细胞培养用支架材料、细胞培养用容器、细胞培养用纤维和细胞的培养方法与流程

1.本发明涉及用于培养细胞的细胞培养用支架材料。此外，本发明涉及：使用了所述细胞培养用支架材料的细胞培养用容器、细胞培养用纤维和细胞的培养方法。


背景技术：

2.在学术领域、制药领域和再生医疗领域等的研究开发中，使用了人、小鼠、大鼠、猪、牛和猴等的动物细胞。作为用于培养动物细胞的支架材料，使用了：层粘连蛋白和玻连蛋白等的粘接蛋白、以及小鼠肉瘤来源的基质胶等的天然高分子材料。
3.此外，已知下述的专利文献1～3表示的使用了合成树脂的支架材料。
4.下述的专利文献1公开了：含有包含聚乙烯醇缩醛化合物的成形物或包含该聚乙烯醇缩醛化合物和水溶性多糖类的成形物，并且该聚乙烯醇缩醛化合物的缩醛化度为20～60摩尔％的细胞培养用载体。
5.下述的专利文献2公开了：作为用于在未分化的状态下培养未分化细胞的支架材料，并且包含水凝胶的支架材料。
6.此外，下述的专利文献3公开了：作为用于保持多能性干细胞的未分化性的细胞培养方法，并且包含在具有被聚轮烷嵌段共聚物包覆的表面的培养器上培养该多能性干细胞的工序的方法。
7.现有技术文献
8.专利文献
9.专利文献1：日本特开2006
‑
314285号公报
10.专利文献2：日本特开2010
‑
158180号公报
11.专利文献3：日本特开2017
‑
23008号公报


技术实现要素：

12.发明所解决的技术问题
13.能够使用天然高分子材料作为支架材料，来提高接种后的细胞的固定性。然而，天然高分子材料价格较高，作为天然来源物质而批次间的不均较大，或者由于动物来源的成分而在安全上存在风险。
14.另一方面，专利文献1～3所述的使用了合成树脂的支架材料，相比于使用了天然高分子材料的支架材料，价格较低，批次间的不均较小，并且安全性优异。然而，专利文献1～3所述的使用了合成树脂的支架材料，亲水性非常高，因此该支架材料会通过液体培养基而发生溶胀，有时该支架材料会发生剥离等而使得强度劣化。此外，在专利文献1～3所述的使用了合成树脂的支架材料的情况下，有时细胞接种后的固定性较低，细胞无法充分增殖。
15.以往，难以制备具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定率较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。
16.本发明的目的在于，提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。此外，本发明还旨在，提供使用了所述细胞培养用支架材料的细胞培养用容器、细胞培养用载体、细胞培养用纤维和细胞的培养方法。
17.解决问题的技术手段
18.通过本发明的广泛方案，提供一种细胞培养用支架材料，其中，表面自由能的色散成分γ
d
为24.5mj/m2以上并且不足45.0mj/m2，表面自由能的偶极成分γ
p
为1.0mj/m2以上并且不足20.0mj/m2。
19.本发明的细胞培养用支架材料的一个特定方案中，所述细胞培养用支架材料包含合成树脂。
20.本发明的细胞培养用支架材料的其他特定方案中，所述合成树脂具有聚乙烯醇缩醛骨架和聚(甲基)丙烯酸酯骨架中的至少一种骨架。
21.本发明的细胞培养用支架材料的另一特定方案中，所述合成树脂为聚乙烯醇缩醛树脂。
22.通过本发明的广泛方案，提供一种细胞培养用支架材料，其为包含合成树脂的细胞培养用支架材料，所述合成树脂包含聚乙烯醇缩醛树脂，所述聚乙烯醇缩醛树脂的缩醛化度高于60摩尔％。
23.本发明的细胞培养用支架材料的一个特定方案中，所述聚乙烯醇缩醛树脂具有选自具有胺结构的结构单元、具有亚胺结构的结构单元和具有酰胺结构的结构单元中的至少一种结构单元。
24.本发明的细胞培养用支架材料的其他特定方案中，所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有胺结构的结构单元、所述具有亚胺结构的结构单元和所述具有酰胺结构的结构单元的总含量为0.1摩尔％以上30摩尔％以下。
25.本发明的细胞培养用支架材料的另一特定方案中，所述细胞为体细胞、干细胞、祖细胞或分化细胞。
26.通过本发明的广泛方案，提供一种细胞培养用容器，其在细胞的培养区域的至少一部分具备所述细胞培养用支架材料。
27.通过本发明的广泛方案，提供一种细胞培养用纤维，其包含所述细胞培养用支架材料。
28.通过本发明的广泛方案，提供一种细胞的培养方法，其中，使用所述细胞培养用支架材料。
29.本发明的细胞的培养方法的一个特定方案中，具备在所述细胞培养用支架材料上接种细胞团的工序。
30.发明的效果
31.通过本发明，提供：具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料以及使用了所述细胞培养用支架材料的细胞培养用容器、细胞培养用纤维和细胞的培养方法。
附图说明
32.[图1]图1是表示主要的合成树脂的表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
的关
系的图。
[0033]
[图2]图2是图1的部分扩大图。
[0034]
[图3]图3是图1的部分扩大图。
[0035]
本发明的具体实施方式
[0036]
以下，举出实施方式来进行本发明的说明，但是本发明不限于以下的实施方式。
