一种脐带血采集方法及其应用与流程

1.本发明属于血液采集技术领域，尤其涉及一种脐带血采集方法及其应用。


背景技术：

2.约10％的早产新生儿面临多种早产并发症，包括肺支气管发育不良、水肿、生理性贫血、呼吸道和消化道感染以及神经系统发育缓慢等，是导致早产儿死亡的主要原因。早产儿并发症发生的病理基础为单个核细胞数量不足所导致的全身器官发育不良，现有的治疗方法为单器官对症治疗，但未能解决多器官前体细胞缺乏、损伤后修复能力降低、器官功能发育障碍的根本问题。
3.人类脐带血中含有大量的内皮祖细胞、间充质基质细胞(mesenchymal stromal cell)等干细胞成分，可用于早产儿并发症的预防。因此，快速、高效采集脐带血具有重要的意义。cn202198683u公开了一种脐带血采集套装盒，包括外包装盒和内包装盒，所述内包装盒上设有脐带血采集袋凹槽和采血管凹槽；所述脐带血采集袋凹槽内放置有脐带血采集袋、采集登记表、脐带血采集医生护士操作说明、一次性真空采血针；所述采血管凹槽内放置母血采血管；所述脐带血采集袋和采血管分别装入设有封口的生物安全袋中。该装置可以保护脐带血在运输及储存过程中免受紫外照射、碰撞、温度的影响，但对脐带血采集的体积、细胞数量等并无影响。
4.目前提倡脐带血延迟结扎，但是存在脐带血由胎儿向胎盘反流的可能性，也对早产儿出生后保温、抢救等治疗方案的实施造成了影响，致使延迟结扎后脐带血采集失败率上升以及采集到的脐带血中分离的单个核细胞不足以达到早产儿并发症预防的使用数量。如何提供一种脐带血采集的方法，能够增加脐带血采集的体积及血液中的细胞数量，已成为亟待解决的问题。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种脐带血采集方法及其应用，通过两次挤压可以增加脐带血的采集体积及脐带血中有核细胞的数量，为早产儿并发症的预防创造了有利条件，同时缩短了采集时间，有效降低了新生儿低温症的发生率，提高了早产儿的存活率。
6.为达此目的，本发明采用如下技术方案：
7.第一方面，本发明提供了一种脐带血采集方法，所述脐带血采集方法包括：
8.胎儿娩出后，挤压脐带3～5s，剪断脐带后，将采血针刺入脐静脉，再次挤压脐带，将脐带血采集到采集袋中，所述挤压脐带的时间例如可以是3s、3.5s、4s、4.5s或5s等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
9.本发明中，通过第一次挤压脐带，可以防止脐带血由胎儿端逆流向胎盘端，达到了脐带血延迟结扎的效果，同时缩短了早产儿置于手术台上的时间，避免低温症的发生，也不会增加对早产儿采取急救措施的抢救时间；剪断脐带后再次挤压，可以增加采集的脐带血
的体积及脐带血中有核细胞的数量，并缩短了采集的时间，不影响产妇的正常治疗。
10.优选地，所述挤压脐带的方向为由胎盘端向胎儿端。
11.优选地，所述脐带血采集方法还包括对脐带进行消毒的步骤。
12.优选地，所述脐带血采集方法还包括检测胎儿肛温的步骤。
13.优选地，所述剪断脐带的位置为距离胎儿5～6cm，例如可以是5cm、5.1cm、5.2cm、5.3cm、5.4cm、5.5cm、5.6cm、5.7cm、5.8cm、5.9cm或6cm等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
14.优选地，所述采血针刺入脐静脉的位置为脐带远端。
15.优选地，所述再次挤压脐带的方向为由近端向远端。
16.优选地，所述再次挤压脐带的次数为5～6次，例如可以是5次或6次。
17.优选地，所述再次挤压脐带时，脐带位于胎盘低位处，采集袋位于脐带低位处。
18.本发明中，通过胎盘、脐带及采集袋之间的物理高度的不同可以进一步增加脐带血的采集体积，并且可以缩短采集的时间。
19.优选地，所述脐带血采集方法还包括摇晃采集袋的步骤。
20.优选地，所述脐带血采集方法还包括对所得脐带血进行检测的步骤。
21.优选地，所述检测的项目包括脐带血体积、有核细胞数量、单个核细胞活性率、病毒、细菌、霉菌和cd34

