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本申请要求于2019年4月24日提交的美国临时申请62/838,049、于2018年10月18日提交的美国临时申请62/747,587和于2018年10月16日提交的美国临时申请62/746,524的权益。这些申请的全部内容通过引用整体并入本文。
关于联邦资助的研究的声明
本发明在国立卫生研究院颁布的授权号5t32gm007309-44下，在政府的支持下完成。政府具有本发明的某些权利。
本发明涉及结缔组织障碍。
背景技术：
血管性埃勒斯-当洛斯综合征(vascularehlers-danlossyndrome，veds)是由col3a1基因中的杂合突变引起的遗传性结缔组织障碍。血管性eds患者具有薄的半透明皮肤、容易瘀伤、特征性的面部外观，并在大中型血管和器官(子宫、结肠)破裂时发生自发夹层，这导致过早死亡和约45岁的生存中值1。
veds的许多特征与其它遗传性血管病变，诸如马凡氏综合征(marfansyndrome，mfs)和洛伊斯·迪茨综合征(loeys-dietzsyndrome，lds)(它们已经与过度的tgf-β活性相关联)明显不同。这些特征包括在任何中型或大型血管中以及在中空器官中没有先前动脉瘤和破裂的情况下发生主动脉夹层。这些特征使疾病预测和监测变得困难或不可能，并且在大多数被诊断出veds的成年人中出现的征象是血管夹层或器官破裂，其中25％的患者在20岁前经历严重并发症1,2。因而，对于治疗veds和有关的结缔组织障碍存在未满足的需求。
技术实现要素：
本文尤其提供了用于抑制、治疗、预防和/或减轻结缔组织障碍(例如，血管病变)的严重程度的症状的组合物、制剂和方法。本主题的多个方面涉及药剂用于治疗多种结缔组织障碍的用途。在特定实施方案中，所述结缔组织障碍包含血管病变，且在某些实施方案中，所述血管病变包含血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)。
本文包括用于治疗受试者的血管病变(例如，veds)的方法。所述方法包括给所述受试者施用有效量的药剂，使得所述药剂降低细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。
在某些实施方案中，药剂抑制促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mek)、细胞外信号调节激酶(erk)、磷脂酶c(plc)、肌醇三磷酸(ip3)或蛋白激酶c(pkc)的表达，并由此抑制erk、plc、ip3或pkc的活性。
在某些实施方案中，药剂抑制与促分裂原活化蛋白激酶(mapk)通路有关的一种或多种分子(例如ras-raf/mek/细胞外信号调节激酶(erk)蛋白激酶)的活性或表达。
在实施方案中，药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。在特定实施方案中，所述药剂包含小分子。
在某些情况下，所述药剂包含小分子。小分子是具有小于2000道尔顿的质量的化合物。所述小分子的分子质量优选地小于1000道尔顿，更优选地小于600道尔顿，例如，所述化合物小于500道尔顿、小于400道尔顿、小于300道尔顿、小于200道尔顿或小于100道尔顿。
小分子是有机的或无机的。示例性的有机小分子包括、但不限于脂族烃、醇、醛、酮、有机酸、酯、单糖和二糖、芳烃、氨基酸和脂质。示例性的无机小分子包含微量矿物质、离子、自由基和代谢物。可替换地，小分子可以经合成改造，由片段或小部分或较长的氨基酸链组成，以填充酶的结合口袋。通常，小分子小于一千道尔顿。
在某些情况下，药剂包含核酸分子。例如，核糖核酸(rna)或脱氧核糖核酸(dna)抑制促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mek)、细胞外信号调节激酶(erk)、磷脂酶c(plc)、肌醇三磷酸(ip3)或蛋白激酶c(pkc)的表达，并由此抑制erk、plc、ip3或pkc的活性。在某些情况下，所述核酸包含小干扰rna(sirna)、rna干扰(rnai)、信使rna(mrna)、小发夹rna或短发夹rna(shrna)、双链核糖核酸(dsrna)、反义rna或微rna(microrna)或其任何部分。但是，熟练的技术人员可以容易地鉴别抑制/拮抗或活化/激动erk或pkc或ip3或plc的其它核酸。
本文中使用的多核苷酸、多肽或其它药剂是经纯化和/或分离的。具体地，本文中使用的“分离的”或“纯化的”核酸分子、多核苷酸、多肽或蛋白在通过重组技术生产时基本上不含有其它细胞物质或培养基，或在化学合成时基本上不含有化学前体或其它化学物质。纯化的化合物是目标化合物的至少60重量％(干重)。优选地，所述制剂为目标化合物的重量的至少75％、更优选地至少90％和最优选地至少99％。例如，纯化的化合物是期望化合物的重量的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、98％、99％或100％(w/w)的化合物。通过任何适当的标准方法，例如通过柱色谱法、薄层色谱法或高效液相色谱法(hplc)分析来测量纯度。经纯化或分离的多核苷酸(核糖核酸(rna)或脱氧核糖核酸(dna))不含有在其天然存在状态时其侧翼的基因或序列。经纯化或分离的多肽不含有在其天然存在状态时其侧翼的氨基酸或序列。纯化的还定义了无菌程度，该无菌程度对于施用给人受试者而言是安全的，例如缺乏传染性或毒性剂。
在实施方案中，所述药剂包含考比替尼或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。在其它涵盖的实施方案中，所述药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。
在替代实施方案中，所述方法还包括施用减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的活性或表达的药剂。
在实施方案中，所述方法包括施用有效量的药剂。所述药剂的有效量是约0.001mg/kg至约250mg/kg体重，例如，约0.001mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约75mg/kg、约100mg/kg、约125mg/kg、约150mg/kg、约175mg/kg、约200mg/kg、约225mg/kg或约250mg/kg体重。最终，主治医师或兽医决定适当的量和给药方案。
在某些情况下，每天至少1次、每周至少1次或每个月至少1次施用所述药剂。所述药剂可以适当地持续施用1天、1周、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月或1年的时间。在某些情况下，所述药剂每天施用，例如，每24小时施用一次。或者，所述药剂连续地或每天几次施用，例如，每1小时、每2小时、每3小时、每4小时、每5小时、每6小时、每7小时、每8小时、每9小时、每10小时、每11小时或每12小时施用一次。
此外，本文所述的方法预防血管病变(veds)或使血管病变(veds)的严重程度减轻至少约1％，例如，至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。
多种施用途径是可用的。例如，局部地、口服地、经由吸入或经由注射施用所述药剂。
受试者优选地是需要这种治疗或预防的哺乳动物，例如，已经诊断出血管病变或其倾向的受试者。所述哺乳动物是任何哺乳动物，例如，人、灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马，以及为了食物消耗而培养的家畜或动物，例如，牛、绵羊、猪、鸡和山羊。在一个优选的实施方案中，所述哺乳动物是人。
在某些方面，具有结缔组织障碍例如血管病变(和在某些实施方案中的veds)或处于遭受结缔组织障碍例如血管病变(和在某些实施方案中的veds)的风险中的受试者，具有与正常对照不同的erk或pkc蛋白或mrna的水平。在某些实施方案中，从受试者得到的试验样品包含与正常对照不同的erk或pkc蛋白或mrna的水平。例如，试验样品可以包含比正常对照高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的erk或pkc蛋白或mrna的水平。
在某些实施方案中，所述试验样品可以包含比正常对照高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、约5至约50％、约50至约75％、约75至约100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的erk或pkc活性水平。
“对照”样品或数值表示，用作与试验样品进行对比的参照(通常是已知参照)的样品。例如，试验样品可以取自试验受试者，例如，患有结缔组织障碍诸如血管病变(例如，veds)或需要诊断的受试者，并且与来自已知状况的样品进行对比，例如，没有疾病的一位受试者(或多位受试者)(阴性或正常对照)，或具有疾病的一位受试者(或多位受试者)(阳性对照)。对照也可以代表从许多试验或结果收集的平均值。本领域技术人员会认识到，可以设计对照来用于评估任意数量的参数。本领域技术人员会理解哪些对照在给定的情形下是有价值的，且能够基于与对照值的对比来分析数据。对照对于确定数据的显著性也是有价值的。例如，如果给定参数的数值在对照中是可变的，则试验样品中的变化将不被认为是显著的。
关于化合物(例如，蛋白或mrna)的术语“正常量”表示，该化合物在没有结缔组织障碍诸如血管病变(例如，veds)的个体中，或在健康或一般群体中的正常量。可以测量在试验样品中的化合物的量，并利用诸如参考极限、鉴别极限或风险定义阈值之类的技术来定义截断点和异常值(例如，关于特定veds或其症状)，从而与“正常对照”水平进行对比。正常对照水平是指，通常在已知未患有veds的受试者中发现的一种或多种化合物或组合的化合物的水平。这样的正常对照水平和截断点可以根据化合物是单独使用还是用在与其它化合物组合成指数的配方中而变化。可替换地，正常对照水平可以是，来自在临床有关时间限度内，没有形成veds或其特定症状(例如，在veds发生或试验已经具有veds的受试者的情况下)的先前试验的受试者的化合物模式数据库。
确定的水平可以与对照水平或截断水平或阈值水平相同，或者可以相对于对照水平或截断水平或阈值水平增加或减小。在某些方面，对照受试者是具有相同物种、性别、种族划分、年龄组、吸烟状况、身体质量指数(bmi)、当前治疗方案状况、医疗史或它们的组合的匹配对照，但与被诊断的受试者不同的是，所述对照没有遭受所讨论的疾病(或其症状)或没有处于该疾病的风险中。
相对于对照水平，所确定的水平可以是增加的水平。如本文中使用的，关于水平(例如，蛋白或mrna水平)的术语“增加”表示高于对照水平的任何％增加。在不同的实施方案中，相对于对照水平，增加的水平可以是至少或约5％增加、至少或约10％增加、至少或约15％增加、至少或约20％增加、至少或约25％增加、至少或约30％增加、至少或约35％增加、至少或约40％增加、至少或约45％增加、至少或约50％增加、至少或约55％增加、至少或约60％增加、至少或约65％增加、至少或约70％增加、至少或约75％增加、至少或约80％增加、至少或约85％增加、至少或约90％增加、至少或约95％增加。
相对于对照水平，确定的水平可以是降低的水平。如本文中使用的，关于水平(例如，蛋白或mrna水平)的术语“降低”表示低于对照水平的任何％降低。在不同的实施方案中，相对于对照水平，所述降低的水平可以是至少或约5％降低、至少或约10％降低、至少或约15％降低、至少或约20％降低、至少或约25％降低、至少或约30％降低、至少或约35％降低、至少或约40％降低、至少或约45％降低、至少或约50％降低、至少或约55％降低、至少或约60％降低、至少或约65％降低、至少或约70％降低、至少或约75％降低、至少或约80％降低、至少或约85％降低、至少或约90％降低、至少或约95％降低。
在某些方面，得自受试者的试验样品包含血液、血清、血浆、唾液、泪液、玻璃体、脑脊液、汗液、脑脊液或尿液。
本文还提供了治疗受试者中的结缔组织障碍的方法。所述方法包括施用有效量的药剂，其中所述药剂减少细胞外信号相关激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。在实施方案中，所述结缔组织障碍选自血管病变(例如，veds)、马凡氏综合征、洛伊斯·迪茨综合征和家族性胸主动脉瘤。其它例子包括、但不限于无肌病性皮肌炎；罕见的(bizzare)骨旁骨软骨瘤样增生；经典的埃勒斯-当洛斯综合征；皮肤脆裂症埃勒斯-当洛斯综合征；埃勒斯-当洛斯综合征；嗜酸性粒细胞性筋膜炎；大疱性表皮松解症(eb)累-卡-佩三氏病；马凡氏综合征；肢骨纹状肥大；肢骨纹状肥大伴骨斑症；混合性结缔组织病；类风湿因子阴性的多关节炎；骨样硬化伴鱼鳞病和卵巢功能早衰；吃豆人(pacman)发育异常；骨佩吉特病；家族性骨佩吉特病；多肌炎；进行性耳聋伴镫骨固定；里宾病；硬皮病；颞下颌关节强硬；20甲营养不良；血管性埃勒斯-当洛斯综合征；韦-马二氏综合征；沃施(worth)型常染色体显性的骨样硬化。在某些实施方案中，所述结缔组织障碍包含血管病变。
除了马凡氏综合征本身的治疗以外，本发明也提供了治疗多种马凡氏相关障碍的方法。在某些实施方案中，所述马凡氏相关障碍选自洛伊斯·迪茨综合征、家族性主动脉瘤、具有主动脉扩张的二叶式主动脉瓣、家族性晶状体异位(脱位的晶状体)、二尖瓣脱垂综合征、马凡氏体型、先天性挛缩性细长指(趾)(比尔斯综合征)、斯蒂克勒综合征、什普林茨恩-戈德堡综合征(shprintzen-goldbergsyndrome)、韦-马二氏综合征和埃勒斯-当洛斯综合征。
在实施方案中，用于治疗结缔组织障碍的方法包括施用药剂，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。在优选的实施方案中，所述药剂包含小分子。
在实施方案中，所述药剂包含考比替尼或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。在其它涵盖的实施方案中，所述药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。
在替代实施方案中，所述方法还包括施用减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的活性或表达的药剂。
本文还提供了用于治疗血管病变的药物组合物。在实施方案中，所述组合物包含有效量的减少细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达的药剂。所述药物组合物包含药剂，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。
通过口服施用、静脉内施用、局部施用、胃肠外施用、腹膜内施用、肌肉内施用、鞘内施用、病灶内施用、颅内施用、鼻内施用、眼内施用、心内施用、玻璃体内施用、骨内施用、大脑内施用、动脉内施用、关节内施用、真皮内施用、透皮施用、透粘膜施用、舌下施用、肠内施用、唇下施用、吹入法施用、栓剂施用、吸入施用或皮下施用，来施用本文描述的组合物。
本文还提供了用于治疗血管病变的试剂盒。在实施方案中，所述试剂盒包含1)本文描述的任何组合物的药物组合物和2)关于治疗血管病变的书面说明书。
在其它方面，涵盖用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法。在实施方案中，所述方法包括施用有效量的药剂，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。在某些实施方案中，将治疗有效量的一种或多种药剂共同施用给受试者。
在某些实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法包括，施用减少蛋白激酶c(pkc)的活性或表达的药剂。在某些实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法包括，施用减少细胞外信号调节激酶(erk)的活性或表达的药剂。在某些实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法包括，施用减少蛋白激酶c(pkc)、细胞外信号调节激酶(erk)或它们的组合的活性或表达的药剂。
在某些实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法包括施用一种药剂，该药剂减少或抑制促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mek)、细胞外信号调节激酶(erk)、磷脂酶c(plc)、肌醇三磷酸(ip3)或蛋白激酶c(pkc)的表达，并由此抑制erk、plc、ip3或pkc的活性。
在某些实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的方法包括施用一种药剂，该药剂减少或抑制与促分裂原活化蛋白激酶(mapk)通路有关的一种或多种分子(例如ras-raf/mek/细胞外信号调节激酶(erk)蛋白激酶)的活性或表达。
