药的花。
在本发明中，芍药提取物可以是通过选自由水及碳数1至4的直链或支链醇组成的组中的一种以上的溶剂提取而获得的粗提取物。
在本发明中，当使用水和醇的混合物作为制备芍药粗提取物时使用的溶剂时，其可以是10％以上至小于100％(v/v)、20％以上至小于100％(v/v)、30％以上至小于100％(v/v)、40％以上至小于100％(v/v)、50％以上至小于100％(v/v)、60％以上至小于100％(v/v)或70％以上至小于100％(v/v)的碳数1至4的直链或支链醇水溶液。
在本发明中，醇水溶液可以是选自由甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙醇水溶液及丁醇水溶液组成的组中的一种以上。
在本发明中，芍药提取物可以是使用另外的溶剂分馏溶剂粗提取物而获得的溶剂分馏物，例如，可以是使用选自乙醚、乙酸乙酯及丁醇组成的组中的一种以上的溶剂分馏溶剂粗提取物而获得的溶剂分馏物。
在具体的一方面中，本发明中的芍药提取物可以是使用选自由乙醚、乙酸乙酯及丁醇组成的组中的一种以上的溶剂，来对使用选自由水及碳数1至4的直链或支链醇组成的组中的一种以上的溶剂从芍药中提取的溶剂粗提取物进行分馏而获得的溶剂分馏物。
对本发明的芍药提取物的制备过程更详细的描述如下：
切割芍药并用水洗涤来去除排泄物并干燥之后，相对于上述芍药的重量，使用约5倍体积至20倍体积，优选7倍体积至15倍体积的提取溶剂进行回流提取。提取后，将其过滤并收集过滤液。提取温度没有特别限制，但可以是40℃至110℃，优选55℃至90℃。
提取工序可以进行1次或重复多次，在本发明的优选一例中，可以采用在一次提取后再提取的方法，这是为了防止如下情况：在大量生产生药提取物的情况下，由于生药本身的水分含量高，因此即使有效过滤，也会发生损失，因而通过一次提取会导致提取效率下降。并且，在对每个步骤的提取效率进行验证的结果，发现通过二次提取，提取了总提取量的约80％至90％。
在本发明的一例中，当提取工序重复两次时，再次使用约5倍体积至15倍体积，优选8倍体积至12倍体积的提取溶剂对上述获得的残余物进行回流提取。提取后将其过滤，然后与之前获得的过滤液合并，并进行减压浓缩来制备芍药提取物。如上所述，可以通过两次提取以及混合每次提取后获得的过滤液来提高提取效率，但本发明提取物不限于提取次数。
在本发明中，若用于制备芍药提取物的溶剂量太少，则难以搅拌，并且提取物的溶解度下降，从而导致提取效率下降，若太多，则在下一纯化步骤中使用的溶剂量会增加，因而并不经济，导致可能发生采用上的问题，因此溶剂的使用量优选为上述范围。
为了适合用作药品原料，对于如此获得的过滤的提取物浓缩物，使用浓缩物总量的约10倍至30倍、优选15倍至25倍、更优选约20重量倍的水进行1次至5次、优选2次至3次共沸浓缩，并再次添加相同量的水来进行均匀悬浮，然后冷冻干燥来制备成粉末状态的芍药提取物，以调节残留的低级醇的含量。
本发明中使用的提取方法可以是通常使用的所有方法，例如，可以是冷沉、热水提取，超声波提取或回流冷却提取方法，但不限于此。
在本发明中，芍药提取物可以包含90％以上的芍药苷(paeoniflorin)或其化妆品学上可接受的盐。
在本发明中，芍药苷(c23h28o11)是分子量为480的物质，由以下化学式1表示。
化学式1
在本发明中，芍药苷可以是化妆品学上可接受的盐的形式。
在本发明中，盐只要是化妆品学上可接受的盐就没有特别限制，例如，可以是盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸、甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸，但不限于此。
在本发明中，相对于生物共聚物1，上述生物共聚物和芍药苷的重量比可以是0.01重量比至5.0重量比、0.01重量比至4.0重量比、0.01重量比至3.0重量比、0.01重量比至2.0重量比、0.01重量比至1.0重量比、0.01重量比至0.1重量比，例如，能够以1.0的重量比混合。
