本发明涉及中药现代化领域，具体涉及一种化合物及含有所述化合物的仙茅标准汤剂。
背景技术：
仙茅是石蒜科仙茅属植物仙茅的干燥根茎，属常用中药。近年来，国内、外关于仙茅的化学成分研究颇多，计有环菠萝蜜烷型三萜皂苷、酚及酚苷、木脂素及木脂素苷、黄酮、桉烷类衍生物和甜味蛋白等。生物活性研究显示，仙茅属植物具有调节免疫、抗氧化、保肝、保护心血管系统、改善味觉及抗骨质疏松等作用。而仙茅药材则具有补肾阳、强筋骨、祛寒湿等功效，临床用于治疗阳痿精冷、筋骨萎软、腰膝冷痹、阳虚冷泻等证。中国药典2015年版一部将仙茅苷作为仙茅质量评价指标之一，但是单一的指标成分不能全面地评价质量。中药色谱特征图谱用于中药的质量控制，能够提供较为丰富的信息，因此本实验开展了仙茅标准汤剂的uplc特征图谱研究。经过研究，建立了仙茅标准汤剂的uplc特征图谱，可为产品提供质量控制手段。
标准汤剂又称标准煎液，是一种传统的临床广泛使用的用药形式，标准汤剂系遵循中医药理论，按照临床汤剂煎煮方法规范化煎煮，固液分离，经适当浓缩制备或经适宜方法干燥制得，作为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的标准参照物。
由于标准汤剂是连接传统中药饮片和现代中药制剂的“桥梁”，为控制中药终端产品的质量提供了参照物，为标化中药不同用药形式，确保质量的均一性、疗效的一致性提供了参照物，为评价不同厂家产品质量的一致性提供了参照物，因此，中药标准汤剂质量标准的制定将为所有源于饮片的水煎剂的终产品的质量标准的制定提供基础。
技术实现要素：
为此，本发明所解决的技术问题是提供了一种化合物及含有所述化合物的仙茅标准汤剂。
第一方面，本发明提供一种化合物，所述化合物为式(vi)所示的2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷：
第二方面，本发明提供一种仙茅标准汤剂，所述标准汤剂中含有所述化合物。
优选地，所述标准汤剂中还含有苔黑酚苷，
3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，
3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
corchiosidoa，
2,6-二甲氧基苯甲酸，
2-羟基-6-甲氧基-苯甲酸-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷，
或，仙茅苷中的一种或两种以上。
优选地，所述仙茅标准汤剂中含有2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，苔黑酚苷，3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，corchiosidoa，2,6-二甲氧基苯甲酸，2-羟基-6-甲氧基-苯甲酸-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷和仙茅苷。
第三方面，本发明提供所述仙茅标准汤剂的制备方法，包含下述步骤：
(1)取仙茅药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-40℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为0～25℃，得到仙茅标准汤剂。
第四方面，本发明提供所述仙茅标准汤剂的仙茅苷含量的测定方法，包含下述步骤：
(1)对照品溶液的制备：
分别称取仙茅苷对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取所述的仙茅标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析：
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以水相为流动相b进行梯度洗脱，得到仙茅苷的含量。
优选地，所述测定方法步骤(2)中，所述溶剂选自甲醇、75％甲醇、50％甲醇、无水乙醇、75％乙醇、稀乙醇、水中的一种，更优选地，所述溶剂为甲醇。
优选地，所述测定方法步骤(2)中，所述提取采用超声提取或回流提取中的一种，更优选地，所述提取采用超声提取。
优选地，所述测定方法步骤(2)中提取时间为10-60min，
优选地，所述测定方法步骤(2)中提取时间为30min。
第五方面，本发明提供所述仙茅标准汤剂的特征图谱的检测方法，包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
分别称取仙茅苷对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取所述的仙茅标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析：
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以水相为流动相b进行梯度洗脱，得到仙茅标准汤剂的特征图谱。
优选地，所述步骤(2)中，所述溶剂选自水、无水乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇或50％甲醇中的一种，优选地，所述溶剂为甲醇或75％甲醇。
优选地，所述步骤(2)中，所述提取采用回流提取或超声提取中的一种，更优选地，所述提取采用超声提取。
优选地，所述步骤(2)中，提取时间为10-60min，更优选地，提取时间为30min。
优选地，步骤(3)中，色谱柱柱温为28-32℃；更优选地，所述色谱柱柱温为30℃。
优选地，步骤(3)中，流动相a和流动相b的流速为0.35-0.45ml/min，
更优选地，所述流动相a和流动相b的流速为0.4ml/min。
优选地，所述检测波长为210-400nm，
更优选地，所述检测波长为220nm。
优选地，所述梯度洗脱程序为：
0-11min，流动相a的体积百分比为1→1％，流动相b的体积百分比为99→99％；
11-12min，流动相a的体积百分比为1→3％，流动相b的体积百分比为99→97％；
12-17min，流动相a的体积百分比为3→3％，流动相b的体积百分比为97→97％；
17-18min，流动相a的体积百分比为3→4％，流动相b的体积百分比为97→96％；
18-27min，流动相a的体积百分比为4→4％，流动相b的体积百分比为96→96％；
27-37min，流动相a的体积百分比为4→15％，流动相b的体积百分比为96→85％；
37-42min，流动相a的体积百分比为15→15％，流动相b的体积百分比为85→85％；
42-46min，流动相a的体积百分比为15-25％，流动相b的体积百分比为85-75％；
46-50min，流动相a的体积百分比为25→35％，流动相b的体积百分比为75→65％；
50-55min，流动相a的体积百分比为35→45％，流动相b的体积百分比为65→55％；
55-55.5min，流动相a的体积百分比为45-1％，流动相b的体积百分比为55-99％；