在某些实施方案中，所述患者是人患者。在某些实施方案中，所述患者是15岁或更大。在某些实施方案中，所述患者是成年患者。在某些实施方案中，所述患者是儿科患者。
在某些实施方案中，所述方法在一诊断出veds(或之后不久)就开始。在某些实施方案中，所述方法在患者是15岁时或第一次诊断出来时开始。
在某些实施方案中，基于veds的表型，或基于分子试验veds(例如，基于一种或多种遗传试验来确定患者具有veds，所述遗传试验是例如确定患者具有在三螺旋内的甘氨酸置换或剪接位点变体的试验)，来诊断患者。
在某些实施方案中，所述患者具有col3a1突变。在某些实施方案中，所述患者具有在三螺旋内的甘氨酸置换或剪接位点变体。在某些实施方案中，所述患者具有在胶原蛋白三螺旋的重复(gly-x-y)n序列中的甘氨酸的错义置换，和或导致同相外显子跳跃的剪接位点变体。在某些实施方案中，所述患者具有在三螺旋内的甘氨酸置换(组i)。在某些实施方案中，所述患者具有剪接位点变体、框架内插入-缺失或复制(组ii)。在某些实施方案中，所述患者具有导致单倍不足的变体(组iii)。
在某些实施方案中，在一种或多种本文所述药剂或其药学上可接受的盐的初始剂量之前，所述患者已经发生了急性veds相关的事件(例如，动脉事件诸如破裂或夹层、肠或子宫破裂)。
在某些实施方案中，与正常对照相比，所述药剂使pkc蛋白或mrna水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍。在其它实施方案中，与正常对照相比，所述药剂使pkc活性水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、5倍。
在某些实施方案中，与正常对照相比，所述药剂使细胞外信号调节激酶(erk)蛋白或mrna水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍。在其它实施方案中，与正常对照相比，所述药剂使erk活性水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、5倍。
在实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。在其它涵盖的实施例中，用于治疗结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征)的药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。
定义
除非另外定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语具有本公开所属领域的技术人员通常理解的含义。以下参考文献为技术人员提供了在本公开中使用的许多术语的一般定义：thecambridgedictionaryofscienceandtechnology(剑桥科技词典)(walker编,1988)；theglossaryofgenetics(遗传学词汇),第5版,r.rieger等人(编),springerverlag(1991)；和hale&marham,theharpercollinsdictionaryofbiology(哈珀·柯林斯生物学词典)(1991)。除非另有说明，否则本文中使用的下述术语具有在下文赋予它们的含义。
术语“药物组合物”是指，含有至少一种治疗或生物学活性剂并且适合于施用给患者的任何组合物。这些制剂中的任一种可以通过本领域众所周知的和接受的方法来制备。参见，例如，remington:thescienceandpracticeofpharmacy(雷明顿：药学科学和实践),第20版,(a.r.gennaro编),mackpublishingco.,easton,pa.,2000。
“g蛋白偶联受体(gpcr)”是指，感测细胞外的分子并激活细胞内的信号转导通路，并最终激活细胞应答的蛋白受体。gpcr被称为七次跨膜受体，因为它们穿过细胞膜七次。
“激动剂”是指，与受体结合并激活受体以产生生物应答的化学物质。激动剂引起作用，而“拮抗剂”阻断激动剂的作用，反激动剂引起与激动剂的作用相反的作用。本文中使用的术语“拮抗剂”和“抑制剂”互换使用，以表示抵消或抑制、降低或遏制其靶分子的生物学活性的任何分子。在某些实施方案中，当激动剂诱导或增加其靶分子的生物学活性时，其为“超激动剂”。在某些实施方案中，当拮抗剂抵消或抑制、降低或遏制其靶分子的生物学活性时，其为“超拮抗剂”。合适的抑制剂、拮抗剂、激动剂包括可溶性的受体、肽抑制剂、小分子抑制剂、配体融合体和抗体。
本文中使用的术语“盐”表示本文所用药剂的酸式盐或碱式盐。可接受的盐的示例性的、但非限制性的实例是无机酸(盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸等)盐、有机酸(乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸等)盐和季铵(甲基碘、乙基碘等)盐。
本文中使用的“拮抗剂”可以表示抗体或其片段、肽、多肽或其片段、小分子和抑制性核酸或其片段，其例如通过竞争激动剂的一个或多个结合位点，来干扰另一个的活性或结合，但不诱导主动应答。
“野生型”或“wt”是指在自然界中存在的种类的典型形式的表型。可替代地，与非标准的“突变体”等位基因产生的产物相比，野生型被概念化为在基因座处标准的“正常”等位基因的产物。
本文中使用的术语“施用”表示，例如将药剂转移、递送、引入或转运至需要治疗疾病或病症的受试者的任何模式。这样的模式包括、但不限于口服、局部、静脉内、腹膜内、肌肉内、真皮内、鼻内和皮下施用。
“共同施用”是指，在施用其它疗法的同时、之前不久或之后不久，施用本文所述的组合物。本公开的药剂或组合物可以单独施用或可以共同施用给患者。共同施用意在包括单独的或组合(超过一种化合物或药剂)的化合物的同时或顺序施用。如果需要，上述制剂也可以与其它活性物质组合。
本文中使用的“顺序施用”包括，两种药剂(例如，本文所述的药剂或组合物)的施用在同一天分别发生或不在同一天发生(例如，在连续几天中发生)。
本文中使用的“同时施用”包括持续时间的至少部分重叠。例如，当同时施用两种药剂(例如，本文所述的具有生物活性的任何药剂)时，它们的施用在某期望时间内发生。药剂的施用可以在同一天开始和结束。一种药剂的施用还可以在第二种药剂施用的几天前，只要两种药剂在同一天至少施用一次即可。类似地，一种药剂的施用可以延伸超出第二种药剂的施用，只要两种药剂在同一天至少一施用次即可。一种或多种生物活性剂不必每天都同时施用，以包括同时施用。
本文中使用的“间歇施用”包括药剂在一段时间内(其可以认为是“第一施用阶段”)的施用，然后是不施用或以较低维持剂量施用药剂的时间(其可以认为是“脱离阶段”)，然后是再次施用药剂的阶段(其可以认为是“第二施用阶段”)。通常，在第二施用阶段，药剂的剂量水平将与在第一施用阶段中施用的剂量水平匹配，但是可以根据医学需要增加或减少。
本文中使用的“改变”还包括基因或多肽的表达水平或活性的2倍或更多倍，例如，5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更多倍的变化。
如本文中定义的，关于蛋白抑制剂(例如，erk或pkc抑制剂，或plc或ip3抑制剂)相互作用的术语“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等意指，相对于不存在抑制剂的情况下蛋白的活性或功能，负面影响(例如，降低)蛋白的活性或功能(例如，降低erk或pkc，或plc或ip3的活性或量，降低erk或pkc，或plc或ip3的结合受体的能力，降低受体的结合erk或pkc的能力，或减少erk或pkc，或plc或ip3结合受体后的erk或pkc信号传递)。在实施方案中，抑制表示疾病或疾病的症状(例如，结缔组织障碍)的减轻。类似地，“抑制剂”是通过结合，部分地或完全地阻断、降低、防止、延迟、灭活、脱敏或下调活性来抑制靶标的化合物或蛋白。
“改善”是指减少、抑制、减弱、减少、阻止或稳定疾病的发展或进展，例如假性变态反应。
“扩增”是指增加分子的拷贝数。在一个实施例中，使用聚合酶链式反应(pcr)扩增核酸。
“结合”是指对分子具有物理化学亲和力。通过本公开的任何方法，例如，具有在细胞上表达的受体的药物/化合物，来测量结合。
在本公开中，“包括”、“包含”、“含有”、“具有”等可以具有美国专利法赋予它们的含义，并且可以表示“包括”、“包含”等；术语“基本上由……组成”或“由……组成”同样具有美国专利法赋予的含义，并且这些术语是开放式的，允许存在比所列举的内容更多的内容，只要所列举的内容的基本或新颖特征没有被比所列举的内容更多的内容的存在改变即可，但是排除了现有技术的实施方案。
“有效量”是指相对于未经治疗的患者，改善疾病的症状所需的量。用于实施本发明以治疗性处理疾病的活性化合物的有效量根据施用方式、受试者的年龄、体重和一般健康而变化。最终，主治医师或兽医将决定适当的量和给药方案。这样的量被称作“有效”量。
施用给哺乳动物的剂量和频率(单个或多个剂量)可以随多种因素而变化，例如，哺乳动物是否遭受另一种疾病，和它的施用途径；接受者的大小、年龄、性别、健康、体重、身体质量指数和饮食；正在治疗的疾病的症状的性质和程度，并行治疗的种类，来自正在治疗的疾病的并发症，或其它健康相关的问题。其它治疗方案或药剂可以与本公开的方法和药剂结合使用。对所确定的剂量的调节和操作(例如，频率和持续时间)完全在本领域技术人员的能力范围内。
对于本文所述的任何药剂，最初可以从细胞培养测定，来确定治疗有效量(例如，有效剂量或有效量)。靶浓度将是如使用本文所述或本领域已知的方法所测量的，能够实现本文所述方法的治疗药物的浓度。
如本领域众所周知的，用于人类的治疗有效量还可以根据动物模型来确定。例如，可以配制用于人类的剂量，以实现已经发现在动物中有效的浓度。如上所述，通过监测药剂的有效性，并向上或向下调节剂量，可以调节在人类中的剂量。基于上述方法和其它方法来调节剂量，以实现在人类中的最大效力，这完全在普通技术人员的能力范围内。
剂量可以根据患者的需求和所使用的治疗药物而变化。施用给患者的剂量应足以随着时间的推移在患者中产生有益的治疗应答。剂量的大小也将取决于任何不利副作用的存在、性质和程度。对于特定情况的适当剂量的决定，是在从业人员的技术范围内。通常，以小于药剂的最佳剂量的较小剂量开始治疗。此后，以小增量提高剂量，直至达到在现实情况下的最佳效果。剂量和间隔时间可单独调节，以提供对所治疗的特定临床适应症有效的施用药剂的水平。这将提供与个体的疾病状态的严重程度相称的治疗方案。
用于治疗veds、治疗马凡氏综合征和/或改变plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的表达或活性的本公开的药剂(例如，药理学抑制剂)的有效剂量可以是约0.001mg/kg至约0.01mg/kg的药剂、约0.01mg/kg至约0.1mg/kg的药剂、约0.1mg/kg至约1.0mg/kg的药剂、约1.0mg/kg至约5.0mg/kg的药剂、约5.0mg/kg至约10mg/kg的药剂、约10mg/kg至约15mg/kg的药剂、约15mg/kg至约20mg/kg的药剂、约20mg/kg至约25mg/kg的药剂、约25mg/kg至约30mg/kg的药剂、约30mg/kg至约35mg/kg的药剂、约35mg/kg至约40mg/kg的药剂、约40mg/kg至约45mg/kg的药剂、约45mg/kg至约50mg/kg的药剂、约50mg/kg至约55mg/kg的药剂、约55mg/kg至约60mg/kg的药剂、约60mg/kg至约65mg/kg的药剂、约65mg/kg至约70mg/kg的药剂、约70mg/kg至约75mg/kg的药剂、约75mg/kg至约80mg/kg的药剂、约80mg/kg至约85mg/kg的药剂、约85mg/kg至约90mg/kg的药剂、约90mg/kg至约95mg/kg的药剂或约95mg/kg至约100mg/kg的药剂。
在某些方面，本公开包括具有有效剂量的本公开的一种或多种药剂的组合物，其中所述药剂可以是所述组合物的约0.1％至约20％w/v。除非有相反的明确指示，否则组分的重量％是基于在其中包含该组分的制剂或组合物的总重量。
例如，本文公开的药剂的有效剂量可以为组合物的约0.001％-约0.01％、约0.01％-约0.1％、约0.1％-约1.0％、约1.0％-约2.0％、约2.0％-约3.0％、约3.0％-约4.0％、约4.0％-约5.0％、约5.0％-约6.0％、约6.0％-约7.0％、约7.0％-约8.0％、约8.0％-约9.0％、约9.0％-约10％、约10％-约11％、约11％-约12％、约12％-约13％、约13％-约14％、约14％-约15％、约15％-约16％、约16％-约17％、约17％-约18％、约18％-约19％或约19％-约20％w/v。
本文中使用的术语“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”表示将药剂或制剂施用于患有不良病症、障碍或疾病的临床症状的个体，从而实现症状的严重程度和/或频率的降低，消除症状和/或它们的根本原因，和/或促进损伤的改善或补救。
本文中使用的术语“受试者”、“患者”、“个体”等不意图是限制性的，并且通常可以互换。被描述为“受试者”、“患者”、“个体”等的个体不一定患有给定的疾病，而可能只是在寻求医疗指导。本文中使用的术语“受试者”、“患者”、“个体”等包括可能遭受指定障碍的动物界的所有成员。在某些方面，所述受试者是哺乳动物，且在某些方面，所述受试者是人。
本文中使用的术语“样品”表示出于体外评价目的而获得的生物样品。在实施方案中，样品可以包含体液。在某些实施方案中，体液包括、但不限于从受试者获得的全血、血浆、血清、淋巴液、母乳、唾液、粘液、精液、细胞提取物、炎症性流体、脑脊液、玻璃体液、泪液、玻璃体、房水或尿液。在某些方面，样品是两种或更多种体液的复合物(compositepanel)。在示例性方面，样品包含血液或其级分(例如，血浆、血清或通过白细胞去除术得到的级分)。
本文提供的范围应理解为该范围内所有值的简写。例如，1-50的范围应理解为包括来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的集合的任何数字、数字的组合或子范围，以及在前述整数之间的所有插入十进制数值，例如，1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8和1.9。关于子范围，特别涵盖从该范围的任一端点延伸的“嵌套子范围”。例如，1-50的示例性范围的嵌套子范围可以在一个方向上包括1-10、1-20、1-30和1-40，或在另一个方向上包括50-40、50-30、50-20和50-10。
“重组(的)”是指如下形成的核酸分子：通过基因重组的实验室方法(例如分子克隆)，将来自多种来源的遗传物质聚在一起，从而产生在生物有机体中否则不会发现的序列。
本文中关于dna核酸序列(例如基因)使用的词语“表达”或“表达的”是指该序列的转录和/或翻译产物。基于在细胞内存在的相应mrna的量或由细胞产生的dna所编码的蛋白的量，可以确定dna分子在细胞中的表达水平(sambrook等人,1989molecularcloning:alaboratorymanual(分子克隆：实验指南),18.7-18.88)。当关于多肽使用时，表达包括在多肽生产中涉及的任何步骤，包括、但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。表达可以使用检测蛋白的常规技术(例如，elisa、蛋白质印迹法、流式细胞计量术、免疫荧光、免疫组织化学等)来检测。
“减少”是指至少10％、25％、50％、75％或100％的负改变。
“参考”是指标准或对照条件。
除非特别说明或者从上下文显而易见，否则本文中使用的术语“一种”、“一个”和“所述”应理解为单数或复数。除非特别说明或者从上下文显而易见，否则本文中使用的术语“或”理解为是包含性的。
除非特别说明或者从上下文显而易见，否则本文中使用的术语“约”被理解为在本领域通常容忍的范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可以被理解为在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非从上下文另外清楚，否则本文提供的所有数值均由术语“约”修饰。
本文中使用的术语“衍生物”表示具有从母体化合物(例如，本文公开的化合物)的结构衍生出的结构的化合物，并且其结构与本文公开的那些充分相似，并且基于该相似性，本领域技术人员会预见到其表现出与要求保护的化合物相同或相似的活性和效用，或作为前体诱导与要求保护的化合物相同或相似的活性和效用。示例性的衍生物包括母体化合物的盐，酯，酰胺，酯或酰胺的盐，和n-氧化物。
考虑本文公开的每个实施方案可应用于其它公开的实施方案中的每一个。因此，本文描述的各种要素的所有组合都在本发明范围内。
从本发明的优选实施方案的以下描述中以及从权利要求书中，会明白本发明的其它特征和优点。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等效的方法和材料都可以用于实践或试验本发明，但是下面描述了适合的方法和材料。本文引用的所有公开的外国专利和专利申请通过引用并入本文。由本文引用的登录号指示的genbank和ncbi提交文件通过引用并入本文。本文引用的所有其它公开的参考文献、文件、手稿和科学文献通过引用并入本文。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，所述的材料、方法和实施例仅仅是示例性的，无意成为限制性的。