细胞。
22.作为优选技术方案，本发明所述的脐带血采集方法，包括以下步骤：
23.(1)胎儿娩出后，由胎盘端向胎儿端挤压脐带3～5s；
24.(2)对脐带进行消毒，检测胎儿肛温，在距离胎儿5～6cm处剪断脐带，将采血针刺入位于脐带远端的脐静脉，由近端向远端再次挤压脐带5～6次，脐带位于胎盘低位处，采集袋位于脐带低位处，将脐带血采集到采集袋中；
25.(3)摇晃采集袋，对所得脐带血进行检测，所述检测的项目包括脐带血体积、有核细胞数量、单个核细胞活性率、病毒、细菌、霉菌和cd34

细胞。
26.第二方面，本发明提供了第一方面所述的脐带血采集方法在制备脐带血有核细胞中的应用。
27.本发明中，所述脐带血采集方法操作简便，无需借助专用的仪器或设备，采集效果好，增加脐带血采集体积的同时，其内的有核细胞的数量也有明显增加，可用于后续的研究或治疗中。
28.相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
29.本发明所述的脐带血采集方法无需借助专用的仪器及设备，操作简单，适用性强；采集过程均为物理操作，采集得到的脐带血性质稳定，对后续的储存及使用无不良影响；操作总时间不超过30s，缩短了早产儿置于手术台上的时间，降低了低温症的发生概率，同时也不影响对产妇的正常治疗与护理；通过上述方法采集到的脐带血体积较多，至少为普通方法采集到的血液体积的2倍；脐带血中有核细胞数量较多，数量不低于1.5
×
109个，可应用于早产儿并发症的预防中，对提高早产儿存活率具有重要的意义。
附图说明
30.图1a是本发明实施例1和对比例1采集得到的脐带血的体积统计图片；
31.图1b是本发明实施例1和对比例1采集得到的脐带血分离有核细胞后的体积的统计图片；
32.图2是本发明实施例1和对比例1采集得到的脐带血中分离的有核细胞的统计图片；
33.图3是本发明实施例1和对比例1中的采集方法的用时的统计图片；
34.图4a是采用本发明对比例1中的采集方法后发生了低温症的新生儿的统计图片；
35.图4b是采用本发明实施例1中的采集方法后发生了低温症的新生儿的统计图片。
具体实施方式
36.为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
37.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
38.材料：
39.脐带血采集袋购自山东威高，内含28ml血液保存液。
40.实施例1
41.本实施例提供一种脐带血采集方法，包括以下步骤：
42.(1)胎儿娩出后，用无菌布斤擦干胎儿，洗耳球吸干口鼻，用浸有75％酒精的无菌纱布由胎盘端向胎儿端挤压脐带5s；
43.(2)对脐带进行消毒，检测胎儿肛温，确认胎儿肛温不低于36.5℃后，在距离胎儿5cm处剪断脐带，将采血针刺入位于脐带远端的脐静脉，由近端向远端再次挤压脐带5次，挤压过程中脐带位于胎盘低位处，采集袋位于脐带低位处，将脐带血采集到采集袋中；
44.(3)摇晃采集袋，贴身份标签后置入冰箱中冷藏保存，并对所得脐带血进行检测，所述检测的项目包括脐带血体积、有核细胞数量、单个核细胞活性率、病毒、细菌、霉菌和cd34

细胞。
45.实施例2
46.本实施例提供一种脐带血采集方法，包括以下步骤：
47.(1)胎儿娩出后，用无菌布斤擦干胎儿，洗耳球吸干口鼻，用浸有75％酒精的无菌纱布由胎盘端向胎儿端挤压脐带4s；
48.(2)对脐带进行消毒，检测胎儿肛温，确认胎儿肛温不低于36.5℃后，在距离胎儿5.5cm处剪断脐带，将采血针刺入位于脐带远端的脐静脉，由近端向远端再次挤压脐带6次，挤压过程中脐带位于胎盘低位处，采集袋位于脐带低位处，将脐带血采集到采集袋中；
49.(3)摇晃采集袋，贴身份标签后置入冰箱中冷藏保存，并对所得脐带血进行检测，所述检测的项目包括脐带血体积、有核细胞数量、单个核细胞活性率、病毒、细菌、霉菌和cd34