[0037]
[细胞培养用支架材料1]
[0038]
本发明的细胞培养用支架材料的第一实施方式中，该细胞培养用支架材料的表面自由能的色散成分γ
d
为24.5mj/m2以上并且不足45.0mj/m2，表面自由能的偶极成分γ
p
为1.0mj/m2以上并且不足20.0mj/m2。
[0039]
本发明人发现了，通过控制细胞培养用支架材料的表面自由能，而能够解决上述的问题，从而完成了本发明。
[0040]
所述表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
，使用kaelble
‑
uy的理论式进行计算。kaelble
‑
uy的理论式如下述式(1)表示的，其为基于总表面自由能γ为色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
之和的假定的理论式。
[0041]
[数学式1]
[0042]
γ＝γ
d
γ
p
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1)
[0043]
此外，kaelble
‑
uy的理论式中，液体的表面自由能设为γ
l
(mj/m2)，固体的表面自由能设为γ
s
(mj/m2)，接触角设为θ(
°
)时，下述式(2)成立。
[0044]
[数学式2]
[0045][0046]
因此，可通过使用液体的表面自由能γ
l
已知的2种液体，测定对于使用细胞培养用支架材料而形成的树脂膜的接触角θ，解出γ
sd
和γ
sp
的联立方程式，从而求得细胞培养用支架材料的表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
。
[0047]
需要说明的是，本发明中，作为所述表面自由能γ
l
已知的2种所述液体，使用纯水和二碘甲烷。
[0048]
所述接触角θ使用接触角计(例如，协和界面化学公司制“dmo
‑
701”)并通过下述方式进行测定。
[0049]
在使用细胞培养用支架材料而形成的树脂膜的表面滴加1μl纯水或二碘甲烷。滴加起30秒后，将纯水与该树脂膜所成的角度设为对于纯水的接触角θ。此外，同样，滴加起30秒后，将二碘甲烷和该树脂膜所成的角度设为对于二碘甲烷的接触角θ。
[0050]
从能够适宜调整所述表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
的观点出发，所述细胞培养用支架材料优选包含合成树脂。从能够进一步适宜调整所述表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
的观点出发，所述合成树脂优选具有聚乙烯醇缩醛骨架和聚(甲基)丙烯酸酯骨架中的至少一种骨架。
[0051]
图1是表示主要的合成树脂的表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
的关系的图。图2和图3分别是图1的部分扩大图。需要说明的是，图1～3中，也表示了后述的实施例和比较例中使用的合成树脂的结果。
[0052]
从发挥本发明的效果的观点出发，所述细胞培养用支架材料的表面自由能的色散
成分γ
d
为24.5mj/m2以上并且不足45.0mj/m2，偶极成分γ
p
为1.0mj/m2以上并且不足20.0mj/m2。
[0053]
从进一步有效发挥本发明的效果的观点出发，所述细胞培养用支架材料的表面自由能的色散成分γ
d
优选为28.0mj/m2以上，更优选为32.8mj/m2以上，优选为38.0mj/m2以下，更优选为36.0mj/m2以下。
[0054]
从进一步有效发挥本发明的效果的观点出发，所述细胞培养用支架材料的表面自由能的偶极成分γ
p
优选为2.5mj/m2以上，优选为10.0mj/m2以下，更优选为5.0mj/m2以下。
[0055]
所述色散成分γ
d
和所述偶极成分γ
p
，例如，可通过适宜改变下述合成树脂的骨架来进行控制。
[0056]
所述色散成分γ
d
，例如，可通过提高合成树脂中的非极性官能团的含量或导入具有环状结构的官能团来提高，并且可通过降低合成树脂中的丁基含量等来降低。
[0057]
所述偶极成分γ
p
，例如，可通过提高合成树脂中的极性官能团的含量或导入包含醚结构的官能团来提高，并且可通过提高作为非极性官能团的丁基的含量来降低。
[0058]
(合成树脂)
[0059]
合成树脂是指，以聚合性单体(以下，也简称为“单体”)聚合(包含缩聚)而得到的聚合物(以下，也简称为“聚合物”)为主要成分的物质。所述聚合物可以为仅1种单体聚合而成的均聚物，或2种以上的单体聚合而成的共聚物。
[0060]
作为所述聚合物，例如，可举出：包含饱和或不饱和烃、芳香族烃、饱和或不饱和脂肪酸、芳香族羧酸、饱和或不饱和酮、芳香族酮、饱和或不饱和醇、芳香族醇、饱和或不饱和胺、芳香族胺、饱和或不饱和硫醇、芳香族硫醇、有机硅化合物等中的1种以上的聚合性单体的聚合物。
[0061]
作为具体的所述聚合物，例如可举出：聚烯烃、聚醚、聚乙烯醇、聚乙烯醇缩醛树脂、聚酯、聚(甲基)丙烯酸酯、环氧树脂、聚酰胺、聚酰亚胺、聚氨酯(polyurethane)、聚碳酸酯、纤维素、多肽等。其中，就干细胞的固定性的观点而言，优选为聚(甲基)丙烯酸酯、聚乙烯醇缩醛，更优选为聚乙烯醇缩醛。
[0062]