附图说明
图1a是证实g209s/ 小鼠模型重现了血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)表型的图形。显示了相对于年龄的存活百分比。生存中值为400天，p<0.0001。
图1b是证实g938d/ 小鼠模型重现了veds表型的图形。显示了相对于年龄的存活百分比。生存中值为45天，p<0.0001。
图1c是描绘veds小鼠的心脏和主动脉的图像。箭头(左侧)指示升主动脉，且红色箭头(右侧)指示降主动脉中主动脉夹层的部位。
图1d是证实veds样品与对照分开聚类的图形，指示veds主动脉的转录组中的显著差异。
图1e是证实网络分析的例示图，该网络分析指示veds主动脉显示出促分裂原活化蛋白激酶(mapk)活性(p38、jnk、akt、erk、erk1/2)升高的基因表达谱。
图1f是一张表格，说明上游分析预测veds主动脉中的转录差异是由g蛋白偶联受体(gpcr)活化驱动，其通过相关的plc/ip3/pkc/erk轴传递信号。
图1g是免疫印迹和图形，其通过对穿过该通路的主动信号传递的标志物进行免疫印迹法证明了gpcr和mapk信号传递的升高的标记。发现erk1/2磷酸化和pkc磷酸化在veds主动脉中显著更高。
图2a的图形描绘了用考比替尼(cobimetinib)(fda批准的mek抑制剂)处理的小鼠的存活率。与未处理的仅55％存活率相比，在处理45天后观察到94％的存活率。
图2b的图形描绘了用芦布妥林(ruboxistaurin)(良好耐受的口服施用的具有药理作用的药剂，其特异性地抑制pkcβ)处理的小鼠的存活率。与未处理的仅55％存活率相比，在处理39天后观察到100％的存活率。
图2c的图形描绘了用肼屈嗪(hydralazine)(其阻断plc/ip3/pkc/erk轴)处理的小鼠的存活率。在45天龄(未治疗的veds小鼠的生存中值)观察到98％存活率的保护。
图3a的图形描绘了在本文描述的veds小鼠模型中，妊娠和泌乳与veds小鼠中由于产后前30天的动脉夹层引起的60％致死率有关。
图3b的图形描绘了通过出生后移走幼崽来阻止泌乳，能够预防veds小鼠的夹层和死亡，观察到100％的存活率。
图3c的图形描绘了在用肼屈嗪(16mg/kg/天)处理后达到接近完全存活率(95％)，所述肼屈嗪阻断被缩宫素活化的plc/ip3/pkc/erk轴。
图3d的图形描绘了用1mg/kg/天的曲美替尼(trametinib)(gsk-1120212)(fda批准的mek抑制剂，所述mek是活化erk的激酶)处理后，观察到保护(95％存活率)。
图3e的柱形图描绘了如通过免疫印迹法所测量的，增加的死亡风险与erk活化的增加相关，而免于主动脉夹层的保护与erk活化的减少相关。
图3f的柱形图描绘了如通过erk靶基因表达所测量的，增加的死亡风险与erk活化的增加相关，而免于主动脉夹层的保护与erk活化的减少相关。
图4a是免疫印迹图像，如通过对主动脉裂解物的免疫印迹所评估的，表明pkcβ的药理学抑制阻止了主动脉壁中pkc的自磷酸化以及erk的磷酸化，并指示mek的药理学抑制与预期的erk(mek的下游底物)的磷酸化减少有关，而且奇怪的是也与减少的pkc磷酸化有关，表明正反馈回路的存在。
图4b和图4c是描绘对免疫印迹图像进行量化的图形，其描绘了pkcβ的药理学抑制阻止了主动脉壁中的pkc的自磷酸化以及erk的磷酸化，而mek的药理学抑制与预期的erk(mek的下游底物)的磷酸化减少有关，而且奇怪的是也与减少的pkc磷酸化有关，表明正反馈回路的存在(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。考比替尼和芦布妥林均未对血压产生影响。
图5a和图5b的图形描绘了用肼屈嗪(32mg/kg/d)(其阻断plc/ip3/pkc/erk轴)处理的小鼠提供了显著的保护：在45天龄(未治疗的veds小鼠的生存中值)具有98％的存活率，并且存活率在青春期受到影响，并且几乎仅在雄性小鼠中看到了这种风险(图5a雄性小鼠和图5b雌性小鼠)。
图6的图形描绘了与仅用肼屈嗪治疗的雄性小鼠中仅24％存活率相比，肼屈嗪(32mg/kg/d)与比卡鲁胺(bicalutamide)(50mg/kg/d)的组合在雄性小鼠中导致90％存活率。雄性小鼠在青春期后在去除比卡鲁胺后继续存活，从而提示在该小鼠模型中存在雄激素敏感性的时间依赖性。
图7的图形描绘了仅用比卡鲁胺处理的雄性小鼠导致约80％的中间存活率，并且雄性在青春期后在去除比卡鲁胺后不能继续存活，提示仅抑制雄激素信号传递不足以在我们的veds小鼠模型中预防主动脉疾病。
图8a和图8b的图形描绘了仅用螺内酯(100mg/kg/d)处理的小鼠表现出约80％的中间存活率，类似于单独的比卡鲁胺，但是螺内酯(100mg/kg/d)和肼屈嗪(32mg/kg/d)的组合导致处理50天后的100％存活率，类似于肼屈嗪和比卡鲁胺的组合。
图9的图形描绘了用较高剂量的肼屈嗪处理的小鼠具有增加的肼屈嗪剂量(50mg/kg/d)，且它们的存活率没有比32mg/kg/d剂量得到更高的改善。
图10a的图形描绘了在仍处于哺乳期的veds小鼠中，在小鼠的处理中添加特异性缩宫素受体拮抗剂2会导致在产后前30天的95％存活率，这表明由于主动脉夹层和妊娠引起的显著升高的死亡风险被母乳喂养期间缩宫素受体的激活特异性驱动。
图10b的图形描绘了普萘洛尔(propranolol)(降低veds小鼠中的血压的非特异性β拮抗剂)在仍处于哺乳期的veds小鼠中没有改善产后前30天的存活率，这表明由于主动脉夹层和妊娠引起的显著升高的死亡风险没有通过降低血压而得到改善。
图11a的图形指示，通过用血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦(losartan)(60mg/kg/d)处理小鼠，对血管紧张素-ii信号传递的抑制没有表现出对存活率的影响(图11a)。用凝血酶受体拮抗剂伏拉帕沙(vorapraxar)(1mg/kg/d)处理小鼠发现它也对存活率没有影响(图11b)。
图12的图形描绘了用非特异性的酪氨酸激酶受体拮抗剂尼达尼布(nintedanib)(50mg/kg/d)处理小鼠对存活率没有影响，从而提示，酪氨酸激酶受体活化没有在veds小鼠中驱动plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化。
图13a-图13c的图形描绘了用非特异性的β拮抗剂普萘洛尔(80mg/kg/d)(图13a)、特异性的β1拮抗剂阿替洛尔(atenolol)(120mg/kg/d)(图13b)和β1拮抗剂/β2激动剂塞利洛尔(celiprolol)(200mg/kg/d)(图13c)处理小鼠表明，这些操作尽管降低血压，但都没有导致我们的veds小鼠模型中的存活率的改善。
图14的图形描绘了塞利洛尔(其加速小鼠模型中主动脉夹层的风险)和具有col3a1g209s/ 突变的veds突变，也表现出主动脉夹层由于塞利洛尔的风险增加。
图15的图形描绘了氨氯地平(amlodipine)(12mg/kg/d)也在小鼠模型中增加主动脉夹层的风险，且这已经被证实也与mfs小鼠一致。
图16a的图形证实了使用第二种特异性pkcβ抑制剂恩扎妥林(enzastaurin)对pkcβ的药理学抑制。图16a：恩扎妥林(60mg/kg/d)也挽救了主动脉夹层的死亡风险，80％的经恩扎妥林处理的veds小鼠在处理40天后存活，而未经处理的veds小鼠仅50％存活(p＝0.0305)。
图16b的图形证实了用内皮缩血管肽-受体拮抗剂波生坦(bosentan)处理小鼠改善了存活率。图16b：波生坦处理导致在处理40天后的80％的存活率，而未经处理的veds小鼠仅为50％的存活率(p＝0.0298)。
图17是免疫荧光染色，表明来自具有veds的人患者的血管组织样品中升高的信号传递通路。图17证实了来自veds患者的两个组织样品(髂动脉和降胸主动脉)中的pkc磷酸化。
图18是免疫荧光染色，表明来自具有veds的人患者的血管组织样品中升高的信号传递通路。图18证实了来自veds患者的两个组织样品(髂动脉和降胸主动脉)中的erk1/2磷酸化。
图19的图形证实了芦布妥林处理会减少129mfs小鼠中的主动脉根的生长。
具体实施方式
本发明至少部分地基于对促进veds的发病机制的新的、可靶向的信号传递异常的鉴定。具体地，观察到，抑制erk1/2活化或pkc活化的具有药理作用的药剂，能够成功地预防由于主动脉夹层引起的死亡。此外，抑制plc/ip3/pkc/erk信号传递通路活化的药剂也会防止由于主动脉夹层引起的死亡。总之，这些新颖的发现为可靶向的信号传递异常提供了第一个证据，其中该信号传递异常促进veds的发病机制和潜在的其它血管病变以及其它结缔组织障碍。
血管病变
血管病变是用于描述影响血管的疾病的术语。它经常包括由退行性、代谢性和炎症性疾病，栓塞性疾病，凝血性障碍和功能性障碍(诸如后部可逆性脑病综合征)造成的血管异常。血管病变的病因通常是未知的，并且该病通常未在病理学上得到证实。另一方面，血管炎是更具体的术语，并且被定义为血管壁的炎症。
本文中使用的“血管炎(脉管炎)”表示血管的炎症，例如，动脉炎、静脉炎或淋巴管，例如，淋巴管炎。血管炎可以呈现多种形式，诸如皮肤血管炎、荨麻疹性血管炎、白细胞碎裂性血管炎、青斑脉管炎和结节性血管炎。小血管血管炎可以表示小或中型血管或淋巴管，例如毛细血管、微静脉、微动脉和动脉的炎症。
血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)
血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)是由胶原蛋白iii型α1链(col3a1)基因中的杂合突变引起的遗传性结缔组织障碍。veds的主要死因是动脉夹层和/或破裂，但对该病的发病机制知之甚少。没有针对这种破坏性病症的有效治疗策略。目前的观点是，由于组织的结构完整性的固有损失，减少的胶原蛋白iii的量直接导致veds的征象和症状。但是，马凡氏综合征(mfs)的早期致病模型也异常地引起了由失败的弹性组织发生(elastogenesis)所导致的组织虚弱，但随后的工作清楚地证明了在缺乏微纤维蛋白-1(在mfs中缺失的基因产物3,4)的小鼠模型中增强的转化生长因子β(tgf-β)的信号传递。后续工作继续表明，tgf-β和下游细胞信号传递分子是疾病病理的主要介质。此外，减弱tgf-β信号传递和有关通路的疗法，诸如tgf-β中和抗体(nab)、血管紧张素-ii(ang-ii)1型受体阻滞剂(arb)氯沙坦或erk1/2活化抑制剂rdea119/曲美替尼，可以抑制mfs小鼠中的主动脉疾病3-6。
但是，类似于其它遗传性血管病变诸如马凡氏综合征和洛伊斯·迪茨综合征，本文提供的信号传递异常是veds中的疾病病理的主要介质。对具有患者衍生的col3a1突变的小鼠主动脉进行的rna-seq图谱表明，其具有与野生型主动脉相比升高的plc/ip3/pkc/erk信号传递。近侧降胸主动脉的免疫印迹法证实了升高的pkc和erk1/2活化。
在某些实施方案中，col3a1包含下述氨基酸序列(ncbi登记号：aah28178.1(seqidno:1)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，col3a1包含下述核酸序列，开始和终止密码子用粗体和下划线表示(ncbi登记号：nm_000090.3(seqidno:2)，通过引用整体并入本文)：
map/erk通路
mapk/erk通路(也被称作ras-raf-mek-erk通路)是细胞中的蛋白链，其将信号从细胞表面上的受体传递到细胞核中的dna。
当信号传递分子与细胞表面上的受体结合时，信号传递开始，当细胞核中的dna表达蛋白并在细胞中产生某种变化(诸如细胞分裂)时，信号传递结束。该通路包括许多蛋白，包括mapk(促分裂原活化蛋白激酶，最初称为erk，细胞外信号调节激酶)，它们通过向邻近蛋白添加磷酸基团进行通信，所述磷酸酯基团充当“开”或“关”的开关。
术语“erk”表示任何人erk1或erk2基因或蛋白。erk1已知有几个名称，包括、例如，促分裂原活化蛋白激酶3、细胞外信号调节激酶1、胰岛素刺激的map2激酶、map激酶1、mapk1、p44-erk1、ert2、p44-mapk或微管相关蛋白2激酶。
erk2已知有几个名称，包括、例如，促分裂原活化蛋白激酶1、细胞外信号调节激酶2、促分裂原活化蛋白激酶2、map激酶2、mapk2、p42-mapk或ert1。
在某些实施方案中，erk1包含下述氨基酸序列(ncbi登记号：p27361.4(seqidno:3)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，所述erk1包含下述核苷酸序列，编码区用粗体和下划线表示(ncbi登记号：x60188.1(seqidno:4)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，erk2包含下述氨基酸序列(ncbi登记号：p28482.3(seqidno:5)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，所述erk2包含下述核苷酸序列，编码序列用粗体和下划线表示(ncbi登记号：nm_138957.3(seqidno:6)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，本公开提供了用于在有此需要的受试者中治疗血管病变(例如，veds)的方法，所述方法包括给所述受试者施用药物组合物，其包含治疗有效量的降低erk的活性或表达的药剂。erk抑制剂的例子包括asn007(艾萨拉生物科学公司(asanabiosciences),布里奇沃特(bridgewater),新泽西)、乌立替尼(ulixertinib)(bvd-523)(生物医学谷发现(biomedvalleydiscoveries),堪萨斯城(kansascity),mo)、cc-90003(赛尔基因公司(celgenecorporation),萨米特(summit),新泽西)、gdc-0994(阵列生物医药(arraybiopharma),博尔德(boulder),co)、ko-947(库拉肿瘤学(kuraoncology),圣地亚哥,加利福尼亚)、ltt462(诺华(novartis),巴塞尔,瑞士)、ly3214996(礼来公司(elilillyandcompany),印第安纳波利斯(indianapolis),in)、mk-8353(默克&默沙东公司(mercksharpanddohmecorp),凯尼尔沃思(kenilworth),nj)。
mek抑制剂
在实施方案中，本公开提供了在有此需要的受试者中治疗血管病变(例如，veds)的方法，所述方法包括给所述受试者施用药物组合物，其包含治疗有效量的减少erk或pkc的活性或表达的药剂。例如，ras/raf/mek/erk通路抑制剂。在实施方案中，所述ras通路抑制剂选自raf抑制剂诸如威罗菲尼、索拉非尼或达拉菲尼，mek抑制剂诸如azd6244(司美替尼)、pd0325901、gsk1120212(曲美替尼)、u0126-etoh、pd184352、rdea119(拉法替尼(rafametinib))、pd98059、bix02189、mek162(比美替尼)、as-703026(匹马赛替尼(pimasertib))、sl-327、bix02188、azd8330、tak-733、考比替尼或pd318088，和erk抑制剂诸如ly3214996、bvd-523或gdc-0994。
在实施方案中，所述mek抑制剂选自曲美替尼、拉法替尼、考比替尼、tak-733、pd0325901、pd184352(ci-10-40)、r05126766、ro-4987655；e6201；gdc-0623；ch5126766；g-573；wx-554；司美替尼、比美替尼和匹马赛替尼。在实施方案中，所述mek抑制剂包含考比替尼。在实施方案中，所述mek抑制剂包含曲美替尼。在实施方案中，所述mek抑制剂包含曲美替尼和考比替尼。在实施方案中，也随同涵盖mek抑制剂或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，可以以约0.001mg/kg至约250mg/kg体重的浓度，例如，0.001mg/kg、0.05mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、75mg/kg、100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg、200mg/kg、225mg/kg或250mg/kg体重的浓度，来施用mek抑制剂。
蛋白激酶c(pkc)抑制剂