在本发明中，皮肤状态改善用化妆品组合物可以进一步包含增稠剂。
在本发明中，增稠剂可以是选自由甘油、丁二醇及卡波姆组成的组中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，皮肤状态改善用化妆品组合物可以进一步包含保存剂。
在本发明中，保存剂可以是选自由1，2-己二醇及羟基苯乙酮组成的组中的一种以上，但不限于此。
在本发明中，术语“皮肤状态改善”可以是皮肤皱纹改善、皮肤再生、皮肤弹性改善、抑制皮肤衰老、皮肤伤口再生、痤疮改善或皮肤美白，但不限于此。
在本说明书中，术语“化妆品学有效量”是指足以实现上述本发明组合物的皮肤改善功效的量。
能够以本发明所属技术领域中通常制备的任何剂型制备本发明的化妆品组合物，例如，能够配制成溶液、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝凝胶、乳霜、乳液、粉、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳浊液粉底、蜡粉底及喷雾等，但不限于此。更加详细地，可以制备成柔软化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华液、眼霜、卸妆霜、卸妆泡沫、卸妆水、面膜、喷雾或粉剂型。
在本发明的剂型为糊剂，乳霜或凝胶的情况下，作为载体成分，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌等。
在本发明的剂型为粉或喷雾的情况下，作为载体成分，可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉，尤其是在喷雾的情况下，可以进一步包含推进剂，例如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。
在本发明的剂型为溶液或乳浊液的情况下，作为载体成分，可以使用溶剂、增溶剂或乳化剂，例如包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、甘油脂族酯、聚乙二醇或脱水山梨醇的脂肪酸酯。
在本发明的剂型为悬浮液的情况下，作为载体成分，可以使用液状稀释剂，例如水、乙醇或丙二醇；悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄芪胶等。
在本发明的剂型为含有表面活性剂的清洁剂的情况下，作为载体成分，可以使用脂肪族醇硫酸盐、脂肪族醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑啉鎓衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基氨基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化的甘油脂肪酸酯等。
本发明的皮肤状态改善用化妆品组合物中包含的成分除了有效成分之外，还包含化妆品组合物中常用的成分，例如，可以包含诸如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、颜料及香料之类的常规助剂。
本发明涉及皮肤状态改善用化妆品组合物，上述化妆品组合物的制备方法以及利用上述化妆品组合物的皮肤状态改善，上述化妆品组合物包含通过生物共聚物封装并稳定对皮肤有益的芍药提取有效物质的微(1μm至1000μm)胶囊颗粒，并具有以该微胶囊颗粒为中心以基质形式包围的纤维状蛋白形式。
附图说明
图1为示出根据本发明的一实施例制备的化妆品组合物的制备流程及结构的示意图。
图2为根据本发明的一实施例及比较例制备的微胶囊基质化妆品组合物的显微镜照片。
图3为示出根据本发明的一实施例测量hsp相关信号转导基因的表达水平的结果的曲线图。
图4为示出根据本发明的一实施例测量的不同含量的hsp蛋白的表达水平的结果的图。
图5为示出根据本发明的一实施例测量不同时间的hsp蛋白的表达水平的结果的图。