从进一步提高细胞的固定性的观点出发，所述合成树脂优选具有聚乙烯醇缩醛骨架和聚(甲基)丙烯酸酯骨架中的至少一种骨架，优选为聚乙烯醇缩醛树脂。
[0063]
从进一步提高细胞的固定性的观点出发，所述聚合物优选为聚(甲基)丙烯酸酯或聚乙烯醇缩醛树脂，更优选为聚乙烯醇缩醛树脂。
[0064]
所述聚合物可以仅使用一种，也可以组合使用二种以上。在组合两种以上的聚合物的情况下，可将两种以上的聚合物混合使用，也可以作为使两种以上的聚合物的骨架进行化学键合而成的聚合物而进行使用。在组合两种以上的聚合物作为合成树脂的情况下，优选将聚(甲基)丙烯酸酯与聚乙烯醇缩醛进行组合。
[0065]
本说明书中，“(甲基)丙烯酸类”指选自(甲基)丙烯酸酯以及(甲基)丙烯酸中的至少1种。此外，聚(甲基)丙烯酸类是通过使作为其单体的(甲基)丙烯酸酯或(甲基)丙烯酸进行聚合所得到的聚合物，也包含使(甲基)丙烯酸酯或(甲基)丙烯酸以外的单体进行共聚而成的物质。
[0066]
作为所述(甲基)丙烯酸酯，并无特别限定，可举出：(甲基)丙烯酸烷基酯、(甲基)丙烯酸环烷基酯、(甲基)丙烯酸芳基酯、(甲基)丙烯酰胺类、聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯类、
(甲基)丙烯酸磷酸胆碱等。
[0067]
作为所述(甲基)丙烯酸烷基酯，例如可举出：(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸正丙酯、(甲基)丙烯酸异丙酯、(甲基)丙烯酸正丁酯、(甲基)丙烯酸异丁酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、(甲基)丙烯酸正辛酯、(甲基)丙烯酸异辛酯、(甲基)丙烯酸2
‑
乙基己酯、(甲基)丙烯酸壬酯、(甲基)丙烯酸异壬酯、(甲基)丙烯酸癸酯、(甲基)丙烯酸异癸酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯、(甲基)丙烯酸异十四烷基酯等。
[0068]
需要说明的是，这些(甲基)丙烯酸烷基酯并无特别限制，可取代有碳原子数1～3的烷氧基、四氢糠基等各种取代基。作为这样的(甲基)丙烯酸烷基酯的例子，可举出：丙烯酸甲氧基乙酯、丙烯酸四氢糠酯等。
[0069]
作为所述(甲基)丙烯酸环烷基酯，例如可举出：(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯等。
[0070]
作为所述(甲基)丙烯酸芳基酯，例如可举出：(甲基)丙烯酸苯酯、(甲基)丙烯酸苄酯等。
[0071]
作为所述丙烯酰胺类，例如可举出：(甲基)丙烯酰胺、n
‑
异丙基(甲基)丙烯酰胺、n
‑
叔丁基(甲基)丙烯酰胺、n,n
’‑
二甲基(甲基)丙烯酰胺、(3
‑
(甲基)丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵、4
‑
(甲基)丙烯酰基吗啉、3
‑
(甲基)丙烯酰基
‑2‑
噁唑烷酮、n
‑
[3
‑
(二甲基氨基)丙基](甲基)丙烯酰胺、n
‑
(2
‑
羟基乙基)(甲基)丙烯酰胺、n
‑
羟甲基(甲基)丙烯酰胺、6
‑
(甲基)丙烯酰胺己酸等。
[0072]
作为所述聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯类，例如可举出：甲氧基
‑
聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基
‑
聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、羟基
‑
聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基
‑
二乙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基
‑
二乙二醇(甲基)丙烯酸酯、羟基
‑
二乙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基
‑
三乙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基
‑
三乙二醇(甲基)丙烯酸酯、羟基
‑
三乙二醇(甲基)丙烯酸酯等。
[0073]
作为所述(甲基)丙烯酸磷酸胆碱，例如可举出：2
‑
(甲基)丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱等。
[0074]
作为(甲基)丙烯酸酯以外的单体，并无特别限定，可举出：(甲基)丙烯酸、乙烯、乙烯酯等。
[0075]
所述(甲基)丙烯酸酯可以单独使用，也可以组合使用2种以上。
[0076]
需要说明的是，在本说明书中，“(甲基)丙烯酸”是“丙烯酸”或“甲基丙烯酸”，“(甲基)丙烯酸酯”是“丙烯酸酯”或“甲基丙烯酸酯”。
[0077]
需要说明的是，从进一步有效发挥细胞的固定性的观点出发，本发明的细胞培养用支架材料的第一实施方式优选组合下述第二实施方式。
[0078]
[细胞培养用支架材料2]
[0079]
本发明的细胞培养用支架材料的第二实施方式包含合成树脂，该合成树脂包含聚乙烯醇缩醛树脂，该聚乙烯醇缩醛树脂的缩醛化度高于60摩尔％。
[0080]