蛋白激酶c(通常缩写为pkc)是一蛋白激酶家族或该家族的成员，其通过磷酸化其它蛋白上的丝氨酸和苏氨酸残基的羟基，来参与控制这些蛋白的功能。pkc酶转而被信号，诸如二酰甘油(dag)或钙离子(ca2 )的浓度增加活化。因而，pkc酶在几个信号转导级联中起重要作用。pkc家族在人类中由15种同工酶组成，并根据其第二信使要求分为三个亚家族：常规的(或经典的)、新颖的和非典型的。常规的pkc含有异形体α、βi、βii和γ。这些需要ca2 、dag和磷脂诸如磷脂酰丝氨酸才能活化。新颖的(n)pkc包括δ、ε、η和θ异形体，并且活化需要dag，但不需要ca2 。因而，常规的和新颖的pkc通过与磷脂酶c相同的信号转导通路被活化。另一方面，非典型的(a)pkc(包括蛋白激酶mζ和ι/λ异形体)的活化既不需要ca2 也不需要二酰甘油。本文中使用的术语“蛋白激酶c”通常表示异形体的整个家族。
示例性的pkc药剂包括、但不限于芦布妥林、白屈菜红碱、宫本醇(miyabenol)c、杨梅苷、棉酚、毛蕊花糖苷、bim-1或苔藓抑素1。在实施方案中，所述pkc抑制剂包含恩扎妥林。在实施方案中，所述pkc抑制剂包含芦布妥林。在实施方案中，也随同涵盖pkc药剂或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，所述pkc抑制剂可以具有以下结构：
其中：
环a是被取代的或未被取代的c5-c6环烷基，被取代的或未被取代的5-6元杂环烷基且具有一个或多个n、o或s环成员，被取代的或未被取代的苯基，或被取代的或未被取代的5-6元杂芳基且具有一个或多个n、o或s环成员；
每个r1和r2独立地是氢、卤素、-n3、-cn、-no2、-nrarb、-c(o)rc、-c(o)-orc、-c(o)nrarb、-ord、-nrac(o)rc、-nrac(o)orc、被取代的或未被取代的烷基(例如，c1-c2、c1-c4、c1-c8或c1-c10)、被取代的或未被取代的杂烷基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的2-8元、2-6元、4-6元、2-3元或4-5元)、被取代的或未被取代的环烷基(例如，c3-c8、c3-c6、c4-c6或c5-c6)、被取代的或未被取代的杂环烷基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的3-8元、3-6元、4-6元、4-5元或5-6元)、被取代的或未被取代的芳基(例如，c6-c10或苯基)或被取代的或未被取代的杂芳基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的5-10元、5-9元或5-6元)；或者
r1和r2连接在一起，以形成被取代的或未被取代的亚烷基(例如，c1-c2、c1-c4、c1-c8、c1-c10)或被取代的或未被取代的亚杂烷基(例如，在亚杂烷基链中具有一个或多个n、o或s的2-8元、2-6元、4-6元、2-3元或4-5元)、被取代的或未被取代的亚环烷基(例如，c3-c8、c3-c6、c4-c6或c5-c6)、被取代的或未被取代的亚杂环烷基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的3-8元、3-6元、4-6元、4-5元或5-6元))、被取代的或未被取代的亚芳基(例如，c6-c10或亚苯基)或被取代的或未被取代的亚杂芳基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的5-10元、5-9元或5-6元))接头；
其中每个ra、rb、rc和rd在每次出现时独立地是氢、被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被取代的杂烷基(例如具有一个或多个n、o或s原子的2-8元)、被取代的或未被取代的环烷基(例如2-3元)、被取代的或未被取代的杂环烷基((例如，具有一个或多个n、o或s环成员的3-8元)、被取代的或未被取代的芳基诸如苯基，或被取代的或未被取代的杂芳基(例如，具有一个或多个n、o或s环成员的5-10元)。
在某些实施方案中，所述环a是可以包括一个或多个氮作为环成员的5-6元杂芳基。
在某些实施方案中，所述pkc抑制剂可以具有以下结构：
在某些实施方案中，所述pkc抑制剂可以具有以下结构：
在某些实施方案中，所述pkc抑制剂可以具有以下结构：
在某些实施方案中，关于式(i)、(ii)、(iii)、(iv-a)或(iv-b)的pkc抑制剂，每个r1和r2是氢、被取代的或未被取代的c1-c4烷基、被取代的或未被取代的2-6元杂烷基(例如具有一个或多个n、o或s成员)、被取代的或未被取代的c3-c6环烷基、被取代的或未被取代的5-10元杂环烷基(例如具有一个或多个n、o或s环成员)、被取代的或未被取代的苯基或被取代的或未被取代的5-10元杂芳基(例如具有一个或多个n、o或s环成员)。在某些实施方案中，每个r1和r2独立地是氢、被取代的或未被取代的c1-c4烷基或具有一个或多个n、o或s环成员的被取代的杂环烷基。在某些实施方案中，每个r1和r2独立地是氢或未被取代的c1-c4烷基。
在某些实施方案中，关于式(ii)的pkc抑制剂，r1是被取代的或未被取代的哌啶基、哌嗪基、吡啶基或嘧啶基。例如，r1是
在某些实施方案中，r2是氢或未被取代的c1-c4烷基。在某些实施方案中，r2是氢。在某些实施方案中，r2是甲基。在某些实施方案中，r2是乙基。在某些实施方案中，r2是丙基。在实施方案中，r2是丁基。在某些实施方案中，r2是叔丁基。
在某些实施方案中，关于式(i)、(ii)、(iii)、(iv-a)或(iv-b)的pkc抑制剂，r1和r2彼此连接，以形成被取代的或未被取代的c1-c8亚烷基，或在亚杂烷基链中具有一个或多个n、o或s原子的被取代的或未被取代的2-8元亚杂烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成被取代的或未被取代的c1-c8亚烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成被取代的c1-c8亚烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成未被取代的c1-c8亚烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成在亚杂烷基链中具有一个或多个n、o或s原子的2-8元亚杂烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成在亚杂烷基接头链中具有一个或多个n、o或s原子的未被取代的2-8元亚杂烷基接头。
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，关于式(iv-a)或(iv-b)的pkc抑制剂，r1和r2彼此连接以形成被取代的或未被取代的c5-c6亚环烷基接头。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成被取代的c5-c6亚环烷基接头，例如，其可以被一个或多个上述的r3取代。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成未被取代的c5-c6亚环烷基接头。
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成被取代的或未被取代的5-6元亚杂环烷基接头(例如在接头链中具有一个或多个n、o或s原子)。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成在接头链中具有一个或多个n、o或s原子的被取代的5-6元亚杂环烷基接头，例如，其可以被上述的r3取代。在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成在接头链中具有一个或多个n、o或s原子的未被取代的5-6元亚杂环烷基接头。
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，r1和r2彼此连接以形成
在某些实施方案中，关于式(iii)的pkc抑制剂，每个r1和r2独立地是氢，被取代的或未被取代的c1-c4烷基，或被取代的或未被取代的5-6元杂环烷基且具有一个或多个n、o或s环成员。在某些实施方案中，r1是未被取代的c1-c4烷基。在某些实施方案中，r1是具有一个或多个n、o或s环成员的被取代的5-6元杂环烷基，其可以被一个或多个上述的r3取代。在某些实施方案中，r1是具有一个或多个n、o或s环成员的被取代的5-6元杂环烷基，其可以被一个或多个上述的r3取代。在某些实施方案中，r1是被取代的或未被取代的哌啶基或哌嗪基。在某些实施方案中，r1是被取代的哌啶基或哌嗪基，其可以被一个或多个上述的r3取代。在某些实施方案中，r1是未被取代的哌啶基或哌嗪基。在某些实施方案中，r1是
在某些实施方案中，r2是氢。在实施方案中，r2是甲基。
如以上所讨论的，“被取代的”基团在一个或多个可用位置(通常1、2、3、4或5个位置)处被氢以外的一个或多个合适的基团(其可以相同或不同)取代。例如，卤素、氰基、氨基、羟基、硝基、叠氮基、羧酰氨基、-cooh、so2nh2、烷基(例如，c1-c8烷基)、烯基(例如，c2-c8烯基)、炔基(例如，c2-c8炔基)、烷氧基(例如，c1-c8烷氧基)、烷基醚(例如，c2-c8烷基醚)、烷硫基(例如，c1-c8烷硫基)、单-或二-(c1-c8烷基)氨基、卤代烷基(例如，c1-c6卤代烷基)、羟基烷基(例如，c1-c6羟基烷基)、氨基烷基(例如，c1-c6氨基烷基)、卤代烷氧基(例如，c1-c6卤代烷氧基)、烷酰基(例如，c1-c8烷酰基)、烷酮(例如，c1-c8烷酮)、烷酰氧基(例如，c1-c8烷酰氧基)、烷氧基羰基(例如，c1-c8烷氧基羰基)、单-和二-(c1-c8烷基)氨基、单-和二-(c1-c8烷基)氨基c1-c8烷基、单-和二-(c1-c8烷基)羧酰氨基、单-和二-(c1-c8烷基)磺酰氨基、烷基亚磺酰基(例如，c1-c8烷基亚磺酰基)、烷基磺酰基(例如，c1-c8烷基磺酰基)、芳基(例如，苯基)、芳基烷基(例如，(c6-c18芳基)c1-c8烷基，诸如苄基和苯乙基)、芳氧基(例如，c6-c18芳氧基诸如苯氧基)、芳基烷氧基(例如，(c6-c18芳基)c1-c8烷氧基)和/或具有一个或多个n、o或s环成员的3-8元杂环基团。
如本文提及的，具有指定数目的“成员”或“元”的基团表示具有指定数目的原子的基团。
示例性的pkc抑制剂可以包括
在某些实施方案中，给受试者施用蛋白激酶抑制剂，或抑制参与蛋白激酶或生长因子信号传递通路中的受体(诸如egfr、vegfr、akt、erb1、erb2、erbb、syk、bcr-abl、jak、src、gsk-3、pi3k、ras、raf、mapk、mapkk、mtor、c-kit、eph受体)的单克隆抗体，或braf抑制剂。蛋白激酶或生长因子信号传递通路抑制剂的非限制性例子包括阿法替尼、阿昔替尼、贝伐珠单抗、波舒替尼、西妥昔单抗、克唑替尼、达沙替尼、厄洛替尼、福他替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、乐伐替尼、木利替尼、尼洛替尼、帕木单抗、帕唑帕尼、培加尼布、雷珠单抗、鲁索替尼、沙拉替尼、索拉非尼、舒尼替尼、曲妥珠单抗、凡他尼布、ap23451、威罗菲尼、mk-2206、gsk690693、a-443654、vqd-002、米替福新、哌立福新、cal101、px-866、ly294002、雷帕霉素、坦罗莫司、依维莫司、地磷莫司、阿伏西地、染料木黄酮、司美替尼、azd-6244、伐拉尼布、p1446a-05、ag-024322、zd1839、p276-00、gw572016或其混合物。
在某些实施方案中，可以以约0.001mg/kg至约250mg/kg体重的浓度，例如，0.001mg/kg、0.05mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、75mg/kg、100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg、200mg/kg、225mg/kg或250mg/kg体重，施用减少pkc的活性或表达的药剂。
在某些实施方案中，pkc包含下述氨基酸序列(ncbi登记号：np_002728.1(seqidno:7)，通过引用整体并入本文)：
在某些实施方案中，所述pkc包含下述核苷酸序列，编码序列用粗体和下划线表示(ncbi登记号：nm_002737.2(seqidno:8)，通过引用整体并入本文)：
减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的表达或活性的药剂
在某些实施例中，使用某些充当血管扩张剂的药剂来阻断plc或ip3的活性或表达。在实施方案中，所述plc抑制剂包含u-73122、u73343和et-18-och3。在实施方案中，ip3抑制剂包含2-apb和光溜海绵素(xestospongin)c。在实施方案中，所述药剂包含肼屈嗪。预期抑制剂可以单独使用或以任何组合使用。在实施方案中，也随同涵盖plc或ip3抑制剂或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，以约0.001mg/kg至约250mg/kg体重的浓度，例如，0.001mg/kg、0.05mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、75mg/kg、100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg、200mg/kg、225mg/kg或250mg/kg体重的浓度，来施用减少plc或ip3的活性或表达的药剂。在其它实施方案中，预期可以以更高的浓度，例如最高至1000mg/kg体重的浓度，来施用所述药剂。
在某些实施方案中，涵盖与雄激素拮抗剂(例如，抗雄激素)的联合疗法。抗雄激素是一类阻止雄激素如睾酮和二氢睾酮(dht)介导其在体内的生物学作用的药物。它们通过阻断雄激素受体(ar)和/或抑制或遏制雄激素产生而起作用。示例性的抗雄激素包括：
雄激素受体拮抗剂：直接结合并阻断ar的药物。这些药物包括甾体类抗雄激素醋酸环丙孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、螺内酯、奥生多龙和醋酸奥沙特隆(兽医)，和非甾体类抗雄激素氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特、托普鲁胺(topilutamide)、恩杂鲁胺和阿帕鲁胺。除醋酸环丙孕酮和醋酸氯地孕酮外，在口服避孕药和/或绝经期hrt中使用的几种其它黄体酮(包括地诺孕素、屈螺酮、美屈孕酮、醋酸诺美孕酮、普美孕酮和曲美孕酮)也具有不同程度的ar拮抗活性；
雄激素合成抑制剂：直接抑制雄激素(如睾酮和/或dht)的酶促生物合成的药物。实例包括cyp17a1抑制剂酮康唑、醋酸阿比特龙和七唯子(seviteronel)、cyp11a1(p450scc)抑制剂氨鲁米特和5α-还原酶抑制剂非那雄胺、度他雄胺、依立雄胺、α-雌二醇和锯叶棕提取物(锯叶棕(serenoarepens))。也已知许多其它抗雄激素(包括醋酸环丙孕酮、螺内酯、美屈孕酮、氟他胺、尼鲁米特和戊双氟酚)弱抑制雄激素合成。
抗促性腺激素：抑制促性腺素释放激素(gnrh)诱导的促性腺素释放和随后性腺雄激素产生的活化的药物。例子包括gnrh调节剂如亮丙瑞林(一种gnrh激动剂)和西曲瑞克(一种gnrh拮抗剂)、孕激素如烯丙雌醇、醋酸氯地孕酮、醋酸环丙孕酮、己酸孕诺酮、己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸奥沙特隆(兽医)和奥生多龙和雌激素如雌二醇、雌二醇酯、炔雌醇、缀合的雌激素和己烯雌酚。
其它例子：通过上述方式以外的方式对抗雄激素的作用的药物。例子包括雌激素，尤其是口服的和合成的雌激素(例如，炔雌醇、己烯雌酚)，其刺激肝脏中的性激素结合球蛋白(shbg)产生，从而降低睾酮和dht的游离水平，并因此降低其生物活性水平；抗促皮质素诸如糖皮质激素，其抑制促肾上腺皮质激素(acth)诱导的肾上腺雄激素产生；以及，针对雄烯二酮如卵雄酮白蛋白和雄烯二酮白蛋白的免疫原和疫苗，其通过产生针对雄激素和雄激素前体雄烯二酮(仅用在兽医学中)的抗体来降低雄激素水平。
结缔组织障碍
结缔组织病表示，涉及支持身体的器官和其它部位的富含蛋白的组织的一组障碍。结缔组织的例子是脂肪、骨骼和软骨。这些障碍经常涉及关节、肌肉和皮肤，但它们也可能涉及其它器官和器官系统，包括眼睛、心脏、肺、肾、胃肠道和血管。有超过200种影响结缔组织的障碍。原因和具体症状随不同类型而异。