55.5-60min，流动相a的体积百分比为1-1％，流动相b的体积百分比为99-99％。
优选地，步骤(3)中，所述水相选自于水、0.1wt％的磷酸水溶液、0.1wt％甲酸水溶液或者0.1wt％醋酸水溶液，优选为0.1wt％的磷酸水溶液。
优选地，所述特征谱图的特征峰不少于7个，优选的，所述特征峰不少于8个。
优选地，所述特征图谱的7个特征峰指认为：
苔黑酚苷，
3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，
3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
corchiosidoa，
2,6-二甲氧基苯甲酸，
2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄糖苷，
和，仙茅苷，
优选地，所述特征峰还包括丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷。
本发明所取得的有益效果：
本发明建立的特征图谱方法，采用超高相液相色谱，具有简便、稳定、精密度高及重现性好等特点，而且所得标准汤剂指纹图谱的峰多，峰型好，易于鉴别，准确可靠。
附图说明
图1所示为不同提取溶剂的考察hplc图谱；
图2所示为不同提取方式的考察hplc图谱；
图3所示为不同提取时间的考察hplc图谱；
图4所示为仙茅标准汤剂含量测定专属性考察；
图5所示为仙茅苷峰纯度图；
图6所示为仙茅苷标准曲线图；
图7所示为不同色谱柱耐用性考察hplc图；
图8所示为不同柱温耐用性考察hplc图；
图9所示为不同流速耐用性考察hplc图；
图10所示为仙茅苷对照品的紫外吸收图；
图11所示为洗脱条件为梯度1的仙茅标准汤剂的色谱图；
图12所示为洗脱条件为最终梯度的仙茅标准汤剂的色谱图；
图13a所示为流动相系统为乙腈-水的uplc图谱；
图13b所示为流动相系统为乙腈-0.1％磷酸的uplc图谱；图13c所示为流动相系统为乙腈-0.1％甲酸的uplc图谱；
图13d所示为流动相系统为乙腈-0.1％醋酸的uplc图谱；
图14a所示为甲醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14b所示为75％甲醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14c所示为50％甲醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14d所示为乙醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14e所示为75％乙醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14f所示为稀乙醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14g所示为75％乙醇为提取溶剂考察的uplc图谱；
图14h所示为水为提取溶剂考察的uplc图谱；
图15所示为不同提取溶剂的提取效率对比图；
图16a所示为超声提取方式考察的uplc图谱；
图16b所示为回流提取方式考察的uplc图谱；
图17所示为不同提取方式的提取效率对比图；
图18a所示为超声提取15min考察的uplc图谱；
图18b所示为超声提取30min考察的uplc图谱；
图18c所示为超声提取45min考察的uplc图谱；
图19所示为不同提取时间考察图；
图20a所示为专属性考察空白对照图谱；
图20b所示为专属性考察仙茅标准汤剂特征图谱；
图21a所示为整体性考察仙茅标准汤剂特征图谱；
图21b所示为整体性考察仙茅标准汤剂延长试验特征图谱；
图22a所示为agilentc18色谱柱考察uplc图谱；
图22b所示为dikmac18色谱柱考察uplc图谱；
图22c所示为acquityuplc
图23a所示为柱温为25℃考察uplc图谱；
图23b所示为柱温为30℃考察uplc图谱；
图23c所示为柱温为35℃考察uplc图谱；
图24a所示为流速为0.35ml/min考察uplc图谱；
图24b所示为流速为0.40ml/min考察uplc图谱；
图24c所示为流速为0.45ml/min考察uplc图谱；
图25所示为仙茅标准汤剂的特征图谱；
图26所示为仙茅标准汤lc-ms质谱图，其中，
图26a所示为负离子模式tic质谱图，
图26b所示为负离子模式bpi质谱图，
图26c所示为220nm紫外色谱图；
图27所示为峰1的dad图谱；
图28所示为峰1的ms/ms质谱图；
图29所示为峰2的dad图谱；
图30所示为峰2的ms/ms图；
图31所示为峰3的dad图谱；
图32所示为峰3的ms/ms图；
图33所示为峰4的dad图谱；
图34所示为峰4的ms/ms图谱；
图35所示为峰5的dad图谱；
图36所示为峰5的ms/ms图；
图37所示为峰6的dad图谱；
图38所示为峰6的ms/ms图；
图39所示为峰7的dad图；
图40所示为峰7的ms/ms图；
图41所示为峰8的dad图；
图42所示为峰8的ms/ms图；
图43所示为仙茅标准汤剂的特征图谱。
具体实施方式
术语“稀乙醇”是采用《中国药典一部》中附录xvb试液进行制备，即取乙醇529ml，加水稀释至1000ml，即得。本液在20℃时含c2h5oh应为49.5％～50.5％(ml/ml)。
下面对本实施例所用的原料的生产厂家，进行说明如下，其中所述的化学物质没有标明的均为常规试剂的化学纯级别。实施例所用到的原料的信息和实验设备分别如表1和表2所示。
表1实施例中所用到的原料的信息
表2实施例中所用到的实验设备
实施例1
1.仙茅标准汤剂的制备
取仙茅药材，除去杂质及非药用部位，快速淘洗至无泥沙，取出后，置于铡刀下切成短段，置于烘箱，65℃下干燥，得到仙茅饮片。
取仙茅饮片100g置于煎药壶中，第一次煎煮加12倍量水，浸泡60min分钟，武火(500w)煮沸，文火(200w)保持微沸再煎煮60min；第二次煎煮加10倍量水，武火煮沸，文火保持微沸煎煮40min；合并两次煎煮的药液，药液用200目过滤，滤液待用。
取仙茅提取液用旋转蒸发仪进行真空减压浓缩，浓缩温度为65℃，浓缩1～2小时至适宜体积，浓缩至相对密度为1.05(温度65℃)。
参照中国药典2015年版四部通则2201浸出物测定法中“热浸法”浸出物含量的测定：精密称取浓缩液10g，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算得到浓缩液含固率。含固率为15.0％。
取上述仙茅浓缩液，均匀分装至10ml西林瓶中，装量为2ml(高度约1.8cm)，放入真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为60min，维持时间4h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-30℃，-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到仙茅标准汤剂。