本发明人发现了，通过使用包含缩醛化度高于60摩尔％的聚乙烯醇缩醛树脂的合成树脂，而能够解决上述的问题，从而完成了本发明。
[0081]
需要说明的是，本发明的细胞培养用支架材料包括：仅包含缩醛化度高于60摩尔％的聚乙烯醇缩醛树脂的方案。
[0082]
本发明的细胞培养用支架材料具备适宜的亲水性和强度，因此细胞接种后的固定性提高。特别是在不含饲养细胞、粘接蛋白的无血清培养基培养中，细胞接种后的初始固定率提高。
[0083]
以往，在使用合成树脂作为细胞培养用支架材料的情况下，未报告将合成树脂的缩醛化度设为高于60摩尔％。这是因为，伴随缩醛化度的增加会使得羟基的比例降低，而使得细胞培养用支架材料的亲水性降低，因此存在细胞接种后的固定性降低和细胞培养必需的多糖类等的透过性降低的风险。但是，本发明人发现强度比亲水性更为重要，通过将缩醛化度设为高于60摩尔％而提高细胞培养用支架材料的强度，而能够提高细胞接种后的固定性，从而完成了本发明。
[0084]
以下，对于聚乙烯醇缩醛树脂详细地进行说明。
[0085]
(聚乙烯醇缩醛树脂)
[0086]
聚乙烯醇缩醛树脂可通过利用醛对聚乙烯醇进行缩醛化来合成。聚乙烯醇缩醛树脂在侧链具有乙酰基、羟基及缩醛基。
[0087]
作为聚乙烯醇的缩醛化中使用的醛，没有特别限定。作为所述醛，例如，可举出碳原子数为1～10的醛等。所述醛可具有链状脂肪族基团、环状脂肪族基团或芳香族基团。所述醛可以为链状醛或环状醛。
[0088]
作为所述醛，可举出：甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、庚醛、辛醛、壬醛、癸醛、丙烯醛、苯甲醛、肉桂醛、紫苏醛、甲酰基吡啶、甲酰基咪唑、甲酰基吡咯、甲酰基哌啶、甲酰基三唑、甲酰基四唑、甲酰基吲哚、甲酰基异吲哚、甲酰基嘌呤、甲酰基苯并咪唑、甲酰基苯并三唑、甲酰基喹啉、甲酰基异喹啉、甲酰基喹喔啉、甲酰基肉桂啉、甲酰基喋啶、甲酰基呋喃、甲酰基氧杂环戊烷、甲酰基噁烷、甲酰基噻吩、甲酰基四氢噻吩、甲酰基硫化环戊烷、甲酰基腺嘌呤、甲酰基鸟嘌呤、甲酰基胞嘧啶、甲酰基胸腺嘧啶以及甲酰基尿嘧啶等。所述醛可以仅使用一种，也可以组合使用2种以上。
[0089]
所述醛优选为甲醛、乙醛、丙醛、丁醛或戊醛，更优选为丁醛。因此，聚乙烯醇缩醛树脂更优选为聚乙烯醇缩丁醛树脂。
[0090]
所述聚乙烯醇缩醛树脂的平均聚合度，优选为100以上，更优选为200以上，进一步优选为500以上，特别优选为1500以上，优选为6000以下，更优选为3000以下，进一步优选为2500以下。所述平均聚合度为所述下限以上时，即使液体培养基中发生溶胀，也能够适宜保持细胞培养用支架材料的强度，提高细胞增殖性。所述平均聚合度为所述上限以下时，能够提高操作性，提高细胞培养用支架材料的成形性。
[0091]
所述聚乙烯醇缩醛树脂的缩醛化度(聚乙烯醇缩丁醛树脂的情况下为缩丁醛化度)，优选为60摩尔％以上，进一步优选为65摩尔％以上，优选为90摩尔％以下，更优选为85摩尔％以下。所述缩醛化度所述下限以上时，细胞的固定性优异，能够高效率地进行细胞增殖。所述缩醛化度为所述上限以下时，能够使得对于溶剂的溶解性良好。
[0092]
所述聚乙烯醇缩醛树脂的乙酰化度(乙酰基量)，优选为0.0001摩尔％以上，优选为5摩尔％以下。
[0093]
所述聚乙烯醇缩醛树脂的缩醛度和乙酰化度可通过1h
‑
nmr(核磁共振谱)进行测定。
[0094]
所述聚乙烯醇缩醛树脂可以与乙烯基化合物共聚。所述聚乙烯醇缩醛树脂可以为
与乙烯基化合物形成的共聚物。本发明中，与乙烯基共聚物化而得到的聚乙烯醇缩醛树脂，也视为聚乙烯醇缩醛树脂。所述乙烯基化合物是具有乙烯基(h2c＝ch
‑
)的化合物。所述乙烯基化合物可以为包含具有乙烯基的结构单元的聚合物。
[0095]
所述共聚物可以为聚乙烯醇缩醛树脂和乙烯基化合物的嵌段共聚物，或聚乙烯醇缩醛树脂接枝乙烯基化合物而成的接枝共聚物。所述共聚物优选为接枝共聚物。
[0096]
所述共聚物，例如，可通过以下的(1)～(3)的方法来合成。(1)使用共聚有乙烯基化合物的聚乙烯醇来合成聚乙烯醇缩醛树脂的方法。(2)使用聚乙烯醇、和共聚有乙烯基化合物的聚乙烯醇来合成聚乙烯醇缩醛树脂的方法。(3)使接枝共聚前的聚乙烯醇缩醛树脂与乙烯基化合物接枝共聚的方法。
[0097]
作为所述乙烯基化合物，可举出：乙烯、烯丙胺、乙烯基吡咯烷酮、马来酸酐、马来酰亚胺、衣康酸、(甲基)丙烯酸、乙烯胺、(甲基)丙烯酸酯等。所述乙烯基化合物可以仅使用一种，或组合使用2种以上。需要说明的是，作为所述(甲基)丙烯酸酯，例如，可举出上述(甲基)丙烯酸酯。
[0098]
所述接枝共聚物包括：具有“包含聚乙烯醇缩醛的单元”和“包含乙烯基化合物的单元”的接枝共聚物(以下，也简称为“接枝共聚物”)。
[0099]
本发明中，“包含聚乙烯醇缩醛的单元”和“包含乙烯基化合物的单元”是指，接枝共聚物中存在的包含“聚乙烯醇缩醛”、“乙烯基化合物”的单元。
[0100]
此外，具有包含聚乙烯醇缩醛的单元和包含乙烯基化合物的单元的接枝共聚物是指，在构成主链的“包含聚乙烯醇缩醛的单元”或“包含乙烯基化合物的单元”上，键合有构成不同于该主链的侧链的“包含聚乙烯醇缩醛的单元”或“包含乙烯基化合物的单元”的支链状的共聚物。
[0101]