可能用所述组合物和方法治疗的组织疾病(例如上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织)的例子包括、但不限于以下：自身免疫性疾病、退行性疾病、炎症性疾病、传染性疾病、癌性疾病、病毒性疾病、真菌性疾病、受伤性疾病或创伤衍生的疾病。这些组织和/或器官疾病可能是原发性疾病，或可能由现有疾病和/或病症造成。例子包括淀粉样变性、房颤、惊厥、绞痛、皮肌炎、内生软骨瘤、纤维瘤、蓝宝(lumbao)、遗传性结缔组织障碍(例如，马凡氏综合征、阴茎硬结病、埃勒斯-当洛斯综合征、成骨不全、斯蒂克勒综合征、奥尔波特综合征、先天性挛缩性细长指(趾))、自身免疫性结缔组织障碍(例如，系统性红斑狼疮(sle)、类风湿性关节炎、硬皮病、舍格伦综合征、混合性结缔组织病、银屑病关节炎)、坏血病、肌肉疾病(例如，肌肉肿瘤、肌营养不良、废用性萎缩、去神经萎缩、杜兴肌营养不良、面肩臂肌营养不良)、肝病、重症肌无力、肌病、肌炎、骨化性肌炎、癌症、纤维肌痛、肌肉疲劳、痉挛、痉挛状态、扭伤、劳损、脑损伤、脊髓损伤、神经胶质瘤、神经上皮瘤、高血压、心血管疾病、糖尿病、阿尔茨海默氏病、膀胱炎、aids、佝偻病和神经鞘肿瘤。受疾病影响且可以用本文中所述的组合物和方法治疗的组织、器官和/或身体系统的例子包括、但不限于以下：免疫系统，感觉器官(例如，味觉、嗅觉、视觉、听觉的器官)，消化系统(例如，嘴、咽喉、咽、食管、腹、胃、小肠、大肠、肝、胰腺)，泌尿生殖器，内分泌系统，代谢系统，心血管系统(例如，心脏、血压、动脉)，血液系统(例如，血液化学)，泌尿器官(例如，肾脏、输尿管、膀胱、雄性尿道、雌性尿道)，雄性生殖器官(例如，睾丸及其覆盖物、输精管、精囊、射精管、阴茎、前列腺、尿道球腺)，雌性生殖器官(例如，卵巢、子宫管、子宫、阴道、阴蒂、巴托兰腺、外部器官、乳房)，无导管腺(例如，甲状腺、副甲状腺、胸腺、垂体、松果体、嗜铬体和皮质系统、脾脏)，生殖系统，呼吸系统(例如，喉、气管、支气管、胸膜、纵隔、肺)，中枢神经系统(例如，神经、神经纤维)，皮肤，上皮(例如，简单的、分层的、假分层的、柱状的、腺状的)，结缔组织(例如，疏松结缔组织(例如，细隙、脂肪、网状)和密集结缔组织(例如，密集的规则的、密集的不规则的)，软骨(例如，透明的、弹性的、纤维状的)，肌肉(例如，骨骼肌(例如，i、ii、iia、iix、iib型)、心肌、平滑肌)，神经(例如，神经元(例如，运动神经元、中间神经元、感觉神经元)、神经胶质、脊髓、神经、脑)。
在实施方案中，所述结缔组织障碍包含血管病变(例如，血管性埃勒斯-当洛斯综合征)、马凡氏综合征、洛伊斯·迪茨综合征或家族性胸主动脉瘤。
埃勒斯-当洛斯综合征(eds)
埃勒斯-当洛斯综合征(eds)是一组遗传性结缔组织障碍。症状可能包括关节松弛、皮肤弹性过大和异常瘢痕形成。这些可以在出生时或在幼童时期就注意到。并发症可能包括主动脉夹层、关节脱位、脊柱侧凸、慢性疼痛或早期骨关节炎。
eds是由于十几种不同基因之一中的突变所致。受影响的特定基因决定了特定的eds。有些病例源自在早期发育过程中发生的新突变，而另一些则以常染色体的显性或隐性遗传的方式遗传。这导致胶原蛋白的结构或加工中的缺陷。用基因试验或皮肤活组织检查可以确认诊断。人们可能被误诊为疑病症、抑郁症或慢性疲劳综合症。
迄今为止，尚无治愈方法，但是，物理疗法和支具疗法可能有助于增强肌肉和支撑关节。尽管某些障碍会得到正常的预期寿命，但影响血管的那些通常会导致较短的预期寿命。eds在全球每5,000人中影响约一人，且预后取决于具体障碍。
eds分类
高活动性eds(3型heds)的主要特征是影响大小关节的关节活动过度，这可能导致反复关节脱位和半脱位(部分脱位)。一般而言，这类人具有软的、光滑的、柔软的皮肤，容易出现瘀伤以及肌肉和/或骨骼的慢性疼痛。造成这种eds类型的突变是未知的。与其它类型相比，皮肤受累较少。没有针对这种类型的基因试验。
经典的eds(1型ceds)具有脆弱且容易瘀伤的、弹性极强的(有弹力的)光滑皮肤；广泛的萎缩性瘢痕(平坦或凹陷的疤痕)；和关节活动过度。还经常看到拟软体动物假瘤(在压力点如肘部钙化的血肿)和球状体(在前臂和胫部上含有脂肪的囊肿)。可能发生张力过低和运动发育延迟。造成这种eds类型的突变是在基因col5a1、col5a2和col1a1中。它涉及比heds多的皮肤。
血管性eds(4型veds)的特征是薄的半透明的皮肤，其非常脆弱且容易瘀伤。动脉和某些器官(诸如肠和子宫)也很脆弱且容易破裂。这类人通常具有矮小的身材和稀疏的头发。它还具有特征性的面部特征，包括大眼睛、过小的下巴、凹陷的脸颊、薄的鼻子和嘴唇、以及没有耳垂的耳朵。存在关节活动过度，但通常仅限于小关节(手指、脚趾)。其它常见特征包括畸形足、肌腱和/或肌肉破裂、肢皮早老(手和脚的皮肤过早老化)、早发型静脉曲张、气胸(肺塌陷)、牙龈萎缩和数量减少的皮下脂肪。它可以由col3a1基因中的突变造成。
脊柱后侧凸eds(6型keds)与出生时严重张力过低、运动发育迟缓、进行性脊柱侧凸(从出生时出现)和巩膜脆性相关。受影响的人还可能具有容易瘀伤、易破裂的脆弱动脉、异常小角膜和骨质减少(低骨密度)。其它常见特征包括“马凡氏综合征体型”，其特征是长而纤细的手指(蜘蛛足样指)，异常长的四肢以及下陷的胸部(漏斗状胸)或突出的胸部(鸡胸)。它可以由基因plod1中的突变造成。
关节松弛症eds(7a&b型aeds)的特征是严重的关节活动过度和先天性髋脱位。其它常见特征包括容易瘀伤的脆弱的有弹性的皮肤、张力过低、脊柱后侧凸(脊柱后凸和脊柱侧凸)和轻度骨质减少。i型胶原蛋白通常会受到影响。它是非常罕见的，报道了约30例。它比活动过度类型更严重。基因col1a1和col1a2中的突变造成它。
皮肤脆裂症eds(7c型deds)具有导致严重瘀伤和瘢痕形成的非常脆弱的皮肤；下垂的、多余的皮肤，尤其是在脸上；和疝。它极少见，报道了约10例。
角膜脆弱综合征的特征是薄角膜、早发进行性球形角膜或圆锥角膜和蓝色巩膜。还经常见到经典症状，诸如高活动性关节和超弹性的皮肤。
经典样eds(1型ceds)的特征是皮肤过度扩张，皮肤质地柔软，没有萎缩性瘢痕，全身关节活动过度，有或没有反复脱位(最常见于肩膀和脚踝)，并且皮肤容易发生瘀伤或自发性瘀斑(由底部出血造成的皮肤变色)。
脊柱发育异常性eds(speds)的特征是身材矮小(在儿童期进展)、肌肉张力过低(范围从严重先天型到轻度较晚发作型)和四肢弓形突出。
肌肉萎缩性eds(mceds)的特征是先天性多发性挛缩，特征性内收屈曲性挛缩和/或马蹄内翻足(畸形足)，在出生时或婴儿早期就明显的特有颅面特征，以及皮肤特征诸如皮肤伸展过度、淤青、皮肤脆弱、有萎缩性瘢痕和增加的手掌皱纹。
肌病性eds(meds)的特征是随着年龄改善的先天性肌肉张力过低和/或肌肉萎缩，近端关节挛缩(膝关节、髋关节和肘关节)以及远端关节(踝、腕、脚和手的关节)的活动过度。
牙周性eds(peds)的特征是严重的且顽固的早发性牙周炎(儿童期或青春期)，缺乏附着龈，胫骨前斑块，以及符合临床标准的一级亲属的家族史。
心脏瓣膜eds(cveds)的特征是严重的进行性心脏瓣膜问题(主动脉瓣、二尖瓣)、皮肤问题(伸展过度、萎缩性瘢痕、薄皮肤、容易瘀伤)和关节活动过度(全身性或局限于小关节)。
治疗方法
本公开提供了，通过给受试者施用治疗有效量的药剂，在有此需要的受试者中治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的方法，其中所述药剂减少细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。所述方法还包括施用减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的活性或表达的药剂。在实施方案中，所述药剂包含用于制备药物的抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或任意组合，所述药物可用于治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍。
本公开也提供了包含联合疗法的方法。本文中使用的“联合疗法”或“共同疗法”包括与至少一种另外的活性剂(在本文中也被称作“活性药物成分”(“api”))一起，施用治疗有效量的药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)或其药学上可接受的盐，作为治疗方案的一部分，旨在提供所述药剂(例如，激动剂、拮抗剂或抑制剂)和所述另外的活性剂的共同作用的有益效果。
根据下面描述的实施方案，“另外的api”理解为，表示在与药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)的联合疗法方案中，施用的至少一种另外的api。另外，应当理解，在方案中可以使用以下描述的一种以上的另外的api。术语“联合疗法”或“联合疗法方案”不意图涵盖施用两种或更多种治疗性化合物作为独立的单一疗法方案的一部分，其中单一疗法方案偶然地和任意地导致未预期到或未预测到的有益效果。
优选地，施用包含与本文中讨论的一种或多种另外的api组合的药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)的组合物，会在被治疗的受试者中提供协同应答。在该背景下，术语“协同”表示所述组合的效力比单独的任一种单一疗法的累加效应更有效。
本公开也提供了包括用于治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的联合疗法的方法。本文中使用的“联合疗法”或“共同疗法”包括，与本文中公开的至少一种另外的药剂一起，施用本文描述的化合物作为特异性治疗方案的一部分，意图提供来自这些治疗性化合物的共同作用的有益效果。所述至少一种另外的药剂可以是治疗剂或非治疗剂。所述组合的有益效果包括、但不限于，由治疗性化合物的组合产生的药代动力学或药效动力学的共同作用。所述组合的有益效果还可以涉及，减轻与所述组合中的另一种药剂有关的毒性、副作用或不利事件。“联合疗法”可能(但通常并非)意图涵盖施用这些治疗性化合物中的两种或更多种，作为独立的单一疗法方案的一部分，其中单一疗法方案偶然地和任意地导致本公开的组合。
因此，在某些实施方案中，给有此需要的受试者施用一种或多种药剂，所述药剂抑制促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mek)、细胞外信号调节激酶(erk)、磷脂酶c(plc)、肌醇三磷酸(ip3)或蛋白激酶c(pkc)的表达或活性，并由此抑制erk、plc、ip3或pkc的活性。
在某些实施方案中，给有此需要的受试者施用一种或多种药剂，该药剂抑制与促分裂原活化蛋白激酶(mapk)通路有关的一种或多种分子(例如ras-raf/mek/细胞外信号调节激酶(erk)蛋白激酶)的活性或表达。
在联合疗法的背景下，拮抗剂的施用可以与一种或多种另外的药剂的施用同时或相继进行。在另一个方面，联合疗法的不同组分的施用可以以不同的频率进行。可以在施用本公开的化合物之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、伴随地或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)，施用一种或多种另外的药剂。
如本文更详细描述的，可以将一种或多种另外的药剂配制成与本公开的药剂一起在单一剂型中共同施用。可以将一种或多种另外的药剂与包含本公开的化合物的剂型分开施用。当另外的药剂与本公开的化合物分开施用时，它可以是通过与本公开的化合物相同或不同的施用途径。
优选地，施用包含与一种或多种另外的药剂组合的本公开的药剂的组合物，在患有本公开的障碍、疾病或病症的受试者中提供协同应答。在该背景下，术语“协同”表示所述组合的效力比单独的任一种单一疗法的累加效应更有效。根据本公开的联合疗法的协同效应，可以允许使用比该组合之外的剂量和/或频率更低的剂量和/或更低的频率，来施用该组合中的至少一种药剂。协同效应可以表现为避免或减少与仅使用组合中的任一种疗法相关的不利的或不希望的副作用。
“联合疗法”还涵盖与非药物疗法(例如，外科手术或辐射治疗)进一步组合的本公开的化合物的施用。在联合疗法进一步包括非药物治疗的情况下，可以在任何合适的时间进行非药物治疗，只要实现治疗性化合物和非药物治疗的组合共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗性化合物的施用中暂时去除非药物治疗时，仍会实现有益效果，该有益效果可能持续数天甚至数周。
在本文所述的方法的实施方案中，可以在用于治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的方法中，将药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)单独施用或与至少一种另外的药剂组合施用。在实施方案中，所述药剂和所述至少一种另外的药剂在单一剂型中施用。在另一个方面，所述药剂和所述至少一种另外的药剂在分开的剂型中施用。在实施方案中，所述至少一种另外的药剂是治疗剂。在实施方案中，所述治疗剂被指示用于治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍。在另一个方面，所述药剂与至少一种非用于治疗血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的另外的药剂联合施用，例如用于减轻与在联合疗法中施用的另一种活性剂相关的毒性或不利事件的第二种药剂。
在实施方案中，所述至少一种另外的药剂针对靶向疗法，其中所述治疗靶向血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍、促进血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍进展的蛋白或组织环境。
在某些实施方案中，涵盖与雄激素拮抗剂(例如，抗雄激素)的联合疗法。抗雄激素是一类药物，其阻止雄激素如睾酮和二氢睾酮(dht)介导其在体内的生物学作用。它们通过阻断雄激素受体(ar)，和/或抑制或遏制雄激素产生而起作用。
在实施方案中，示例性组合包括雄激素拮抗剂加上plc、ip3、pkc或erk抑制剂。
术语“治疗有效量”表示这样的量：其足以治疗疾病、障碍或病症，改善其症状，减轻其严重程度，或减少其持续时间，或增强或改善另一种疗法的治疗效果，或预防已鉴定出的疾病、障碍或病症，或表现出可检测到的治疗或抑制作用。所述效果可以通过本领域已知的任何测定方法来检测。受试者的精确有效量将取决于受试者的体重、大小和健康；病症的性质和程度；以及为施用所选择的治疗剂或治疗剂的组合。
可以每天1次、每天2-5次、每天最多2次或最多3次、或每天最多8次，来施用有效量的药剂。在实施方案中，如下施用所述药剂：每天3次，每天2次，每天1次，在3-周循环中14天用药(每天4次、每天3次或每天2次或每天1次)且7天停药，在3周循环中最多5或7天用药(每天4次、每天3次或每天2次或每天1次)且14-16天停药，或每2天1次，或每周1次，或每2周1次，或每3周1次。
药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)的有效量，可以在约0.001mg/kg至约1000mg/kg、约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg的范围内；或以下任何范围：其中范围的下端是从0.001mg/kg至900mg/kg的任何量，且范围的上端是从0.1mg/kg至1000mg/kg的任何量(例如，0.005mg/kg至200mg/kg、0.5mg/kg至20mg/kg)。如本领域技术人员所知，有效剂量也将变化，这取决于所治疗的疾病、施用途径、赋形剂使用，以及与其它治疗性处理(诸如其它药剂的使用)共同使用的可能性。
在更具体的方面，以30-300mg/天(例如，30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275或300mg/天)的给药方案，来施用本公开的药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)至少1周(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、36、48或更多周)。在某些实施方案中，以100-300mg/天的给药方案，来施用本文所述的化合物4或16周。可替换地或随后，以每天2次各100mg的给药方案，来施用本文所述的药剂8周，或任选地，持续52周。
本文中使用的“有此需要的受试者”是具有疾病、障碍或病症的受试者，或相对于整个人群具有增加的罹患疾病、障碍或病症的风险的受试者。在一个优选方面，有此需要的受试者是具有血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的受试者，或相对于整个人群具有增加的发生血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍的风险的受试者。有此需要的受试者可以对该疾病或障碍的当前可用疗法是“非响应性的”或“难治的”受试者。在该背景下，术语“非响应性的”和“难治的”表示受试者对疗法的应答在临床上不足以缓解与疾病或障碍相关的一种或多种症状。
“受试者”包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如，人、灵长类动物、脊椎动物、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换地使用。
本公开提供了用于治疗如本文中所述的疾病、障碍或病症的单一疗法。本文中使用的“单一疗法”表示将单一活性或治疗性化合物施用给有此需要的受试者。优选地，单一疗法将涉及施用治疗有效量的活性化合物。例如，可以以治疗有效量，向需要治疗的受试者施用使用本公开的药剂进行的单一疗法。单一疗法可与联合疗法对对，在联合疗法中，施用多种活性化合物的组合，优选组合中的每种组分都以治疗有效量存在。在一个方面，用本公开的药剂进行的单一疗法在诱导期望的生物学作用方面比联合疗法更有效。