图6为示出根据本发明的一实施例在由hsp诱导引起的氧化应激下进行的细胞抵抗性增加确认实验的结果的曲线图。
图7为示出根据本发明的一实施例在由hsp诱导引起的氧化应激下进行的细胞抵抗性增加确认实验的结果的曲线图。
图8为描述根据本发明的一实施例制备的化妆品组合物的皮肤保护效果的示意图。
具体实施方式
以下，将通过以下实施例更详细地描述本发明。但是，这些实施例仅用于例示本发明，而本发明的范围不受这些实施例的限制。
制备例1.芍药提取物的制备及芍药苷的检测
将100g干燥芍药花瓣切成小块后，添加到10倍体积的水溶剂(1l)中混合，然后浸渍1小时。将上述混合物加热至100℃的同时在无支路回流装置中进行2小时的回流并提取，接着第二次进行1小时的提取。用纱布过滤器过滤提取的液相并去除了固相。提取后进行了真空干燥。确认到最终提取的固相为0.02g/l。在将最终提取的固相以1mg/ml溶解后，通过高效液相色谱法(hplc)进行了分析，结果，确认到所包含的芍药苷为0.93mg/ml。
制备例2.微胶囊基质组合物的制备
在图1中示出制备的皮肤状态改善用化妆品组合物的示意图。具体地，将丙烯酸酯/丙烯酸共聚物和精氨酸分别以0.08重量百分比均匀分散在纯净水的同时在50℃下溶解30分钟。在上述溶解液中以0.08重量百分比加入芍药提取物后在常温下搅拌30分钟。然后，以0.4重量百分比投入聚甘油油酸酯后，用均质器以2000rpm至8000rpm冷却至4℃的同时通过搅拌形成微胶囊。为了长时间防止上述的微胶囊的凝集以及稳定微胶囊，以0.09重量百分比投入透明质酸盐后在常温下以1000rpm以下的速度缓慢搅拌来形成基质。用实施例的化妆品组合物显微镜观察制备的化妆品组合物，结果示于图2中。在比较例1和比较例2的情况下，除了使用表1所示的组分之外，以与实施例相同的方法进行了制备。
从图1及图2中可以确认，其为由保护有效成分的微胶囊和使微胶囊稳定的基质组成的剂型。
表1
(重量百分比)
比较上述实施例1、比较例1及2的结果，在实施例1的剂型的情况下，在显微镜下观察到含有有效成分的明显的微胶囊。但是，在比较例1及比较例2的情况下，可以确认到未能形成微胶囊，并且以活性物质与其他成分凝结的形式分散存在。
实验例1.测量所形成的微胶囊基质的稳定性
为了测量上述微胶囊的稳定性，在加入透明质酸盐的组成(实施例1)中，由作为类似增稠剂的卵磷脂和明胶代替透明质酸盐来以相同的量添加后，以与实施例相同的方法制备，使用动态光散射(dls，dynamiclightscattering)装置测量8周的微胶囊颗粒的尺寸变化，并示于表2中。
表2
使用比较例3作为对照组，在比较例3的情况下，除了使用表1所示的组分之外，以与实施例相同的方法进行了制备。
实施例1的颗粒尺寸在制备后约1周时平均为1.21微米，误差范围为0.34微米。
从形成剂型后的1周开始分别在经过3周、6周及8周时测量了颗粒尺寸。当测量的颗粒为球形时，可通过计算电磁场引起的流量(k)值来测量尺寸，但是当测量的颗粒以无定型形式凝集时，未能显示测量值，因而检测为无法测量。变化率以初始值与8周内测量值的平均值之间的变化比的百分比(％)表示。
对照组中，在1周后未观察到微胶囊球体的形状，显示出完全不稳定的形态。
在用透明质酸盐稳定的情况下，尺寸在8周内几乎没有变化，而在卵磷脂或明胶的情况下，可以观察到形成微胶囊，但是微胶囊的尺寸在8周内显着增加，因而发生相互凝集的不稳定性。
实验例2.hsp相关信号转导基因表达水平(实时q-pcr)
在韩国细胞株银行中培养人皮肤角蛋白细胞(bscell)。为了培养细胞，对于向rpmi细胞培养基中添加10％胎牛血清(fbs，fetalbovineserum)及1％抗生素的培养基，在细胞培养皿的24-孔板(wellplate)中分别接种10000个细胞，并在37℃恒温箱中稳定24小时。
在第二天，以100ul单位用实施例1的试样进行接种，接种后搜索细胞的形状及相关基因的表达。具体地，将它们分别分为对照组(比较例1及2)和处理组(实施例)处理的组来进行。根据每组，每1ml培养基处理100ul的样品，并在37℃、5％co2条件下培养24小时来确认是否表达人hsp。