所述仙茅的出膏率按公式出膏率＝5ml浓缩液蒸干后固体质量*浓缩液总质量/(5ml浓缩液质量*饮片投料量)*100％，经计算，得出膏率为16.49％。
所述仙茅标准汤剂的水分质量含量按照下述公式进行计算：水分质量含量＝水份重/样品重*100％，得到续断标准汤剂的水分质量含量为2.6％。
2.仙茅标准汤剂中仙茅苷含量的测定
(1)对照品溶液的制备
精密称取仙茅苷适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备
取1中制备得到的仙茅标准汤剂适量，研细，精密称定0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂10ml，密塞，称定重量，进行提取处理一段时间，放冷，再称定重量，用有机溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液(21∶79)为流动相，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，进行测定。检测波长为285nm，理论塔板数按仙茅苷峰计算应不低于3000。
2.1对检测方法中的实验条件进行考察：
a.不同提取溶剂的考察
取仙茅标准汤剂适量，研细，取约0.2g，精密称定，平行7组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、稀乙醇、75％乙醇、无水乙醇、50％甲醇、75％甲醇、甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。实验结果见表3和图1。
表3不同提取溶剂仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定结果
由表3和图1实验结果表明，通过对比7种提取溶剂对仙茅标准汤剂中仙茅苷含量的影响，发现甲醇作为提前溶剂时，仙茅苷含量最大，因此选择甲醇作为仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定的提取溶剂。
b.不同提取方法的考察
取仙茅标准汤剂适量，研细，取约0.2g，精密称定，平行2组，每组2份，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，分别超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟、加热回流30分钟，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。实验结果见表4和图2。
表4不同提取方式仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定结果
由表4和图2实验结果表明，回流提取与超声提取对仙茅苷的提取影响不大，从操作方便考虑，选择超声作为提取方式。
c.提取时间考察
取仙茅标准汤剂适量，研细，取约0.2g，精密称定，平行4组，每组2份，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，分别超声处理(功率250w，频率40khz)15min、30min、45min、60min，取出放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。实验结果见表5和图3。
表5不同提取时间仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定结果
由表5和图3实验结果表明：通过对比不同超声时间的仙茅苷含量，提取时间对仙茅苷的含量影响不大，但为了保证充分提取，选取超声时间为30min。
供试品溶液制备方法的确定
根据样品前处理考察实验结果，供试品制备方法可确定为：取仙茅标准汤剂适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2含量测定分析方法的方法学验证
a.专属性
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液、仙茅苷对照品溶液与空白溶剂各10μl，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定。结果见图4、表6。
表6色谱峰分离参数
实验结果表明空白溶剂色谱中在与仙茅苷相应的保留时间没有色谱峰，说明溶剂对仙茅苷的测定无干扰，以本法测定仙茅标准汤剂中仙茅苷的含量具有专属性。
b.峰纯度考察
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液、仙茅苷对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件以dad检测器进行190nm～400nm扫描检测，计算峰纯度。结果见图5。图5中pa为纯度角，th为阈值，纯度角度小于阈值角度，表明峰纯度符合要求。
c.线性
分别精密吸取仙茅苷对照品溶液(69.9μg/ml)1、3、5、7、9、11、13μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，仙茅苷进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，结果见下表7与图6。
表7仙茅苷线性考察结果
由表7和结果表明，得到的线性回归方程为：y＝609157x 9387.8，相关系数r2＝0.9993，表明在浓度为0.0699μg～0.9087μg的范围内仙茅苷浓度与峰面积线性关系良好。
d.精密度试验
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液，按照上述色谱条件重复进样6次，进样体积10μl。计算峰面积rsd，测定结果见表8。
表8精密度考察结果
从表8可以看出，6个平行供试溶液中仙茅苷的含量较稳定，rsd％＝1.91％，重复性良好，实验结果表明仪器精密度良好。
e.稳定性试验
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液，按照上述色谱条件，分别在0，4，8，12，16，20，24小时进样，进样体积10μl，测定供试品溶液中仙茅苷的峰面积，计算峰面积rsd，测定结果见表9。
表9稳定性考察结果
由表9的实验结果表明：样品供试液在24小时内稳定性良好(仙茅苷的rsd％＝0.77％)。
f.中间精密度考察
由本项目组其他分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，取同一批仙茅标准汤剂约0.2g，精密称定，平行6份，制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表10。
表10中间精密度考察结果
由表10实验结果表明，不同分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，仙茅苷含量结果rsd<2％，该分析方法中间精密度良好。
g.耐用性考察