本文中使用的“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“处理”描述了以对抗疾病、病症或障碍为目的的患者的管理和护理，并且包括施用本公开的药剂以减轻疾病、病症或障碍的症状或并发症，或消除疾病、病症或障碍。
本文中使用的“预防(prevention)”、“预防(preventing)”或“阻止”描述了减轻或消除疾病、病症或障碍的症状或并发症的发作，并且包括施用本公开的药剂以减少疾病、病症或障碍的症状的发作、发展或复发。
本文中使用的术语“减轻”意在描述降低障碍的征兆或症状的严重程度的过程。重要的是，可以减轻而不消除征兆或症状。在一个优选的实施方案中，本公开的药剂的施用导致征兆或症状的消除，但是，消除不是必需的。预期有效剂量会降低征兆或症状的严重程度。
本文中使用的术语“症状”被定义为疾病、病症、损伤或体内某些不适的指示。经历过症状的个体会感觉到或注意到症状，但他人可能不容易注意到。他人被定义为非保健专业人员。
根据本文所述的方法治疗障碍、疾病或病症，可以导致血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍进展速率降低。优选地，在治疗后，血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍进展速率相对于治疗前的数字下降了至少5％；更优选地，血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍进展速率下降了至少10％；更优选地，下降了至少20％；更优选地，下降了至少30％；更优选地，下降了至少40％；更优选地，下降了至少50％；甚至更优选地，下降了至少50％；和最优选地，下降了至少75％。血管病变(例如，veds)或结缔组织障碍进展速率可以通过任何可再现的测量手段进行测量。
本文中使用的术语“选择性地”是指，倾向于在一个人群中比在另一个人群中以更高的频率发生。所比较的群体可以是细胞群体。优选地，本公开的药剂选择性地作用于过度增殖的细胞，而不作用于正常细胞。本公开的药剂选择性地起作用，以调节一种分子靶标，但是不显著地调节另一种分子靶标。
联合疗法
在实施方案中，本公开也提供了包含肼屈嗪和至少一种另外的活性剂的联合疗法的方法。在实施方案中，至少一种另外的活性剂是治疗剂，例如，抗雄激素化合物诸如比卡鲁胺或螺内酯。
本文中使用的“联合疗法”或“共同疗法”包括与至少一种另外的活性剂一起施用治疗有效量的本文描述的药剂，作为特异性治疗方案的一部分，旨在提供所述药剂和所述另外的活性剂共同作用的有益效果。所述组合的有益效果包括、但不限于由治疗活性化合物的组合产生的药代动力学或药效动力学的共同作用。“联合疗法”不意图涵盖施用两种或更多种治疗性化合物作为独立的单一疗法方案的一部分，其中单一疗法方案偶然地和任意地导致未预期或未预测到的有益效果。
优选地，联合疗法会在被治疗的受试者中提供协同应答。在该背景下，术语“协同”表示组合的效力比单独的任一种单一疗法的累加效应更有效。根据本发明的联合疗法的协同效应，可以允许使用比该组合之外的剂量和/或频率更低的剂量和/或更低的频率，来施用该组合中的至少一种药剂。所述组合的另外的有益效果可以表现为，避免或减少与单独使用组合中的任一种疗法(也被称作单一疗法)相关的不利的或不希望的副作用。
“联合疗法”也包括与非药物疗法(例如，外科手术或辐射治疗)进一步组合的药剂的施用，所述药剂抑制或减少本发明的信号传递通路(例如，plc/ip3/pkc/erk)的生物学活性和/或表达。在联合疗法进一步包括非药物治疗的情况下，可以在任何合适的时间进行非药物治疗，只要实现来自治疗性化合物和非药物治疗的组合共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗性化合物的施用中暂时去除非药物治疗时，仍会实现有益效果，该有益效果可能持续数天甚至数周。非药物治疗可以选自化学疗法、辐射疗法、激素疗法、抗雌激素疗法、基因疗法和外科手术。
在本文所述的方法的上下文中，施用给受试者的药剂的量是治疗有效量。术语“治疗有效量”表示这样的量：其足以治疗被治疗的疾病(例如，veds)、改善其症状、减轻其严重程度或减少其持续时间，或增强或改善另一种疗法的治疗效果，或足以在受试者中表现出可检测到的治疗效果。在一个实施方案中，药剂的治疗有效量是有效减少信号传递通路(例如，plc/ip3/pkc/erk)的量。
在实施方案中，根据本文所述方法施用肼屈嗪和抗雄激素剂，导致被治疗的疾病(例如，veds)的症状或并发症的消除；但是，消除不是必需的。在一个实施方案中，降低症状或并发症的严重程度。
药物组合物
在某些实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含在本发明中采用的药剂(例如，减少erk、pkc和/或plc或ip3的活性或表达的药剂)。通过公认的用于这种递送的任何方式，可以适当地配制该药剂并将其引入受试者或细胞环境中。
“药物组合物”是一种制剂，其含有适合于施用给受试者的药学上可接受的形式的本文所述药剂。本文中使用的短语“药学上可接受的”表示这样的化合物、物质、组合物、载体和/或剂型：其在合理的医学判断范围内，适用于接触人类和动物的组织，而没有过度的毒性、刺激、变应性应答或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
这样的组合物通常包括药剂和药学上可接受的载体。本文中使用的措辞“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的盐水、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。还可将补充性活性化合物掺入所述组合物中。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”是由例如酸和本文所述的药剂的碱性基团形成的盐。示例性的盐包括、但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐(glucaronate)、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(例如，1,1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。
将药物组合物配制成与它的预期施用途径相容。施用途径的例子包括胃肠外施用，例如静脉内、真皮内、皮下、口服(例如、吸入)、透皮(局部)、透粘膜和直肠施用。用于胃肠外、真皮内或皮下应用的溶液或混悬液可以包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及，用于调节张度的试剂，诸如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱(诸如盐酸或氢氧化钠)调节ph。可以将胃肠外制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量瓶中。
适合于注射使用的药物组合物包括，无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散体，以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉剂。就静脉内施用而言，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、cremophoreltm(basf,parsippany,n.j.)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在所有情况下，该组合物必须是无菌的，并且应该以易于注射的程度流动。它应当在制备和贮存条件下是稳定的，且必须被保存免受微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用。所述载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，可以通过使用包衣剂诸如卵磷脂，通过维持所需的粒度(在分散系的情况下)和通过使用表面活性剂，来维持适当的流动性。阻止微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇诸如甘露醇、山梨醇、氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
可以通过如下方式制备无菌注射溶液：将所需量的活性化合物与需要的上文所列举的一种成分或成分的组合掺入到选定的溶剂中，然后过滤除菌。通常，通过如下方式制备分散体：将活性化合物掺入到无菌媒介物中，后者含有基本分散介质以及所需的以上列出的其它成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从其先前的无菌过滤溶液产生活性成分和任何其它所需成分的粉末。
口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂掺合，并以片剂、糖锭或胶囊剂(例如明胶胶囊剂)的形式使用。还可以使用流体载体来制备口服组合物，以用作漱口液。可以包括药学上适合的粘合剂和/或辅料，作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任意下述成分或相似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，诸如海藻酸、羧甲基淀粉钠(primogel)或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或斯特罗特斯(sterotes)；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或者，矫味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味矫味剂。
本发明的组合物也可以配制成纳米颗粒制剂。可以施用本发明的化合物，用于立即释放、延迟释放、调节释放、持续释放、脉冲释放和/或受控释放的应用。本发明的药物组合物可以每体积含有0.01-99重量％的活性物质。就吸入施用而言，将化合物以气溶胶喷雾的形式，从压力容器或分配器(其含有合适的推进剂，例如，气体诸如二氧化碳)或喷雾器中递送。这样的方法包括在美国专利号6,468,798中描述的那些。
全身施用还可以是通过透粘膜或透皮方式。关于透粘膜或透皮给药，在制剂中使用适合要渗透的屏障的穿透剂。该穿透剂是本领域中普遍已知的，并且对于透粘膜给药而言，包括例如去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。透粘膜给药可以通过使用鼻喷雾或栓剂而完成。对于透皮给药，将活性化合物配制成本领域普遍已知的软膏剂、油膏剂、凝胶或乳膏剂。也可以以用于直肠递送的栓剂(例如具有常规栓剂基质，如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠剂的形式，配制所述化合物。
在一个实施方案中，将活性化合物与载体一起制备，所述载体会保护化合物免于从身体中快速消除，诸如控释制剂，包括植入剂和微囊化的递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。可以使用标准技术来制备这样的制剂。所述材料还可以商业上得自阿尔扎公司(alzacorporation)和nova制药公司。脂质体混悬液(包括脂质体，该脂质体用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染的细胞)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备，例如，如在美国专利号4,522,811中所述。
通过在细胞培养物或实验动物中的标准药物操作，可以测定这类化合物的毒性和治疗功效，例如测定ld50(对群体的50％是致命的剂量)和ed50(对群体的50％是治疗有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，且它可以表示为比率ld50/ed50。表现出高治疗指数的化合物是优选的。尽管可以使用具有毒性副作用的化合物，但应当小心地设计递送系统，将这样的化合物靶向受影响的组织部位，以便使对未受感染的细胞的潜在损伤最小化，由此减少副作用。
从细胞培养测定和动物研究获得的数据，可以用于制定用于人类的剂量范围。这样的化合物的剂量优选地循环浓度在包括ed50且几乎没有或没有毒性的范围内。根据所用剂型和所用给药途径，剂量可以在此范围内变化。对于用于本发明的方法中的化合物，最初可以从细胞培养测定来估计治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量，以达到循环血浆浓度范围，其包括在细胞培养中确定的ic50(即，达到症状的半数抑制时的试验化合物浓度)。这样的信息可以用来更准确地确定在人类中有用的剂量。可以例如通过高效液相色谱法来测量血浆的水平。
如本文中定义的，药剂的治疗有效量(即，有效剂量)取决于所选择的药剂。例如，可以施用在大约1pg至1000mg范围内的单剂量的药剂；在某些实施方案中，可以施用10、30、100或1000pg，或10、30、100或1000ng，或10、30、100或1000μg，或10、30、100或1000mg。在某些实施方案中，可以施用1-5g的组合物。
通过本领域已知的方法，可以确定本发明的化合物的治疗有效量。除了取决于所述药剂和所使用的选择/药物制剂之外，本发明的药物组合物的治疗有效量还将取决于患者的年龄和总体生理状况以及施用途径。在某些实施方案中，治疗剂量通常为约10至2000mg/天，且优选约30至1500mg/天。可以使用其它范围，包括例如50-500mg/天、50-300mg/天、100-200mg/天。
施用可以是每天1次、每天2次或更频繁，并且可以在疾病或障碍的维持阶段中减少，例如每两天1次或每三天1次，而不是每天1次或每天2次。剂量和施用频率将取决于临床征象，其证实缓解阶段的维持的，并且本领域技术人员已知的急性阶段的至少一种或多种，更优选超过一种的临床征象减少或不存在。熟练的技术人员会明白，某些因素可能影响有效地治疗受试者所需的剂量和时机，包括、但不限于疾病或障碍的严重程度、先前的治疗、受试者的一般健康和/或年龄，以及存在的其它疾病。此外，用治疗有效量的药剂对受试者的治疗可以包括单一治疗，或者任选地可以包括一系列治疗。
可以理解，将药剂引入细胞环境的方法将取决于细胞的类型及其环境的组成。必须引入合适量的药剂，并且可以使用标准方法凭经验来确定这些量。在细胞环境中单一药剂的示例性有效浓度可以为500毫摩尔或更少、50毫摩尔或更少、10毫摩尔或更少、1毫摩尔或更少、500纳摩尔或更少、50纳摩尔或更少、10纳摩尔或更少，或甚至可以使用1纳摩尔或更少的浓度的组合物。
药物组合物可以与施用说明书一起包含在试剂盒、容器、包装或分配器中。
实施例
提出以下实施例以给本领域普通技术人员提供如何进行和使用本发明的测定、筛选和治疗方法的完整公开和描述，但无意将发明人考虑的内容的范围限制为他们的发明。
实施例1：敲入甘氨酸置换的veds小鼠的产生。
使用crispr/cas9制备新的敲入甘氨酸置换(col3a1g209s/ 和col3a1g938d/ )的veds小鼠。小鼠模型重现了人血管表型，并利用环境对疾病表型的影响，揭示了血管壁的最终衰竭的分子基础。
为了引入每个突变，设计了3种向导rna(tracrrna crrna)，以靶向预期突变位点侧翼的dna区域。还设计了dna寡核苷酸(oligo)修复模板(ssdna寡核苷酸)，该模板包括在靶区域上游和下游的同源序列以及预期的突变。使用在无rna酶的注射缓冲液中稀释的cas9蛋白、tracrrna、crrna和ssdna寡核苷酸的混合物，使用标准显微注射技术，由jhu转基因中心(jhutransgeniccore)执行单细胞c57bl/6j胚胎的原核注射。使用已建立的技术，将注射的胚胎转移进假妊娠的icr雌性的输卵管中。利用对该位点的桑格(sanger)测序来确认突变的引入，并且使小鼠回交至少4代以消除脱靶效应。对于g209s小鼠，引入的突变为c.625_626gg>tc，对应于人类中的p.gly2l0ser。对于g938d小鼠，引入的突变为c.2813g>a，对应于人类中的p.gly939ser。野生型人col3a1mrna的ncbi登记号：nm_000090.3；野生型小鼠col3a1mrna的ncbi登记号：nm_009930.2。
实施例2：col3a1g209s/ 和col3a1g938d/ 小鼠模型重现了veds表型.
col3a1g209s/ 和col3a1g938d/ 小鼠模型重现了veds表型。具有veds的小鼠由于主动脉破裂、主动脉夹层或器官破裂而突然死亡，在尸检时最常出现血胸或腹腔积血。具有col3a1g938d/ 突变的小鼠表现出更严重的表型(生存中值＝45天，而col3a1g209s/ 模型为400天，p<0.0001，图1a-1c)。图1a的图证实g209s/ 小鼠模型重现了veds表型，且生存中值为400天，p<0.0001。在图1b中，显示了g938d/ 小鼠模型的存活率，并重现了veds，生存中值为45天，p<0.0001。
在任一种小鼠模型中，均未观察到通过超声心动描记术检查出的主动脉根动脉瘤的证据。
实施例3：信号传递异常是veds中的疾病病理学的介质.