作为所述接枝共聚物的分子量，没有特别制限，数均分子量(mn)优选为10000～600000，重均分子量(mw)优选为20000～1200000，它们的比(mw/mn)优选为2.0～40。mn、mw、mw/mn处于这样的范围内时，所述细胞支架材料的强度得到适宜保持。
[0102]
所述接枝共聚物中的缩醛化度，例如可通过使所述接枝共聚物的在二甲苯中的可溶性成分溶解在氘代二甲基亚砜中，并利用1h
‑
nmr进行测定。
[0103]
从进一步有效发挥本发明的效果的观点出发，所述聚乙烯醇缩醛树脂优选具有布朗斯特碱性基团或布朗斯特酸性基团，更优选具有布朗斯特碱性基团。即，优选聚乙烯醇缩醛树脂的一部分通过布朗斯特碱性基团或布朗斯特酸性基团进行了改性，更优选聚乙烯醇缩醛树脂的一部分通过布朗斯特碱性基团进行了改性。该情况下，在不含饲养细胞、粘接蛋白的无血清培养基培养中，提高细胞接种后的初始固定率，易于进行细胞的培养。
[0104]
需要说明的是，本说明书中，有时将聚乙烯醇缩醛树脂的一部分具有布朗斯特碱性基团或布朗斯特酸性基团的聚乙烯醇缩醛树脂称为改性聚乙烯醇缩醛树脂。
[0105]
所述布朗斯特碱性基团是可从其他物质接受氢离子h

的官能团的总称。作为所述布朗斯特碱性基团，例如，可举出：具有胺结构的取代基、具有亚胺结构的取代基、具有酰胺结构的取代基、具有酰亚胺结构的取代基等的胺类碱性基团。
[0106]
所述聚乙烯醇缩醛树脂优选具有：选自具有胺结构的结构单元、具有亚胺结构的结构单元、具有酰胺结构的结构单元和具有酰亚胺结构的结构单元中的至少一种结构单元。所述聚乙烯醇缩醛树脂更优选具有：选自具有胺结构的结构单元、具有亚胺结构的结构
单元和具有酰胺结构的结构单元中的至少一种结构单元。
[0107]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有胺结构的结构单元、所述具有亚胺结构的结构单元、所述具有酰胺结构的结构单元和所述具有酰亚胺结构的结构单元的总含量，优选为0.1摩尔％以上，更优选为1摩尔％以上，优选为30摩尔％以下，更优选为10摩尔％以下。所述总含量为所述下限以上和所述上限以下时，能够进一步提高刚接种后的细胞粘接性。
[0108]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有胺结构的结构单元、所述具有亚胺结构的结构单元和所述具有酰胺结构的结构单元的总含量，优选为0.1摩尔％以上，更优选为1摩尔％以上，优选为30摩尔％以下，更优选为10摩尔％以下。所述总含量为所述下限以上和所述上限以下时，能够进一步提高刚接种后的细胞粘接性。
[0109]
本发明中，所述亚胺结构是指具有c＝n键的结构。所述聚乙烯醇缩醛树脂优选在侧链具有亚胺结构。此外，所述亚胺结构可以与构成聚乙烯醇缩醛树脂的主链的碳原子直接键合，或通过亚烷基等的连接基团与主链键合。需要说明的是，在侧链具有所述亚胺结构包括，在聚乙烯醇缩醛树脂的接枝链具有所述亚胺结构。作为所述具有亚胺结构的结构单元，例如，可举出下述式(11)或下述式(12)表示的结构单元。
[0110]
[化学式1]
[0111][0112]
所述式(11)中，r1表示具有亚胺结构的基团。
[0113]
[化学式2]
[0114][0115]
所述式(12)中，r1表示具有亚胺结构的基团，r2表示亚烷基。所述亚烷基的碳原子数优选为1以上，优选为12以下，更优选为5以下。所述亚烷基的碳原子数为所述下限以上和所述上限以下时，能够提高细胞培养用支架材料的强度。
[0116]
作为所述亚烷基，可举出：亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基、五亚甲基、六亚甲基、八亚甲基、十亚甲基等的直链状亚烷基、甲基亚甲基、甲基亚乙基、1
‑
甲基亚戊基、1,4
‑
二甲基亚丁基等的支链状亚烷基、亚环丙基、亚环丁基、亚环己基等的环状亚烷基等。所述亚烷基优选为亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基等的直链状烷基，更优选为亚甲基或亚乙基。
[0117]
作为所述式(11)中的r1和所述式(12)中的r1，可举出下述式(13)表示的基团。
[0118]
[化学式3]
[0119][0120]
所述式(13)中，r3表示氢原子或碳原子数1～18的烃基，r4表示碳原子数1～18的烃基。
[0121]
作为所述烃基，可举出饱和烃基、不饱和烃基和芳香族类烃基等。需要说明的是，所述烃基可使用饱和烃基、不饱和烃基、芳香族类烃基中的任一种，也可以使用这些的2种以上。
[0122]
作为所述饱和烃基，可举出：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、2
‑
乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十八烷基等。所述饱和烃基优选为甲基、乙基、正丙基或正丁基。
[0123]
作为所述芳香族类烃基，可举出：苯基、甲苯基、二甲苯基、叔丁基苯基和苄基等。
[0124]
优选所述具有亚胺结构的结构单元具有所述式(11)表示的结构，并且所述式(13)中r3为氢原子、甲基或乙基，r4为甲基、乙基或丙基的结构单元。