(1)不同色谱柱考察
比较了waters、迪马、岛津3种色谱柱对仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定的影响。
取仙茅标准汤剂供试品溶液，按上述色谱条件，实验结果见图7、表11。
表11不同色谱柱耐用性考察结果
表11实验结果表明该分析方法不同色谱柱耐用性很好。
(2)不同色谱仪考察
根据实验室现有设备，选取waters色谱仪与赛默飞色谱仪，比较两种色谱仪对仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定的影响。
取仙茅标准汤剂供试品溶液，按上述色谱条件，实验结果如表12。
表12不同色谱仪耐用性考察结果
表12实验结果表明该分析方法不同色谱仪耐用性较好。色谱仪的变动能满足系统适应性要求。
(3)不同柱温考察
比较20℃、25℃、30℃、35℃不同柱温对仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定的影响。
取仙茅标准汤剂项下供试品溶液，按上述色谱条件，实验结果图8、表13。
表13不同柱温耐用性考察结果
由图8可看出，当温度大于30℃时，仙茅苷峰型会出现鼓包现象，尤其是当温度为35℃时更为严重，原因可能是温度较高时，仙茅苷前面的小杂峰被包裹于仙茅苷峰中。
实验结果表明，当温度大于30℃时，会出现包裹前面小峰的情况，导致仙茅苷峰型变差，而温度小于30℃时，峰型较好，且微小的温度波动对仙茅苷的测定结果影响不大，故该分析方法在30℃以下柱温测定较好。
(4)不同流速考察
比较0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min不同流速对仙茅标准汤剂仙茅苷含量测定的影响。
取仙茅标准汤剂供试品溶液液，按上述色谱条件，实验结果图9、表14。
表14不同流速耐用性考察结果
由图9和表14实验结果表明，该分析方法不同流速耐用性较好。流速小的变动能满足系统适应性要求。
3.仙茅标准汤剂特征图谱分析方法的建立
3.1对检测方法的条件的优化
(1)参照物溶液的制备
精密称定仙茅苷对照品，加甲醇制成每1ml含70ug仙茅苷的溶液，既得参照物溶液。
(2)供试品溶液的制备
取仙茅标准汤剂约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，超声处理30分钟，过滤，蒸干溶剂，残渣用75％甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，滤过，取续滤液作为供试液，即得。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸为流动相b，进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为每分钟0.4ml；检测波长为220nm。理论板数按仙茅苷峰计算应不低于3000。
下面对检测方法中的实验条件进行考察：
i.色谱条件的确定
a.检测波长的确定
取仙茅苷对照品溶液，进样1μl进行分析，记录其紫外吸收图，结果见图10。
结果表明，仙茅苷在近紫外端的吸收较好。
取本品冻干粉末约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，超声处理30分钟，过滤，蒸干溶剂，残渣用75％甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，滤过，取续滤液作为供试液，记录210～400nm范围内的吸收光谱。
结果表明，在220nm左右，仙茅标准汤剂样品溶液可以检测到的色谱峰最多，且各色谱峰的峰面积较大，因此选择220nm为检测波长。
b.流动相梯度考察
用安捷伦(zorbaxsb-aqrapidresolutionhd2.1*100mm1.8μm)；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为每分钟0.40ml/min；检测波长为220nm。
(1)梯度1如下：
表15
结果如图11所示。以表15所示的梯度1进行洗脱，存在小峰干扰。
优化得到最终梯度如下：
表16
以表16所示的梯度进行洗脱，结果如图12所示。从图12中可以看出大峰实现分离且无堆积和干扰。
c.有机相的选择
因为波长选择220nm，甲醇在这个波长有吸收，所以不考虑使用甲醇，直接选择乙腈为有机相。
d.酸的考察
用安捷伦(zorbaxsb-aqrapidresolutionhd2.1*100mm1.8μm)为色谱柱，参考仙茅药材特征图谱的色谱条件，取仙茅冻干粉的供试品溶液，先后比较使用纯水、0.1％磷酸、0.1％甲酸、0.1％醋酸的情况，结果如图13a-13d所示。
结果表明，使用0.1％磷酸的情况较好。
e.色谱条件的确定
最终确定了如下色谱条件：以zorbaxsb-aqrapidresolutionhd为色谱柱(柱长为100mm，内径2.1mm，粒径为1.8μm)；以乙腈为流动相a，以0.01％磷酸为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为每分钟0.4ml；检测波长为220nm。理论板数按仙茅苷峰计算应不低于3000。
表17
ii.供试品溶液的制备
a.提取溶剂考察
取仙茅标准汤剂适量，研细。取约0.17g，精密称定，精密加入甲醇、75％甲醇、50％甲醇、乙醇、75％乙醇、稀乙醇和水各50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用不同的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如图14a-14h和图15所示。
结果表明：甲醇和75％甲醇提取的情况较好，但75％甲醇提取的样品小峰多一点，因此选择75％甲醇提取液。
b.提取方式考察
取仙茅标准汤剂适量，研细。取约0.17g，精密称定，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声处理、加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如图16a、图16b和图17所示。
结果表明：两种方法差异不大，选择超声较方便。
c.提取时间考察
取仙茅标准汤剂适量，研细。取约0.17g，精密称定，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声处理15min、30min、45min，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如图18a-图18c和图19所示。
结果表明：超声提取30分钟即可提取完全，最终选择超声处理30分钟。
d.供试品溶液的制备
实验发现，样品的浓度很低，因此决定将样品进行浓缩操作。
供试品溶液的制备方法：取本品冻干粉末约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密闭，超声处理30分钟，过滤，蒸干溶剂，残渣用75％甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，滤过，即得。