假设信号传递异常可能是介导veds中的疾病病理学的主要因素。为了试验该假设，鉴于近端降主动脉是该模型中最常见的主动脉夹层位置，对三只col3a1g209s/ 小鼠、三只col3a1g938d/ 小鼠和三只col3a1 / (野生型)小鼠的近端降胸主动脉进行了rna-seq。进行了使用大部分差异表达的基因的无监督分级聚类(fdr<0.10)。veds样品与对照分开聚类(图1d)，从而指示veds主动脉的转录组中的显著差异。
网络分析指示，veds主动脉表现出促分裂原活化蛋白激酶(mapk)活性升高的基因表达谱[p38、jnk、akt、erk、erk1/2](图1e)。
此外，上游分析预测，veds主动脉中的转录差异是由g蛋白偶联受体(gpcr)的活化来驱动的，其通过相关的plc/ip3/pkc/erk轴传递信号(图1f)。
通过对经由该通路的主动信号传递的标志物进行免疫印迹，证实了gpcr和mapk信号传递升高的特征，并且发现erk1/2磷酸化和pkc磷酸化在veds主动脉中明显更高(图1g)。
与马凡氏综合征(mfs)或洛伊斯·迪茨综合征(lds)相比，veds主动脉的表达谱没有显示出高tgfβ信号传递所典型的合成库，但是观察到增加的erk活化的证据(类似于mfs和lds)。一项小型的人体研究表明，β-阻滞剂塞利洛尔有可能延迟veds患者中的不利事件，而血管紧张素受体阻滞剂诸如氯沙坦在mfs或lds的小鼠模型中提供了惊人的保护。
此外，没有证据表明在氯沙坦治疗的veds小鼠中保护免于夹层或死亡，而塞利洛尔与两种veds模型中的夹层和死亡的显著加速有关；两种药物都实现了预期的血液动力学应力的降低。尽管早期数据显示肼屈嗪(其抑制plc/ip3/pkc/erk轴)在veds小鼠中提供一些保护，但这些数据凸显了需要基于发现的方法来揭示意想不到的治疗策略。
将veds突变引入纯129和bl6背景，以评估表型严重程度的调节。两种突变都与bl6背景上的主动脉夹层引起的早期死亡有关。非常值得注意的是，129-背景导致完全保护两种veds基因型不受夹层影响，并且寿命完全正常。挽救与主动脉壁的基因表达谱的标准化有关。这些数据为进行遗传研究以鉴定veds小鼠中的修饰的来源和机理提供了理论依据和动力，希望并有意模仿使用药理学药剂的自然成功策略。
实施例4：plc/ip3/pkc/erk轴的药理学抑制降低了veds小鼠中主动脉破裂的风险.
由于已证实plc/ip3/pkc/erk轴的活化在mfs中具有致病性7，因此假定该轴的药理学抑制将降低veds小鼠中主动脉破裂的风险。
药理学erk拮抗剂增加了存活率
试验了药理学erk拮抗剂，以支持erk活化在veds的发病机制中的作用，并作为鉴定veds的治疗策略的方法。用考比替尼[gdc-0973,ro5514041](2mg/kg/天)治疗小鼠，考比替尼是一种fda批准的mek抑制剂，mek是活化erk的激酶8。假定如果erk活化确实驱动疾病风险，那么erk抑制会挽救主动脉夹层引起的死亡风险。
与该假设相符的是，治疗45天后观察到94％的存活率，与此相比，未治疗的仅为55％存活率(图2a)。
药理学pkc抑制增加了存活率
接着，进行了进一步研究，以试验抑制pkc活化的药剂。用芦布妥林[ly333531](10mg/kg/天)处理小鼠，芦布妥林是一种良好耐受的口服施用的具有药理作用的药剂，其特异性地抑制pkcβ9。假定如果plc/ip3/pkc活化驱动erk活化并由此驱动疾病风险，则药理学pkc抑制剂也会挽救主动脉夹层引起的死亡风险。
与该假设相符的是，治疗39天后观察到100％的存活率，与此相比，未治疗的仅为55％存活率(图2b)。
抑制plc/ip3/pkc/erk信号传递级联的药剂增加了存活率
进行了进一步研究，以试验抑制该信号传递级联的其它药物。通过施用阻断plc/ip3/pkc/erk轴的肼屈嗪(32mg/kg/d)来治疗小鼠，并假设该药物靶向相同的通路，从而提供类似的保护10。观察到显著的保护，在45天龄(未治疗的veds小鼠的生存中值)具有98％的存活率(图2c)。
尽管存活率在青春期受到影响，但这种风险几乎只在雄性小鼠中看到，因此使用雄激素拮抗剂的治疗可能对这些小鼠有益。此外，肼屈嗪的剂量在该小鼠模型中可能不足以完全抑制该通路，更高的肼屈嗪剂量可能被证明是有益的。
用肼屈嗪和雄激素拮抗剂的联合疗法治疗小鼠。
此外，用更高剂量的肼屈嗪治疗小鼠。
这些结果提示，在veds的小鼠模型中，对主动脉中过度的plc/ip3/pkc/erk信号传递的抑制会挽救因主动脉夹层引起的死亡风险。
实施例5：缩宫素诱导的erk信号传递会活化plc/ip3/okc/erk轴并恶化主动脉夹层的风险
具有血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)的患者会经历中-至-大动脉的夹层。veds的许多特征明显不同于其它遗传性血管病变诸如马凡氏综合征(mfs)和洛伊斯·迪茨综合征(lds)，它们已经与过度的tgfβ活性相关联。在没有先前血管扩张的情况下，这些包括对主动脉根和夹层的介入没有特别的倾向。veds患者中的血管破裂难以预测或预防。妊娠特别增加夹层的风险，其中超过50％的孕妇发生并发症，并且约12-25％的孕妇死亡。血管夹层主要在产后发生，与单独引起血液动力学应力的机制不一致。取而代之的是，假定缩宫素(一种引发子宫收缩并在产后的哺乳期间持续的激素)可能促进妊娠相关的风险。缩宫素受体的表达在妊娠期间在主动脉中被诱导，并且该激素通过erk的活化(一种先前暗示与mfs和lds的发病机制有关的信号传递级联)来刺激周围组织。
在先已经证实了，妊娠相关的主动脉夹层在很大程度上受哺乳相关的缩宫素释放和在mfs小鼠主动脉中缩宫素诱导的erk信号传递所驱动11。因而，缩宫素诱导的erk信号传递被用作试验plc/ip3/pkc/erk轴的活化是否会恶化主动脉夹层风险的方法。
在veds小鼠模型中，鉴定出妊娠和泌乳与veds小鼠在产后前30天中由动脉夹层引起的60％的致死率相关(图3a)。并且，通过在出生后移走幼崽来阻止泌乳，能够预防veds小鼠中的夹层和死亡(100％存活率，图3b)。此外，用肼屈嗪(16mg/kg/天)(其阻断被缩宫素活化的plc/ip3/pkc/erk轴)治疗后会达到接近完全的存活率(95％)(图3c)。用曲美替尼[gsk-1120212](1mg/kg/天)治疗后观察到相似的保护(95％存活率)，曲美替尼是fda批准的mek抑制剂，mek是活化erk的激酶(图3d)。
如通过免疫印迹法和通过erk靶基因表达来测量的，这增加了与erk活化增加有关的死亡风险，而保护免于主动脉夹层与erk活化的减少有关(图3e和图3f)。该数据进一步支持，增加plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化会导致veds小鼠模型中由主动脉夹层引起死亡的风险显著增加，并且进一步，抑制plc/ip3/pkc/erk信号传递通路会改善这种风险。
实施例6：用于治疗血管性埃勒斯-当洛斯综合征和有关障碍的组合物和方法
药理学mek/erk拮抗剂和pkc拮抗剂的应用会挽救死于主动脉夹层的风险，这表明pkc依赖性的erk活化是veds中主动脉疾病的关键部分，并且靶向该信号传递通路有利于减少veds小鼠模型中的主动脉疾病。
此处证明了，使用第二种特异性pkcβ抑制剂恩扎妥林(60mg/kg/d)对pkcβ的药理学抑制，也挽救了死于主动脉夹层的风险，其中80％的经恩扎妥林治疗的veds小鼠在治疗40天后存活，与此相比，仅50％的未治疗的veds小鼠存活(p＝0.0305,图16a)。这提供了进一步的证据，证明pkcβ磷酸化是veds小鼠中的主动脉疾病的关键部分。
由于在本文中鉴定了plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化在veds中是致病的，因此检查了可能活化该异常信号传递通路的受体的身份。gpcr(gq)通过该通路传递信号——在主动脉中常见的gq受体包括血管紧张素ii受体、凝血酶受体、内皮缩血管肽-1受体、加压素受体1、鞘氨醇-1-磷酸受体、α-1肾上腺素能受体和血清素受体。但是，也存在也在主动脉中表达的孤儿gpcr，例如已证实与胶原蛋白3相互作用的gpr563,4。
不希望受理论的约束，假定如果抑制被异常活化的受体，则人们将能够准确地识别出信号传递通路如何被活化。另外，用波生坦(100mg/kg/d)治疗小鼠，波生坦是一种口服可生物利用的非特异性的内皮缩血管肽受体拮抗剂。波生坦治疗在治疗40天后导致80％的存活率，与此相比，在未治疗的veds小鼠中仅为50％的存活率(p＝0.0298，图16b)。这表明内皮缩血管肽受体信号传递有助于veds发病机制。
药理学mek/erk拮抗剂和pkc拮抗剂的应用会挽救死于主动脉夹层的风险，这表明pkc依赖性的erk活化是veds中主动脉疾病的关键部分，并且靶向该信号传递通路有利于减少veds小鼠模型中的主动脉疾病。接下来寻求鉴定证据，来证明该信号传递通路在来自veds人患者的血管组织样品中升高。在来自veds患者的两个组织样品(髂动脉和降胸主动脉)中鉴定出pkc磷酸化(图17)以及erk1/2磷酸化(图18)。在从没有veds的人的升主动脉获取的组织样品中，未看到这些磷酸化的蛋白。
结论
总之，上述结果为促进veds发病机制的可靶向的信号传递异常提供了第一个证据。这些数据支持以下假设：增加的plc/ip3/pkc信号传递驱动增加的mapk/erk活化，这转而增加veds小鼠模型中由主动脉夹层引起的死亡风险。
证实了通过mek(erk的活化剂)的药理学抑制，或pkc的药理学抑制，或plc/ip3/pkc/erk轴的药理学抑制对erk活化的抑制，足以挽救主动脉夹层引起的死亡。抑制该通路的药剂将为血管性埃勒斯-当洛斯综合征和潜在的其它结缔组织障碍提供治疗益处。
此外，plc/ip3/pkc/erk活化剂可能在veds主动脉中显示出配合上调，这通过分析rna-seq谱图中出现的候选物来进行试验。
参考文献
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实施例7：雄激素在主动脉夹层风险和与肼屈嗪的联合疗法中具有显著作用.