作为应激条件，每1ml培养基额外添加100um的h2o2100ul后培养相同时间。
为了确认是否表达人hsp(热休克蛋白，heatshockprotein；以下，hsp)，进行了hsp40、90、70及27基因的实时基因扩增表达测试。具体地，在制备每个基因的引物后，基于此，应用taq聚合酶激活剂(taqpolymeraseactivit)扩增基因至最大49循环的同时，实时确认基因表达率，其结果示于图3中。
表3
表4
确认到每个基因在实验环境中表达都没问题，并且首先确认到随着时间的流逝，扩增效率没有问题。并且，从图3及表5中可以确认，应激状态(oxidativestress：h2o2100um处理组)下，总hsp的表达增加了约2.8倍，通过实施例的处理，确认到基因表达率为1.5倍至2.4倍，这比应激状态的表达率稳定。当施加应激并处理实施例时，这种基因表达率进一步扩增。可以确认到总基因表达率扩增到2.9倍至4.4倍，从而使对氧化应激的响应性增加了约2倍，尤其，确认到已知对抵抗氧化应激的防御机制重要的hsp70和hsp27基因的表达率显着增加。
实验例3.hsp蛋白表达水平(蛋白质印迹)
2-1.根据含量的表达水平
在韩国细胞株银行中培养人皮肤角蛋白细胞(bscell)。为了培养细胞，对于向rpmi细胞培养基中添加10％胎牛血清(fbs，fetalbovineserum)及1％抗生素的培养基，在细胞培养皿的6-孔板中分别接种40000个细胞，并在37℃恒温箱中稳定24小时。以200ul单位用实施例1的试样进行接种，接种后搜索细胞的形状及相关基因的表达。
将试样分别分为对照组(比较例1及2)和处理组(实施例1)处理的组来进行。根据每组，每1ml培养基处理100ul的样品，将其视为10wt％，并加入10wt％至50wt％后，在37℃、5％co2条件下培养24小时，1小时后确认了是否表达人hsp。在本实验中，没有对细胞施加额外应激。
确认了与人hsp表达有关的变化是否引起细胞中蛋白质水平的变化。具体地，改变对实施例的化妆品组合物的hsp表达产生影响的处理样品的含量(10wt％、20wt％、30wt％、40wt％及50wt％)来进行处理，在1小时后，添加200ul细胞溶解缓冲液来获得细胞后，添加500ul巯基乙醇(mercaptoethanol)并在100℃下分离蛋白质10分钟来获得细胞。在sds-page环境中施加电荷3小时的同时根据分子量分离蛋白质，为了检测，对标记有hrp的抗体进行处理来观察是否存在蛋白质，其结果示于图4中。
从图4中可以确认，提取物含量的变化表现出hsp27略有增加趋势，但未表现出剩余hsp的蛋白质表达水平的显着增加。这种结果证实，在无应激的环境中添加drbase不会显着影响细胞。
2-2.根据应激存在与否测量随时间而改变的表达水平的变化
在韩国细胞株银行中培养人皮肤角蛋白细胞(bscell)。为了培养细胞，对于向rpmi细胞培养基中添加10％胎牛血清(fbs，fetalbovineserum)及1％抗生素的培养基，在细胞培养皿的6-孔板中分别接种40000个细胞，并在37℃恒温箱中稳定24小时。
第二天，以200ul单位接种试样，接种后搜索细胞的形状及相关基因的表达。将试样分别分为对照组(比较例1及2)和处理组(实施例1)处理的组来进行。根据每组，每1ml培养基处理100ul的样品，将其视为10wt％，并加入10wt％至50wt％后，在37℃、5％co2条件下培养24小时，1小时后确认了是否表达人hsp。作为应激条件，每1ml培养基额外添加100um的h2o2100ul后培养相同时间。处理后，以与上述蛋白质印迹相同的方式检测了蛋白质的变化。
为了确认根据实际处理时间确认施加于细胞的应激差异是否影响蛋白质的稳定性，在向相同条件的细胞施加氧化应激(100umh2o2处理)后，测量hsp的细胞内浓度，其结果示于图5中。
从图5中可以确认，氧化应激后急剧增加的hsp在1小时30分钟后表现出初始浓度急剧下降的现象。当处理实施例的化妆品组合物时，hsp的这种急剧下降大大增加，尤其，表现出在处理最初30分钟中高的hsp蛋白浓度继续维持至约3小时的显着效果。从本结果中确认到，当处理实施例的化妆品组合物时，若未对细胞施加氧化应激，则对热休克蛋白的表达没有特别的影响，但在热休克蛋白的表达急剧下降的氧化应激情况下，实施例的化妆品组合物的处理显着维持热休克蛋白。