3.2特征图谱分析方法的方法学验证
a.专属性
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液与空白溶剂各1μl，注入液相色谱仪进行测定。结果见图20a和图20b。
从图20a和图20b可以看出，该分析方法能正确检测仙茅，不受提取溶剂的干扰。
由结果可知，溶剂对仙茅标准汤剂图谱中的特征峰没有干扰。
b.整体性
精密吸取仙茅标准汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，保持同一梯度，在梯度终点的流动相比例下延长洗脱一倍时间，分析特征图谱。结果见图21a和图21b。
由图21a和图21b结果表明，该色谱条件延长一倍时间后无明显色谱峰，表明该色谱条件基本满足了信息量最大的原则。
结果表明，仙茅标准汤剂在50min后无明显的色谱峰，整体性较好
c.精密度
取同一批号样品，按供试品溶液制备方法制备成供试液，进样6次，每次1μl，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。
表18精密度实验结果(相对保留时间)
表19精密度实验结果(相对峰面积)
表18和表19所示结果表明，各特征峰相对保留时间及相对峰面积值rsd均小于2％，仪器精密度良好。
d.稳定性
取仙茅标准汤剂供试液，每隔2小时进样一次，共测定12小时，分别进样1μl，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。
表20稳定性实验结果(相对保留时间)
表21稳定性实验结果(相对峰面积)
表20和表21所示结果表明，各特征峰的相对保留时间及相对峰面积的rsd均小于3％，供试液在12小时内稳定性良好。
e.重复性
取仙茅标准汤剂供试液，进样1μl分析，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。
表22重复性实验结果(相对保留时间)
表23重复性实验结果(相对峰面积)
表22和表23所示结果表明，各特征峰的相对保留时间及相对峰面积值的rsd均小于2％，该方法的重复性良好。
f.中间精密度考察
在不同时间，不同仪器(agilent1290infinityii)及不同实验人员的条件下，取同一批号样品共6份，按供试品溶液制备方法制备成供试液，进样1μl分析，考察中间精密度。
表24重复性实验结果(相对保留时间)
表25重复性实验结果(相对峰面积)
表24和表25所示结果表明，各特征峰的相对保留时间及相对峰面积值的rsd均小于3％，该方法的中间精密度良好。
g.耐用性
①色谱柱的考察
本研究中考察了三种不同填料的色谱柱的分离效果。
(1-ultrahthydrospherec18(ymc，2.0×100mm，2.0μm)；2-syncronisc18dim.(mm)(thermo，2.1×100mm，1.7μm)；3-zorbaxsb-aqrapidresolutionhd(agilent，2.1×100mm，1.8μm)
结果如图22a-22c所示结果表明：使用zorbaxsb-aqrapidresolutionhd(agilent，2.1×100mm，1.8μm)色谱峰较多，分离效果及峰形较好，因此选择zorbaxsb-aqrapidresolutionhd(agilent，2.1×100mm，1.8μm)进行研究。
②柱温的考察
用zorbaxsb-aqrapidresolutionhd(agilent，2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，分别考察了柱温为25℃、30℃、35℃时的样品分离效果。
结果如图23a-图23c所示。结果表明：柱温为30℃时样品的分离效果最好。考虑到色谱柱的寿命，选择柱温为30℃。
③流速的考察
用zorbaxsb-aqrapidresolutionhd(agilent，2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，分别考察了流速为0.35ml/min、0.40ml/min及0.45ml/min时样品分离效果。
结果如图24a-图24c所示结果表明：流速为0.40ml/min时，分离效果好。
实施例2
1.仙茅标准汤剂的制备
取仙茅药材，除去杂质及非药用部位，快速淘洗至无泥沙，取出后，置于铡刀下切成短段，置于烘箱，65℃下干燥，得到仙茅饮片。
取仙茅饮片100g置于煎药壶中，第一次煎煮加12倍量水，浸泡60min分钟，武火煮沸，文火保持微沸再煎煮60min；第二次煎煮加10倍量水，武火煮沸，文火保持微沸煎煮40min；合并两次煎煮的药液，药液用200目过滤，滤液待用。
取仙茅提取液用旋转蒸发仪进行真空减压浓缩，浓缩温度为65℃，浓缩1～2小时至适宜体积，浓缩液比重为1.03～1.07(温度70℃)，含固率为10.0～15.0％。
精密称取浓缩液10g，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，分别均匀分装至10ml西林瓶中，装量为2ml(高度约1.8cm)，放入真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为60min，维持时间4h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-30℃，-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到仙茅标准汤剂。
2.仙茅苷含量测定及准确度实验
(1)含量最大值
①重复性实验
取仙茅标准汤剂约0.1g，精密称定，平行称定6份，按上述供试品溶液制备方法，制备供试品溶液6份。每份精密吸取10μl上述色谱条件测定，测定供试品溶液中仙茅苷含量，计算rsd，测定结果见表26。
表26重复性考察结果
表26所示实验结果表明该分析方法的重复性良好。
②准确度实验
取已知含量的样品(含量：0.445％)0.1g，精密称定，分别加入仙茅苷对照品溶液(0.1398mg/ml)3.180ml，共6份，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别进样10μl，测定仙茅苷峰面积，计算其含量，并按以下列公式计算回收率及rsd，结果见下表27。
表27准确度试验
表27所示实验结果显示仙茅苷回收率为96.3％，根据《中国药典》2015版四部“药品质量标准分析方法验证指导原则”规定样品中待测成分含量为1％时，回收率限度92％～105％，表明回收率良好。
(2)含量最小值
①重复性实验
取仙茅标准汤剂约0.1g，精密称定，平行称定6份，按上述供试品溶液制备方法，制备供试品溶液6份。每份精密吸取10μl上述色谱条件测定，测定供试品溶液中仙茅苷含量，计算rsd，测定结果见表28。
表28重复性考察结果
表28所示实验结果表明该分析方法的重复性良好。
②准确度实验