如通过对主动脉裂解物进行免疫印迹所评估的，pkcβ的药理学抑制阻止了主动脉壁中pkc的自磷酸化以及erk的磷酸化(图4a-4c)。mek的药理学抑制不仅与预期的erk(mek的下游底物)的磷酸化减少有关，而且奇怪的是也与pkc磷酸化减少有关，这表明存在正反馈回路(图1,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)。考比替尼和芦布妥林均未对血压产生影响。
用于治疗veds的肼屈嗪和比卡鲁胺的联合疗法
用肼屈嗪(32mg/kg/d)(其阻断plc/ip3/pkc/erk轴)治疗小鼠提供了显著的保护：在45天龄(未治疗的veds小鼠的生存中值)时98％的存活率。尽管存活率在青春期受到影响，但这种风险几乎只出现在雄性小鼠中(图2a和2b)，因此假设雄激素拮抗剂的治疗可能对这些小鼠有益。实际上，肼屈嗪(32mg/kg/d)与比卡鲁胺(50mg/kg/d)的组合导致雄性小鼠中90％的存活率，与此相比，在仅肼屈嗪治疗的雄性小鼠中仅为24％的存活率(图6)。
奇怪的是，如果在青春期之后(生命的90天)去除比卡鲁胺，同时继续施用肼屈嗪，雄性小鼠继续以相同的比率存活(图6)，从而提示，在该小鼠模型中存在对雄激素敏感性的时间依赖性。在信息上，仅用比卡鲁胺治疗的雄性小鼠导致约80％的中间存活率，而在青春期后去除比卡鲁胺后，雄性不能继续存活(图7)，这表明单独对雄激素信号传递的抑制不足以预防veds小鼠模型中的主动脉疾病。
用于治疗veds的肼屈嗪和螺内酯的联合疗法
发现雄激素在我们的veds小鼠模型中的主动脉夹层风险中起着显著作用的这些新的观察和认识，导致试验了另一种fda批准的药物与肼屈嗪组合。螺内酯是fda批准的利尿药，其具有直接雄激素拮抗效果作为副作用。螺内酯用于在说明书标明以外特异性地治疗痤疮、多毛症和其它雄激素依赖性的障碍1。假设螺内酯也可以在该障碍中用作直接的雄激素拮抗剂。
仅用螺内酯(100mg/kg/d)治疗小鼠(图8a)，观察到约80％的中间存活率，类似于仅用比卡鲁胺的治疗结果。但是，螺内酯(100mg/kg/d)和肼屈嗪(32mg/kg/d)的组合导致在治疗50天后100％的存活率，类似于肼屈嗪和比卡鲁胺的组合(图8b)。
用于治疗veds的肼屈嗪和芦布妥林的联合疗法
在实施例中，考虑了包括施用肼屈嗪和芦布妥林的联合疗法。芦布妥林是蛋白激酶c-β(pkc-β)抑制剂，是礼来公司(elililly)开发的大环双吲哚基马来酰亚胺化合物，有望作为糖尿病性黄斑水肿和其它糖尿病性血管病，包括糖尿病性视网膜病变、糖尿病性周围神经病和糖尿病性肾病的治疗方法。另外的芦布妥林命名包括arxxant(提议的商标名称)，iupac：(9s)-9-[(二甲基氨基)甲基]-6,7,10,11-四氢-9h,18h-5,21:12,17-二(甲基)二苯并[e,k]吡咯并[3,4-h][1,4,13]氧杂二氮杂环十六碳炔-18,20-二酮，和cas编号：169939-94-0。
下面提供了芦布妥林的结构：
用于治疗veds的肼屈嗪和恩扎妥林的联合疗法
在实施例中，考虑了包括施用肼屈嗪和恩扎妥林的联合疗法。恩扎妥林是一种合成的双吲哚基马来酰亚胺，它具有潜在的抗肿瘤活性。结合到atp-结合位点，恩扎妥林选择性地抑制蛋白激酶cβ(pkc-β)，该酶参与诱导血管内皮生长因子(vegf)刺激的新生血管生成。这种药剂可能减少肿瘤血液供给，从而阻止生长。另外的恩扎妥林命名法包括：ly-317615，iupac：3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-[1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基]吲哚-3-基]吡咯-2,5-二酮，和cas编号：170364-57。
下面提供了恩扎妥林的结构：
用于治疗veds的肼屈嗪和索曲妥林的联合疗法
在实施例中，考虑了包括施用肼屈嗪和索曲妥林的联合疗法。索曲妥林(eab071)是一种研究性免疫抑制剂，其通过蛋白激酶c抑制来阻断t-淋巴细胞的活化。
下面提供了索曲妥林的结构：
用于治疗veds的肼屈嗪和抗雄激素的联合疗法
试验了肼屈嗪和不同的抗雄激素的其它组合。例如，考虑了肼屈嗪和雄激素受体拮抗剂，包括甾体类抗雄激素(醋酸环丙孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、奥生多龙和醋酸奥沙特隆)。此外，考虑了肼屈嗪与非甾体类抗雄激素诸如氟他胺、尼鲁米特、托普鲁胺、恩杂鲁胺、屈螺酮或美屈孕酮的组合。
在其它实施例中，考虑了包含肼屈嗪和雄激素合成抑制剂或抗促性腺激素的联合疗法。示例性的雄激素合成抑制剂包括酮康唑、醋酸阿比特龙、七唯子(七唯子)、氨鲁米特、非那雄胺、度他雄胺、依立雄胺和α-雌二醇。示例性的抗促性腺激素包括亮丙瑞林和西曲瑞克。其它考虑的抗雄激素包括炔雌醇和己烯雌酚。
增加剂量的肼屈嗪
此外，肼屈嗪的剂量可能在该小鼠模型中不足以完全抑制该通路，更高剂量的肼屈嗪可能证明是有益的。因此，用更高剂量的肼屈嗪治疗这些小鼠，并发现增加剂量的肼屈嗪(50mg/kg/d)不会比32mg/kg/d剂量提高存活率(图9)。
实施例8：缩宫素诱导的信号传递
缩宫素诱导的erk信号传递被用作检验以下假设的方法：plc/ip3/pkc/erk轴的活化会恶化主动脉夹层的风险。在本文描述的veds小鼠模型中，发现妊娠和泌乳与veds小鼠在产后前30天由于动脉夹层而导致的60％的致死率相关，并且通过出生后移走幼崽、用肼屈嗪(16mg/kg/d)治疗或用曲美替尼治疗来阻止泌乳，能够预防veds小鼠中的夹层和死亡。如通过免疫印迹法和通过erk靶基因表达所测量的，该增加的死亡风险与erk活化的增加有关，而保护免于主动脉夹层与erk活化减少有关。
添加了使用特异性缩宫素受体拮抗剂对小鼠的治疗2(使用的选择性缩宫素受体拮抗剂为desgly-nh2,d(ch2)5[d-tyr2,thr4]ovt)，其导致仍在泌乳的veds小鼠中在产后前30天的95％存活率，表明由伴随妊娠的主动脉夹层引起的显著升高的死亡风险是由母乳喂养期间缩宫素受体的活化而被特异性地驱动(图10a和10b)。
此外，证实了用普萘洛尔治疗(图10b)在该妊娠/母乳喂养模型中没有影响存活率(产后30天以后，46％存活率vs.50％存活率)，普萘洛尔是这一群体中的护理标准，并且在不影响plc/ip3/pkc/erk信号传递的情况下降低血压。该数据进一步支持，增加plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化导致在我们的veds小鼠模型中由于主动脉夹层引起的显著升高的死亡风险，并且进一步，抑制plc/ip3/pkc/erk信号传递通路会改善这种风险。
gpcr活化plc/ip3/pkc/erk信号传递通路
由于鉴定出plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化在veds中是致病性的，因此鉴定了可能在活化该异常信号传递通路的受体。gpcr(gq)通过该通路传递信号——在主动脉中常见的gq受体包括血管紧张素ii受体、凝血酶受体、内皮缩血管肽-1受体、加压素受体1、鞘氨醇-1-磷酸受体、α-1肾上腺素能受体和血清素受体。但是，还存在也在主动脉中表达的孤儿gpcr，例如已证实与胶原蛋白3相互作用的gpr563,4。
假定如果受体的活性受到抑制，则可以鉴定信号传递通路如何被活化。首先通过用血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦(60mg/kg/d)处理小鼠，来抑制血管紧张素-ii的信号传递(图11a)，但是发现它对存活率没有影响。接着，用凝血酶受体拮抗剂伏拉帕沙(1mg/kg/d)处理小鼠，但是发现它也对存活率没有影响(图11b)。
试验了其它特异性的gq受体抑制剂。被试验的示例性的gq受体抑制剂包括内皮缩血管肽-1受体、加压素受体1、鞘氨醇-1-磷酸受体、α-1肾上腺素能受体、血清素受体和孤儿gpcr诸如gpr56。
酪氨酸激酶受体和plc/ip3/pkc/erk信号传递通路
plc/ip3/pkc/erk信号传递通路还可以被在主动脉中表达的酪氨酸激酶受体反式激活。这些包括egfr、vegfr、fgfr和pdgfr。为了检验酪氨酸激酶受体被异常活化并导致plc/ip3/pkc/erk信号传递通路升高的假说，用非特异性的酪氨酸激酶受体拮抗剂尼达尼布(50mg/kg/d)进行治疗，但是发现它也对存活率没有影响(图12)。这提示酪氨酸激酶受体活化没有驱动veds小鼠中plc/ip3/pkc/erk信号传递通路的活化。
β-肾上腺素能受体阻滞剂和主动脉破裂的风险
其它人已经提出5-8，veds表型是慢性“虚弱”组织的结果，因此提出用β-肾上腺素能受体阻滞剂降低血压会降低这些患者中主动脉破裂的风险。为了解决这个假设，用非特异性的β拮抗剂普萘洛尔(80mg/kg/d)、特异性的β1拮抗剂阿替洛尔(120mg/kg/d)和β1拮抗剂/β2激动剂塞利洛尔(200mg/kg/d)治疗小鼠，但发现尽管血压降低，但这些操作均未导致我们的veds小鼠模型中的存活率改善(图13a-13c)。塞利洛尔甚至在小鼠模型中加快了主动脉夹层的风险，并且具有col3a1g209s/ 突变的veds突变也证明了塞利洛尔的主动脉夹层的风险增加(图14)。由于这并非所有β拮抗剂都常见，因此该观察结果可能是由塞利洛尔的β2激动活性所驱动的。
还试验了钙通道阻滞剂，其通过另一种机制降低血压。发现氨氯地平(12mg/kg/d)也增加了小鼠模型中主动脉夹层的风险，并且这已经被证明也与mfs(马凡氏综合征)小鼠一致9(图15)。
实施例9：用蛋白激酶c-β(pkc-β)抑制剂治疗马凡氏综合征.
在实施例中，将不同的pkc-β抑制剂用于治疗马凡氏综合征。例如，马凡氏综合征的治疗可以包括施用芦布妥林。此处证明了使用芦布妥林(10mg/kg/d)对pkcβ的药理学抑制，会挽救马凡氏综合征小鼠中的主动脉根生长(p＝2e-4,图19)。在其它实施例中，马凡氏综合征的治疗包括施用恩扎妥林或索曲妥林。
用于治疗veds的肼屈嗪和抗雄激素的联合疗法
试验了肼屈嗪和不同的抗雄激素的其它组合。例如，考虑了肼屈嗪和雄激素受体拮抗剂，包括甾体类抗雄激素(醋酸环丙孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、奥生多龙和醋酸奥沙特隆)。此外，考虑了肼屈嗪与非甾体类抗雄激素诸如氟他胺、尼鲁米特、托普鲁胺、恩杂鲁胺、屈螺酮或美屈孕酮的组合。
在其它实施例中，考虑了包含肼屈嗪和雄激素合成抑制剂或抗促性腺激素的联合疗法。示例性的雄激素合成抑制剂包括酮康唑、醋酸阿比特龙、七唯子、氨鲁米特、非那雄胺、度他雄胺、依立雄胺和α-雌二醇。示例性的抗促性腺激素包括亮丙瑞林和西曲瑞克。其它考虑的抗雄激素包括炔雌醇和己烯雌酚。
实施例10：药理学抑制增加veds小鼠中的存活率.
恩扎妥林的药理学pkc抑制会增加veds小鼠中的存活率
col3a1g209s/ 和col3a1g938d/ 小鼠模型重现了veds表型，并被用于试验治疗veds的药剂。用良好耐受的口服施用的药剂恩扎妥林，以约30mg/kg/天治疗小鼠。通过结合atp-结合位点，恩扎妥林选择性地抑制蛋白激酶cβ(pkc-β)，且因此假设药理学pkc抑制剂会挽救死于主动脉夹层的风险。与未治疗的小鼠中的存活率显著降低相比(例如，与对照小鼠相比统计上显著的差异)，在治疗约30天(1个月)后观察到约100％的存活率。
还对小鼠进行至少约45天的治疗，并评价恩扎妥林治疗的小鼠相对于对照小鼠的存活率。
还用较高剂量的恩扎妥林治疗小鼠，例如，约40mg/kg/天、50mg/kg/天或100mg/kg/天。在其它实施例中，每天一次或每天两次用恩扎妥林治疗小鼠。
这些结果提示，在主动脉中使用恩扎妥林抑制过度的plc/ip3/pkc/erk信号传递会挽救在veds小鼠模型中由于主动脉夹层所致的死亡风险。
用索曲妥林的药理学pkc抑制会增加veds小鼠的存活率
将使用本文所述的小鼠模型(例如，col3a1g209s/ 和col3a1g938d/ 小鼠模型)的其它研究用于试验治疗veds的其它药剂。评价用良好耐受的口服施用的药剂索曲妥林以约30mg/kg/天治疗的小鼠。索曲妥林(aeb071)是通过蛋白激酶c抑制，来阻断t-淋巴细胞活化的免疫抑制剂。类似于恩扎妥林，假设pkc抑制剂(例如，索曲妥林)也会挽救因主动脉夹层而死亡的风险。与未治疗的小鼠中显著降低的存活率(例如，与对照小鼠相比统计上显著的差异)相比，在治疗约30天(1个月)后观察到约100％的存活率。还对小鼠进行至少约45天的治疗，并评价索曲妥林治疗的小鼠相对于对照小鼠的存活率。
还用较高剂量的索曲妥林治疗小鼠，例如，约40mg/kg/天、50mg/kg/天或100mg/kg/天。在其它实施例中，每天一次或每天两次用索曲妥林治疗小鼠。
这些结果证实，在主动脉中使用索曲妥林抑制过度的plc/ip3/pkc/erk信号传递，会挽救在veds小鼠模型中由于主动脉夹层所致的死亡风险。
参考文献
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其它实施方案
尽管已经结合其详细说明描述了本发明，但是前述说明书意在进行说明，并且不限制本发明的范围，本发明的范围由随后的权利要求书的范围限定。其它方面、优点和改变是在下述权利要求书的范围内。
本文所提及的专利和科学文献建立了本领域技术人员可获得的知识。本文引用的所有美国专利以及已公开或未公开的美国专利申请通过引用并入。本文引用的所有公开的外国专利和专利申请特此通过引用并入。由本文引用的登录号指示的genbank和ncbi提交文件特此通过引用并入。本文引用的所有其它公开的参考文献、文件、手稿和科学文献特此通过引用并入。
尽管已经参考其优选实施方案特别地显示和描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，可以在其中做出形式和细节的各种变化，且不脱离所附权利要求书所涵盖的本发明的范围。
1.一种治疗受试者中的血管病变的方法，所述方法包括：
施用有效量的药剂，从而治疗所述血管病变，其中所述药剂减少细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述血管病变包含血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述药剂包含小分子。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述药剂包含考比替尼或其药学上可接受的盐。
6.根据权利要求3所述的方法，其中所述药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求3所述的方法，其中所述药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括施用减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的活性或表达的药剂。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述药剂的有效量是约0.001mg/kg至250mg/kg体重。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者包含与正常对照不同的erk或pkc蛋白或mrna的水平。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者包含与正常对照相比高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的erk或pkc蛋白或mrna的水平。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者包含与正常对照相比高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的erk或pkc活性的水平。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述水平是在得自所述受试者的试验样品中。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述试验样品包含血液、血清、血浆、唾液、泪液、玻璃体、脑脊液、汗液、脑脊液或尿液。
16.一种治疗受试者中的结缔组织障碍的方法，所述方法包括：
施用有效量的药剂，从而治疗所述结缔组织障碍，其中所述药剂减少细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述结缔组织障碍选自血管病变、马凡氏综合征、洛伊斯·迪茨综合征和家族性胸主动脉瘤。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述血管病变包含血管性埃勒斯-当洛斯综合征(veds)。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述药剂包含小分子。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述药剂包含考比替尼或其药学上可接受的盐。
22.根据权利要求19所述的方法，其中所述药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。
24.根据权利要求19所述的方法，其中所述药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求16所述的方法，所述方法进一步包括施用减少磷脂酶c(plc)或肌醇三磷酸(ip3)的活性或表达的药剂。
26.一种用于治疗血管病变的药物组合物，所述组合物包含有效量的药剂，其中所述药剂减少细胞外信号调节激酶(erk)或蛋白激酶c(pkc)的活性或表达，从而治疗所述血管病变。
27.根据权利要求26所述的药物组合物，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。
28.一种试剂盒，其包含1)权利要求26至27中任一项的药物组合物，和2)关于治疗血管病变的书面说明书。
29.一种治疗结缔组织障碍的方法，所述方法包括：
施用有效量的药剂，从而治疗所述结缔组织障碍，其中所述药剂包含抗体或其片段、多肽、小分子、核酸分子或它们的任意组合。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述结缔组织障碍包含马凡氏综合征。
31.根据权利要求29所述的方法，其中所述药剂减少蛋白激酶c(pkc)的活性或表达。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述药剂使pkc蛋白或mrna的水平与正常对照相比减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、50-75％、75-100％、1倍、2倍、3倍、4倍或5倍。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述药剂使pkc活性的水平与正常对照相比减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、99％、100％、5-50％、5倍。
34.根据权利要求29所述的方法，其中所述药剂包含恩扎妥林或其药学上可接受的盐。
35.根据权利要求29所述的方法，其中所述药剂包含索曲妥林或其药学上可接受的盐。
36.根据权利要求29所述的方法，其中所述药剂包含芦布妥林或其药学上可接受的盐。
技术总结