[0125]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有亚胺结构的结构单元的含量优选为0.1摩尔％以上，更优选为1.0摩尔％以上，优选为20.0摩尔％以下，更优选为15.0摩尔％以下。所述含量为所述下限以上时，能够改善随时间推移的粘度稳定性。所述含量为所述上限以下时，能够充分进行缩醛化。
[0126]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，具有亚胺结构的结构单元的含量相对于所述缩醛化度的比(具有亚胺结构的结构单元的含量/缩醛化度)，优选为0.001以上，优选为0.5以下。所述比(具有亚胺结构的结构单元的含量/缩醛化度)为所述下限以上和所述上限以下时，能够兼具较高的强度和优异的粘接性，提高粘接后的耐久性。
[0127]
所述聚乙烯醇缩醛树脂优选包含具有亚氨基(＝nh)的结构单元(具有亚氨基结构的结构单元)。
[0128]
所述聚乙烯醇缩醛树脂优选在侧链具有所述亚氨基。此外，所述亚氨基可以与构成聚乙烯醇缩醛树脂的主链的碳原子直接键合，或介由亚烷基等的连接基团而与主链键合。
[0129]
所述聚乙烯醇缩醛树脂优选包含具有胺结构的结构单元或具有酰胺结构的结构单元。
[0130]
所述聚乙烯醇缩醛树脂优选在侧链具有所述胺结构或酰胺结构。此外，所述胺结构或酰胺结构可以与构成聚乙烯醇缩醛树脂的主链的碳原子直接键合，或介由亚烷基等的连接基团而与主链键合。此外，所述胺结构中的胺基可以为伯胺基、仲胺基、叔胺基或季胺基。尤其是，从提高细胞的固定性的观点出发，优选为伯胺基。
[0131]
需要说明的是，在侧链具有所述胺结构或酰胺结构包括，在聚乙烯醇缩醛树脂的接枝链中具有所述胺结构或酰胺结构。
[0132]
特别是，所述胺结构优选为
‑
nh2。需要说明的是，本发明中，酰胺结构是指具有
‑
c(＝o)
‑
nh
‑
的结构。尤其是，所述具有胺结构的结构单元，优选为下述式(21)表示的结构。此
外，所述具有酰胺结构的结构单元，优选为下述式(31)表示的结构。
[0133]
[化学式4]
[0134][0135]
[化学式5]
[0136][0137]
所述式(31)中，r1表示氢原子或碳原子数1～10的烃基。作为所述烃基，可举出烷基、烯基、环烷基和环烯基等。
[0138]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有胺结构或酰胺结构的结构单元的含量，优选为0.1摩尔％以上，更优选为0.5摩尔％以上，优选为20摩尔％以下，更优选为10摩尔％以下。所述含量为所述下限以上时，能够提高加成特性。所述含量为所述上限以下时，能够使得溶解性不会过高，易于通过沉淀法取出改性聚乙烯醇缩醛树脂粉末。
[0139]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，所述具有胺结构或酰胺结构的结构单元和具有亚胺结构的结构单元的总含量，优选为0.1摩尔％以上，更优选为0.5摩尔％以上，优选为20摩尔％以下，更优选为10摩尔％以下。
[0140]
所述聚乙烯醇缩醛树脂中，具有亚胺结构的结构单元的含量相对于具有胺结构或酰胺结构的结构单元的含量的比(具有亚胺结构的结构单元/具有胺结构或酰胺结构的结构单元)优选为0.5/99.5～99.5/0.5。所述比为0.5/99.5以上时，能够使得随时间推移的粘度稳定性充分，所述比为99.5/0.5以下时，从提高细胞的固定性的观点出发，能够充分发挥交联性能。所述比(具有亚胺结构的结构单元/具有胺结构或酰胺结构的结构单元)更优选为5/95以上，并且更优选为90/10以下。
[0141]
需要说明的是，所述具有亚胺结构的结构单元的含量、所述具有酰亚胺结构的结构单元的含量、所述具有胺结构的结构单元的含量、具有酰胺结构的结构单元的含量，可通过1h
‑
nmr(核磁共振谱)进行测定。
[0142]
所述布朗斯特酸性基团是能够向其他物质给予氢离子h

的官能团的总称。
[0143]
作为布朗斯特酸性基团，可举出：羧基、磺酸基、马来酸基、亚磺酸基、次磺酸基、磷酸基、膦酸基和这些的盐等。布朗斯特酸性基团优选为羧基。
[0144]
作为通过所述布朗斯特酸性基团对所述聚乙烯醇缩醛树脂进行改性的方法，没有特别限定，可举出使所述聚乙烯醇与所述衣康酸或(甲基)丙烯酸进行共聚的方法和在所述聚乙烯醇的侧链导入布朗斯特酸性基团的方法等。
[0145]
作为制备所述聚乙烯醇缩醛树脂的方法，例如可举出如下方法：将通过使具有所述亚胺结构的单体与乙酸乙烯酯进行共聚所得到的聚乙酸乙烯酯进行皂化所得到的聚乙
烯醇，利用以往公知的方法进行缩醛化。此外，也可以使用通过利用以往公知的方法，将含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇进行缩醛化而导入亚胺结构的方法。也可以使用如下方法：将含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇进行后改性所得到的具有亚胺结构的改性聚乙烯醇，利用以往公知的方法进行缩醛化。此外，也可通过对未改性的聚乙烯醇缩醛树脂进行后改性而导入亚胺结构。即，所述改性聚乙烯醇缩醛树脂可以是含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇的缩醛化物。在这些中，优选下述方法：通过将含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇进行缩醛化，而得到具有亚胺结构的改性聚乙烯醇缩醛树脂。特别是，在使用该方法的情况下，可通过过量添加缩醛化中使用的醛、酸催化剂的量而得到亚胺结构。