取已知含量的样品(含量：0.260％)0.1g，精密称定，分别加入仙茅苷对照品溶液(0.1398mg/ml)1.860ml，共6份，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别进样10μl，测定仙茅苷峰面积，计算其含量，并按以下列公式计算回收率及rsd，结果见下表29。
表29准确度试验
表29所示实验结果显示仙茅苷回收率为104.4％，根据《中国药典》2015版四部“药品质量标准分析方法验证指导原则”规定样品中待测成分含量为1％时，回收率限度92％～105％，表明回收率良好。
实施例3
1.仙茅标准汤剂的制备
取11份仙茅药材，分别除去杂质及非药用部位，快速淘洗至无泥沙，取出后，置于铡刀下切成短段，置于烘箱，65℃下干燥，得到11份仙茅饮片。
11份仙茅饮片各取100g置于煎药壶中，第一次煎煮加12倍量水，浸泡60min分钟，武火煮沸，文火保持微沸再煎煮60min；第二次煎煮加10倍量水，武火煮沸，文火保持微沸煎煮40min；分别合并两次煎煮的药液，药液用200目过滤，滤液待用。
取仙茅提取液用旋转蒸发仪进行真空减压浓缩，浓缩温度为65℃，浓缩1.5小时至适宜体积，浓缩液比重为1.07(温度70℃)。
精密称取浓缩液10g，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，分别均匀分装至10ml西林瓶中，装量为2ml(高度约1.8cm)，放入真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为60min，维持时间4h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-30℃，-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到仙茅标准汤剂。
2.仙茅标准汤剂的特征图谱测定
取1中制备得到的11批仙茅标准汤剂适量，研细，各取约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，超声处理30分钟，过滤，蒸干溶剂，残渣用70％甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，0.22μm滤膜滤过，即得供试品溶液。
仙茅苷对照品溶液(浓度139.8μg/ml)，取苔黑酚苷、2，6-二甲氧基苯甲酸和丁香酸适量，加甲醇溶解，配制混标1；苔黑酚龙胆二糖苷和2-羟基-6-甲氧基苯甲酸适量，加甲醇溶解，配制混标2，得到对照品溶液。
利用watersacquityuplc色谱仪，agilentaqsb-c18色谱柱(2.1*100mm，1.8μm)，流动相系统a相为乙腈、b相为0.1％甲酸水，流速为0.4ml/min，检测波长270，220，210nm；柱温为30℃条件下，上述供试品溶液进样量0.8μl和对照品溶液进样量0.2μl，按照下表30所示的梯度程序洗脱；
表30梯度洗脱程序
共有峰的确定
采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，呈现7个分离度较好的共有峰。测定了11批仙茅标准汤剂特征图谱，结果如图25所示。
结果表明仙茅标准汤剂的特征图谱中由7个较为明显的共有峰。以仙茅苷峰对应的峰7为s峰，各特征峰与s峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。通过分析，可确定的共有峰如下表31所示。表32所示为11批仙茅标准汤剂特征图谱7个共有峰相对峰面积。
表3111批仙茅标准汤剂特征图谱相对保留时间
表3211批仙茅标准汤剂特征图谱相对峰面积
实施例4特征峰的指认
一、仙茅标准汤剂的制备
取仙茅药材，除去杂质及非药用部位，快速淘洗至无泥沙，取出后，置于铡刀下切成短段，置于烘箱，65℃下干燥，得到仙茅饮片。
取仙茅饮片100g置于煎药壶中，第一次煎煮加12倍量水，浸泡60min分钟，武火煮沸，文火保持微沸再煎煮60min；第二次煎煮加10倍量水，武火煮沸，文火保持微沸煎煮40min；合并两次煎煮的药液，药液用200目过滤，滤液待用。
取仙茅提取液用旋转蒸发仪进行真空减压浓缩，浓缩温度为65℃，浓缩1～2小时至适宜体积，浓缩液比重为1.03～1.07(温度70℃)，含固率为10.0～15.0％。
精密称取浓缩液10g，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，分别均匀分装至10ml西林瓶中，装量为2ml(高度约1.8cm)，放入真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为60min，维持时间4h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-30℃，-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到仙茅标准汤剂。
二、特征峰指认
1、lc-ms分析条件
(1)uplc条件：
watersacquityuplc色谱仪；色谱柱：agilentaqsb-c18色谱柱(2.1*100mm，1.8μm)；流动相系统：乙腈(a)：0.1％甲酸水(b)；按照下表33梯度程序洗脱；流速：0.4ml/min；检测波长270，220，210nm；柱温：30℃；进样量：0.8μl(样品)；0.2μl(对照品)。
表33梯度洗脱程序
(2)质谱条件：watersxevog2-xsqtof质谱仪，esi离子源正负离子检测；源电压：2.5kv，n2流速：800l/h，碰撞气体为氮气；毛细管温度400℃；锥孔气体流速：100l/h；气源温度：120℃；采用全扫描方式，分子量扫描范围50～1500；碰撞诱导解离电压：6v(低能量)、30～60v(高能量)；
(3)供试品处理：取仙茅标准汤冻干粉约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，超声处理30分钟，过滤，蒸干溶剂，残渣用70％甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，0.22μm滤膜滤过，即得。
(4)对照品处理：取苔黑酚苷、2，6-二甲氧基苯甲酸和丁香酸适量，加甲醇溶解，配制混标1；苔黑酚龙胆二糖苷和2-羟基-6-甲氧基苯甲酸适量，加甲醇溶解，配制混标2。
2、lc-ms分析结果
2.1lc-ms质谱轮廓图
得到的仙茅标准汤剂lc-ms质谱图如图26所示，其中图26a所示为负离子模式tic质谱图，图26b为负离子模式bpi质谱图，图26c所示为220nm紫外色谱图。
从220nm紫外色谱图来看，lc-ms质谱图色谱峰1-7疑似与特征指纹图谱1-7号峰一致。下面对该7个色谱峰的紫外光谱图及质谱图进行分析。
2.2紫外220nm下主要色谱峰的lc-ms鉴定：
2.2.1峰1