因此，认为实施例在无应激的环境中诱导hsp表达的效果甚微，但在诸如h2o2处理之类的氧化应激条件下，表现出非常强的诱导hsp表达的效果。
实验例4.氧化应激诱导的细胞衰老
确认上述hsp的诱导是否在高浓度的氧化应激下增加细胞的抵抗性。具体地，在增加氧化应激的浓度的同时在37℃、5％co2条件下分别培养1小时后，通过mtt比色法(mttassay)确认细胞存活率，其结果示于图6中。
从图6中可以确认，在50um的低浓度下没有显着变化的细胞存活率从200mm起表现出显着的毒性，而在实施例的化妆品组合物处理组中，确认到细胞耐受200um的高氧化应激。确认到即使长期处理低浓度的氧化应激(100mm)，实施例的化妆品组合物处理也抑制了细胞的衰老。
并且，从图7中可以确认，确认到在施加氧化应激后的14天，在实施例的化妆品组合物处理组中，细胞的生长和表示衰老性状(白色箭头)的细胞的形状显着降低。
1.一种皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，包含：
微胶囊，由内含有效成分的生物共聚物、碱性氨基酸及聚甘油酯组成；以及
纤维状蛋白，用于稳定上述微胶囊。
2.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述微胶囊的尺寸为2微米以下。
3.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述生物共聚物为选自由丙烯酸酯/丙烯酸共聚物、丙烯酸酯/二甲硅油共聚物、丙烯酸酯/硬脂醇聚醚-20甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/辛基丙烯酰胺共聚物、丙烯酸酯/棕榈油醇聚醚-25丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯共聚物、丙烯酸/丙烯腈共聚物、丙烯酰胺/丙烯酸钠共聚物以及丙烯酰胺/丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物组成的组中的一种以上。
4.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述碱性氨基酸为选自由赖氨酸、精氨酸及组氨酸组成的组中的一种以上。
5.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述有效成分包含芍药苷或其化妆品学上可接受的盐。
6.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述聚甘油酯为选自由聚甘油硬脂酸酯、聚甘油肉豆蔻酸酯、聚甘油月桂酸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、聚甘油二硬脂酸酯及聚甘油三硬脂酸酯组成的组中的一种以上。
7.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述纤维状蛋白为选自由卵磷脂及明胶组成的组中的一种以上。
8.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，相对于组合物的总重量，上述组合物以1：1的重量比包含生物共聚物和碱性氨基酸。
9.根据权利要求1所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，相对于组合物的总重量，上述组合物以1：5的重量比包含生物共聚物和聚甘油酯。
10.根据权利要求8所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，相对于组合物的总重量，上述组合物以1：1的重量比包含生物共聚物和纤维状蛋白。
技术总结