。
50.实施例3
51.本实施例提供一种脐带血采集方法，包括以下步骤：
52.(1)胎儿娩出后，用无菌布斤擦干胎儿，洗耳球吸干口鼻，用浸有75％酒精的无菌纱布由胎盘端向胎儿端挤压脐带3s；
53.(2)对脐带进行消毒，检测胎儿肛温，确认胎儿肛温不低于36.5℃后，在距离胎儿6cm处剪断脐带，将采血针刺入位于脐带远端的脐静脉，由近端向远端再次挤压脐带5次，挤压过程中脐带位于胎盘低位处，采集袋位于脐带低位处，将脐带血采集到采集袋中；
54.(3)摇晃采集袋，贴身份标签后置入冰箱中冷藏保存，并对所得脐带血进行检测，所述检测的项目包括脐带血体积、有核细胞数量、单个核细胞活性率、病毒、细菌、霉菌和cd34

。
55.对比例1
56.与实施例1的区别仅在于，本对比例在采集过程中不进行步骤(1)和步骤(2)中挤压脐带的步骤，其余步骤与实施例1相同。
57.对比例2
58.与实施例1的区别仅在于，本对比例在采集过程中不进行步骤(1)中挤压脐带的步骤，其余步骤与实施例1相同。
59.对比例3
60.与实施例1的区别仅在于，本对比例在采集过程中不进行步骤(2)中挤压脐带的步骤，其余步骤与实施例1相同。
61.测试例1
62.本测试例对实施例1和对比例1采集的脐带血进行测试，包括脐带血采集体积测试、脐带血中有核细胞数量测试、用时测试及新生儿低温症发生概率测试。
63.脐带血采集体积测试
64.根据以下公式计算采集到的脐带血体积。
65.脐带血体积＝(脐带血与采集袋总质量
‑
采集袋质量)/脐带血密度。
66.式中，脐带血密度为1.05kg/ml。
67.根据上述公式，计算得到的脐带血采集体积如图1a所示。
68.由图1a可以看出，采用本发明实施例1中的方法采集到的脐带血体积明显增多，甚至高于对比例1中采集体积的2倍，这表明对脐带进行2次挤压是必要的，可以显著提高脐带血的采集体积。
69.分离采集的脐带血中的有核细胞：低温离心机进行倒置离心，离心条件为4℃下50g离心8min，去除红细胞，进一步通过低温离心机进行正置离心，离心条件为4℃下400g离心10min，分离出单个核细胞，同时去除血浆，获得单个核细胞。
70.取1ml血样用于cfu
‑
gm集落细胞培养、有核细胞活性、cd34 细胞含量分析。
71.再次测量细胞分离后脐带血的体积，脐带血体积＝(脐带血与采集袋总质量
‑
采集袋质量)/脐带血密度。
72.式中，脐带血密度为1.05kg/ml。
73.结果如图1b所示。由图1b可以看出，实施例1采集的脐带血分离有核细胞后体积无明显变化，保证分离后的有核细胞体积不增加早产儿循环负荷，同时提高单位体积细胞密度。
74.脐带血中有核细胞数量测试
75.分别分离实施例1和对比例1采集的脐带血中的有核细胞，应用spss统计分析软件通过两组间t检验对数量进行统计，结果如图2所示。
76.由图2可以看出，实施例1中采集的脐带血中分离的有核细胞的数量较多，显著高于对比例1中采集的脐带血。这表明采用合适的采集方法可以显著提高脐带血中有核细胞的数量，回输到早产儿体内可以有效预防早产儿并发症。
77.用时测试
78.分别对实施例1和对比例1的采集方法所需的采集时间进行测试，每组测试35次，对结果进行统计，如图3所示。
79.由图3可以看出，与对比例1相比，实施例1的采集时间明显较短，可以减少胎儿在手术台上的停留时间，降低了新生儿低温症发生的概率，也为产妇的救治争取了宝贵的时间。
80.新生儿低温症发生概率测试
81.对用时测试中发生了低温症的婴儿数量进行分别统计，结果如图4a和图4b所示。
82.由图4a可以看出，采用对比例1的方法所需的采集时间较长，超过1/4的新生儿均发生了低温症；结合图4b，可以看出采用实施例1中的方法后，低温症发生的概率降至约1/6，为提高新生儿的出生率创造了条件，具有重要的意义。
83.此外，实施例2和实施例3的结果与实施例1相近，对比例2和对比例3的结果与对比例1相近，此处不再重复展示。
84.综上所述，本发明提供了一种脐带血采集方法，操作简单，无需借助其他仪器，实用性很强；采集需要的时间较短，避免了新生儿低温症的发生，也为产妇的治疗与护理争取到宝贵的时间；通过上述方法采集到的脐带血的体积较多，血液中有核细胞的数量明显增加；采集得到的脐带血可进行储存，或回输到早产儿体内，为早产儿并发症的预防创造了条件。
85.申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。