峰1的保留时间4.65min，dad图谱显示最大吸收波长为271nm，由质谱图显示，m/z331.10320为其准分子离子峰[m hcoo]，m/z123.04503为脱去一分子葡萄糖[m-h-162]的苷元准分子离子峰，因此，该峰为鉴定为苔黑酚苷。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的特征峰1相对应。如下所示式(i)为苔黑酚苷结构式。图27所示为峰1的dad图谱。图28所示为峰1的ms/ms质谱图。
2.2.2峰2
峰2的保留时间5.54min，dad图谱显示最大吸收波长为273nm，提示为与峰1为同类型化合物。由质谱图显示，m/z329.08774为其准分子离子峰[m-h]，m/z285.09776为脱去一份子甲酸[m-h-co2]形成的离子峰，m/z167.03592为脱去一分子葡萄糖[m-h-162]的苷元准分子离子峰[aglycon-h]，苷元脱去一分子甲酸形成的m/z123.04514离子峰[aglycon-h-coo]，脱去一分子甲基形成m/z108.02176离子峰[aglycon-h-coo-ch3]，表明苷元结构中含有甲酸基团和甲氧基基团，因此，该峰为鉴定为3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的特征峰2相对应。如下所示式(ii)为3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷结构式。图29所示为峰2的dad图谱。图30所示为峰2的ms/ms质谱图。
2.2.3峰3
峰3的保留时间6.40min，dad图谱显示最大吸收波长为271nm，提示与峰1和峰2为同类型化合物。由质谱图显示，m/z447.15030为其准分子离子峰[m-h]，m/z323.09821为两分子葡萄糖苷形成的离子峰，提示结构中含有两分子的葡萄糖，m/z123.04499为脱去两分子葡萄糖形成的苷元准分子离子峰[aglycon-h]，因此，峰3鉴定为3-羟基-5-甲基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，俗名苔黑酚龙胆二糖苷。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的特征峰3相对应。如下所示式(iii)为苔黑酚龙胆二糖苷结构式。图31所示为峰3的dad图谱。图32所示为峰3的ms/ms质谱图。
2.2.4峰4
峰4的保留时间为9.71min，dad图谱显示最大吸收波长为270nm，提示与峰1-3为同类型化合物。由质谱图显示，m/z417.14011为其准分子离子峰，m/z293.08853为脱去一分子葡萄糖和一分子阿拉伯糖形成的糖苷离子峰，m/z123.04527为脱去葡萄糖和阿拉伯糖的苷元准分子离子峰[aglycon-h]，因此，初步确定该峰为corchiosidoa。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的特征峰4相对应。如下所示式(iv)为corchiosidoa结构式。图33所示为峰4的dad图谱。图34所示为峰4的ms/ms质谱图。
2.2.5峰5
峰5的保留时间为15.90min，dad图谱显示最大吸收波长为242和279nm。负离子模式不电离，由正离子模式质谱图显示，m/z183.06540为其准分子离子峰[m h]，结合dad和文献，该峰鉴定为2,6-二甲氧基苯甲酸。由于此峰不稳定，故未定为特征峰。如下所示式(v)为2,6-二甲氧基苯甲酸结构式。图35所示为峰5的dad图谱。图36所示为峰5的ms/ms质谱图。
2.2.6峰6
峰6的保留时间为17.50min，dad图谱显示最大吸收波长为254和292nm。由质谱图显示，m/z461.12993为其准分子离子峰[m-h]，m/z329.08855为脱去一分子芹菜糖[m-h-132]的苷元离子峰，在此基础上再脱去一分子葡萄糖[m-h-132-162]形成m/z167.03477的苷元准分子离子峰[aglycon-h]，152.0114为苷元脱去一分子甲基[aglycon-h-ch3]，在此基础上再脱去一分子甲酸基形成m/z108.02187的离子峰[aglycon-h-ch3-coo]，表明苷元中含有一分子甲酸，一分子甲氧基，结合dad和文献，峰6被鉴定为2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，疑似新化合物。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的峰5相对应。如下所示式(vi)为2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷结构式。图37所示为峰6的dad图谱。图38所示为峰6的ms/ms质谱图。
2.2.7峰7
峰7的保留时间为18.61min，dad图谱显示最大吸收波长为261nm。由质谱图显示，m/z359.09801为其准分子离子峰[m-h]，m/z197.04527为脱去一分子葡萄糖[m-h-162]的苷元准分子离子峰[aglycon-h]，182.02189为苷元脱去一分子甲基[aglycon-h-ch3]，在此基础上再脱去一分子甲酸基形成m/z138.03217离子峰[aglycon-h-ch3-coo]，再脱去一分子甲基[aglycon-h-ch3-coo-ch3]，形成m/z123.00865的离子峰，表明，苷元中有一分子甲酸，2分子甲氧基，因此，峰7鉴定为丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷。由dad图谱信息可知，与uplc条件下测定的特征图谱的特征峰6相对应。如下所示式(vii)为丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷结构式。图39所示为峰7的dad图谱。图40所示为峰7的ms/ms质谱图。
2.2.8峰8
峰8的保留时间为41.03min，通过对照品比对，确定为仙茅苷。如下所示式(viii)为仙茅苷结构式。图41所示为峰8的dad图谱。图42所示为峰8的ms/ms质谱图。
三、特征峰指认
共指认了8个特征峰，由后续实验知2，6-二甲氧基苯甲酸不稳定，故不考虑定为特征峰，最终确定仙茅标准汤剂的特征峰为7个。如图43所示。其中：
峰1为苔黑酚苷；
峰2为3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷；
峰3为3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷(俗名苔黑酚龙胆二糖苷)；
峰4为corchiosidoa；
峰5为2-羟基-6-甲氧基-苯甲酸-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷；
峰6为丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷；
峰7(s)为仙茅苷。
以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。
1.一种化合物，其特征在于，所述化合物为式(vⅰ)所示的2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷：