[0146]
在所述过量添加醛的方法中，相对于含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇100重量份，优选添加70～150重量份的醛。作为醛，特别优选乙醛、丙醛、正丁醛、异丁醛、正戊醛、苯甲醛。
[0147]
在所述过量添加酸催化剂的方法中，优选添加整体的0.5重量％以上的酸催化剂。此外，相对于含有具有氨基或酰胺结构的结构单元的聚乙烯醇100重量份，优选添加5.0～70.0重量份的酸催化剂。作为酸催化剂，特别优选为盐酸、硝酸、硫酸、对甲苯磺酸。需要说明的是，在使用这样的方法的情况下，作为确认具有氨基、酰胺结构的结构单元、具有亚胺结构的结构单元的方法，例如，可举出通过1h
‑
nmr进行确认的方法等。
[0148]
所述缩醛化可以使用公知的方法，优选在水溶剂中、水与具有与水的相溶性的有机溶剂形成的混合溶剂中、或有机溶剂中进行。作为所述具有与水的相溶性的有机溶剂，例如可以使用醇类有机溶剂。作为所述有机溶剂，例如可举出：醇类有机溶剂、芳香族有机溶剂、脂肪族酯类溶剂、酮类溶剂、低级石蜡类溶剂、醚类溶剂、酰胺类溶剂、胺类溶剂等。
[0149]
作为所述醇类有机溶剂，例如可举出：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇等。
[0150]
作为所述芳香族有机溶剂，例如可举出：二甲苯、甲苯、乙苯、苯甲酸甲酯等。
[0151]
作为所述脂肪族酯类溶剂，例如可举出：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯、乙酰乙酸甲酯、乙酰乙酸乙酯等。
[0152]
作为所述酮类溶剂，例如可举出：丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、环己酮、甲基环己酮、二苯甲酮、苯乙酮等。
[0153]
作为所述低级石蜡类溶剂，可举出：己烷、戊烷、辛烷、环己烷、癸烷等。
[0154]
作为所述醚类溶剂，可举出：二乙醚、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、丙二醇二乙醚等。
[0155]
作为所述酰胺类溶剂，可举出：n,n
‑
二甲基甲酰胺、n,n
‑
二甲基乙酰胺、n
‑
甲基吡咯烷酮、乙酰苯胺等。
[0156]
作为所述胺类溶剂，可举出：氨、三甲胺、三乙胺、正丁胺、二正丁胺、三正丁胺、苯胺、n
‑
甲基苯胺、n,n
‑
二甲基苯胺、吡啶等。
[0157]
这些可以单独使用，也可以将2种以上的溶剂混合使用。在这些中，就对树脂的溶解性及纯化时的简易性的观点而言，特别优选为乙醇、正丙醇、异丙醇、四氢呋喃。
[0158]
所述缩醛化优选在酸催化剂的存在下进行。所述酸催化剂并无特别限定，可举出：硫酸、盐酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、丙酸等羧酸；或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲
苯磺酸等磺酸。这些酸催化剂可以单独使用，也可以组合使用2种以上的化合物。其中，优选为盐酸、硝酸、硫酸，特别优选为盐酸。
[0159]
(细胞培养用支架材料的其他详细内容)
[0160]
本发明的细胞培养用支架材料用于培养细胞。本发明的细胞培养用支架材料用作培养细胞时该细胞的支架。本发明的细胞培养用支架材料的情况下，特别优选接种细胞团。但是，本发明的细胞培养用支架材料的情况下，也可以不接种细胞团。
[0161]
作为所述细胞，可举出：人、小鼠、大鼠、猪、牛和猴等的动物细胞。此外，作为所述细胞，可举出体细胞、干细胞、祖细胞和分化细胞(differenti ated cells)等。所述体细胞可以为癌细胞。
[0162]
作为所述分化细胞，可举出神经细胞、心肌细胞、视网膜细胞和肝细胞等。
[0163]
作为所述干细胞，可举出多能性干细胞、组织干细胞和组织祖细胞等。
[0164]
所述组织干细胞和所述组织祖细胞具有自我复制能力，是指属于外胚层类组织、内胚层类组织、中胚层类组织和生殖类组织中的任一者，并且表现出针对其所属的内脏器官的构成细胞种类的特定分化能力的细胞。
[0165]
作为组织干细胞及组织祖细胞，例如可举出：神经干细胞、神经嵴干细胞、视网膜干细胞、角膜干细胞、角质形成细胞表皮干细胞、黑素细胞干细胞、乳腺干细胞、肝干细胞、肠干细胞、气管干细胞、造血干细胞、间充质干细胞、心脏干细胞、血管内皮祖细胞、血管外皮细胞、骨骼肌干细胞、脂肪干细胞、肾祖细胞、精子干细胞等。
[0166]
所述细胞优选为体细胞、干细胞、祖细胞或分化细胞。所述体细胞优选为癌细胞、神经细胞、心肌细胞、视网膜细胞或肝细胞。
[0167]
[细胞的培养方法]
[0168]
可以使用本发明的细胞培养用支架材料，来培养各种细胞。作为该细胞，可举出所述细胞。本发明的细胞培养用支架材料，不易因培养基的水分而发生溶胀，能够保持适宜的亲水性和强度，因此能够提高细胞接种后的固定率。
[0169]