2.一种仙茅标准汤剂，其特征在于，所述标准汤剂中含有权利要求1所述的化合物。
3.根据权利要求2所述的仙茅标准汤剂，其特征在于，所述标准汤剂中还含有苔黑酚苷，
3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，
3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
corchiosidoa，
2,6-二甲氧基苯甲酸，
2-羟基-6-甲氧基-苯甲酸-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷，
或，仙茅苷中的一种或两种以上；
优选地，所述仙茅标准汤剂中含有权利要求1所述的化合物，苔黑酚苷，3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，corchiosidoa，2,6-二甲氧基苯甲酸，2-羟基-6-甲氧基-苯甲酸-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷和仙茅苷。
4.权利要求2和3所述的仙茅标准汤剂的制备方法，其特征在于，包含下述步骤：
(1)取仙茅药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：
a.预冻：预冻温度为-50℃～-40℃；
b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；
c.二次干燥：干燥温度为0～25℃，得到仙茅标准汤剂。
5.权利要求2-3所述的仙茅标准汤剂的仙茅苷含量的测定方法，其特征在于，包含下述步骤：
(1)对照品溶液的制备：
分别称取仙茅苷对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取权利要求2或3所述的仙茅标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析：
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以水相为流动相b进行梯度洗脱，得到仙茅苷的含量。
6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，
步骤(2)中，所述溶剂选自甲醇、75％甲醇、50％甲醇、无水乙醇、75％乙醇、稀乙醇、水中的一种，优选地，所述溶剂为甲醇；
优选地，步骤(2)中，所述提取采用超声提取或回流提取中的一种；
优选地，所述提取采用超声提取；
优选地，提取时间为10-60min；
优选地，提取时间为30min。
7.权利要求2或3所述的仙茅标准汤剂的特征图谱的检测方法，其特征在于，包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
分别称取仙茅苷对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取权利要求2或3所述的仙茅标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析：
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以水相为流动相b进行梯度洗脱，得到仙茅标准汤剂的特征图谱。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述溶剂选自水、无水乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇或50％甲醇中的一种，优选地，所述溶剂为甲醇或75％甲醇。
9.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述提取采用回流提取或超声提取中的一种；
优选地，所述提取采用超声提取；
优选地，提取时间为10-60min；
优选地，提取时间为30min。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，色谱柱柱温为28-32℃；
优选地，所述色谱柱柱温为30℃。
11.根据权利要求7-10任意一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，流动相a和流动相b的流速为0.35-0.45ml/min；
优选地，所述流动相a和流动相b的流速为0.4ml/min；
优选地，所述检测波长为220nm；
优选地，所述梯度洗脱程序为：
0-11min，流动相a的体积百分比为1→1％，流动相b的体积百分比为99→99％；
11-12min，流动相a的体积百分比为1→3％，流动相b的体积百分比为99→97％；
12-17min，流动相a的体积百分比为3→3％，流动相b的体积百分比为97→97％；
17-18min，流动相a的体积百分比为3→4％，流动相b的体积百分比为97→96％；
18-27min，流动相a的体积百分比为4→4％，流动相b的体积百分比为96→96％；
27-37min，流动相a的体积百分比为4→15％，流动相b的体积百分比为96→85％；
37-42min，流动相a的体积百分比为15→15％，流动相b的体积百分比为85→85％；
42-46min，流动相a的体积百分比为15-25％，流动相b的体积百分比为85-75％；
46-50min，流动相a的体积百分比为25→35％，流动相b的体积百分比为75→65％；
50-55min，流动相a的体积百分比为35→45％，流动相b的体积百分比为65→55％；
55-55.5min，流动相a的体积百分比为45-1％，流动相b的体积百分比为55-99％；
55.5-60min，流动相a的体积百分比为1-1％，流动相b的体积百分比为99-99％。
12.根据权利要求7-11任意一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述水相选自于水、0.1wt％的磷酸水溶液、0.1wt％甲酸水溶液或者0.1wt％醋酸水溶液，优选为0.1wt％的磷酸水溶液。
13.根据权利要求7-12任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述特征谱图的特征峰不少于7个，优选的，所述特征峰不少于8个。
14.根据权利要求7-13任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述特征图谱的7个特征峰指认为：
苔黑酚苷，
3-羟基-5-甲氧基苯甲酸-β-吡喃葡萄糖苷，
3-羟基-5-氧基苯酚-1-o-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄苷，
corchiosidoa，
2,6-二甲氧基苯甲酸，
2-羟基-6-甲氧基苯甲酸-[β-d-呋喃芹菜糖-(1→6)]-β-d-吡喃葡萄糖苷，
和，仙茅苷；
优选地，所述特征峰还包括丁香酸-4-o-β-吡喃葡萄糖苷。
技术总结