所述细胞的培养方法中，优选具备：在所述细胞培养用支架材料上接种细胞团的工序。所述细胞团可通过在发生融合的培养容器中添加细胞剥离剂，并通过移液而均匀地进行破碎处理。作为细胞剥离剂，没有特别限定，优选为乙二胺/磷酸缓冲溶液。细胞团的尺寸优选为50μm～200μm。
[0170]
细胞培养用支架材料，在细胞的培养中，除了用于平面培养(二维培养方法)中之外，还可以用于接近生体内的状态，例如多孔质膜、水凝胶等基材上进行的细胞培养(三维培养方法)中。这是因为，通过将细胞培养用支架材料用于生物反应器等中，而能够效率良好地进行细胞增殖。
[0171]
细胞培养用支架材料，由于具备适宜的亲水性和强度，因此优选用于二维培养方法中。
[0172]
作为平面培养(二维培养方法)用容器，形状、尺寸没有特别限定，可举出具备一个或多个孔(穴)的细胞培养用试验板、细胞培养用烧瓶等。所述微板的孔数没有限定，例如，可举出2、4、6、12、24、48、96、384等。
[0173]
所述孔的形状没有特别限定，可举出：正圆、椭圆、三角形、正方形、长方形、五边形等。所述孔底面的形状没有特别限定，可举出平底、圆底、凹凸等。
[0174]
具备1个或多个孔的细胞培养用测试板、细胞培养用烧瓶的材质并无特别限定，可举出高分子树脂或金属、无机材料。作为所述高分子树脂，可举出：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、聚酯、聚异戊二烯、环烯烃聚合物、聚酰亚胺、聚酰胺、聚酰胺酰亚胺、(甲基)丙烯酸树脂、环氧树脂、聚硅氧烷等。作为金属，可举出：不锈钢、铜、铁、镍、铝、钛、金、银、铂等。作为无机材料，可举出：氧化硅(玻璃)、氧化铝、氧化钛、氧化锆、氧化铁、氮化硅等。
[0175]
除上述以外，细胞培养用支架材料也可用于使细胞在培养基中自由悬浮而生长的悬浮培养方法。
[0176]
[其它的实施方式]
[0177]
本发明，除了上述的细胞培养用支架材料之外，还提供使用了细胞培养用支架材料的发明作为其它的实施方式。
[0178]
例如，本发明中，提供含有所述细胞培养用支架材料和多糖类的细胞培养用载体(介质)。作为多糖类，特别是可以没有制限地使用各种多糖类。尤其是优选为水溶性多糖类。
[0179]
此外，本发明中，提供一种细胞培养用容器，其在细胞的培养区域的至少一部分具备所述细胞培养用支架材料。所述细胞培养用容器中，所述细胞培养用支架材料优选为膜状，优选为树脂膜。所述细胞培养用容器中，具备：容器主体和配置在容器主体的表面上的所述细胞培养用支架材料(树脂膜)。作为容器，在细胞的培养区域的至少一部分具备树脂膜时，没有特别限定，可使用各种容器。作为容器，可使用平面培养用容器、生物反应器等。
[0180]
此外，本发明中，提供包含所述细胞培养用支架材料的细胞培养用纤维。该情况下，细胞培养用支架材料优选涂布在纤维上。此外，也可以为将细胞培养用支架材料浸渍或混入纤维中的方案。细胞培养用纤维，在烧瓶等平面结构中难以粘接，但是在纤维(fibril)状结构等的立体结构中易于粘接而适用于细胞的三维培养方法。
[0181]
所述细胞培养用支架材料可以发生交联。这是因为，通过交联而抑制水溶胀性，能够适宜提高强度。通过使用交联剂，而能够得到发生了交联的细胞培养用支架材料。
[0182]
作为交联剂，没有特别限定，可举出：聚醇、聚羧酸、羟基羧酸、金属皂、多糖类等。
[0183]
作为多元醇，并无特别限定，可举出：乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、庚二醇、辛二醇、壬二醇、癸二醇、十二烷二醇、十一烷二醇、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、聚乙二醇、邻苯二酚、邻苯三酚、二硼酸、亚甲基二硼酸、亚乙基二硼酸、亚丙基二硼酸、亚苯基二硼酸、联苯二硼酸、双酚衍生物等。
[0184]
作为多羧酸，并无特别限定，可举出：草酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、邻苯二甲酸、聚(甲基)丙烯酸等。
[0185]
作为羟基羧酸，并无特别限定，可举出：乙醇酸、乳酸、羟基丙二酸、甘油酸、羟基丁酸、苹果酸、酒石酸、柠苹酸、柠檬酸、异柠檬酸、白氨酸、甲羟戊酸、泛解酸、蓖麻酸、反蓖麻酸、脑羟脂酸、奎尼酸、莽草酸、羟基苯甲酸、水杨酸、杂酚酸、香草酸、丁香酸、焦儿茶酸、二羟基苯甲酸、原儿茶酸、龙胆酸、苔色酸、没食子酸、苦杏仁酸、二苯乙醇酸、阿卓乳酸、草木樨酸、根皮酸、香豆酸、伞形酸、咖啡酸、阿魏酸、芥子酸、羟基硬脂酸等。
[0186]
作为金属皂，并无特别限定，可举出硬脂酸、月桂酸、蓖麻酸、辛酸等脂肪酸与锂、钠、镁、钙、钡、锌、铝等金属形成的盐。
[0187]
作为多糖类，并无特别限定，可举出：果胶、瓜尔胶、三仙胶、罗望子胶、角叉菜胶、
丙二醇、羧甲基纤维素、直链淀粉、支链淀粉、糖原、纤维素、甲壳素、琼脂糖、角叉菜胶、肝素、玻尿酸、木葡聚糖、葡甘露聚糖酸等。
实施例
[0188]
以下，举出实施例及比较例来说明本发明，但本发明并不限于以下的实施例。需要说明的是，得到的合成树脂、改性聚乙烯醇缩醛树脂中的结构单元，通过将该树脂溶解于dmso
‑
d6(二甲亚砜)并通过1h
‑
nmr(核磁共振谱)进行测定。需要说明的是，所述结构单元，例如为：具有胺结构的结构单元的含量(摩尔％)、具有亚胺结构的结构单元的含量(摩尔％)、具有酰胺结构的结构单元的含量(摩尔％)、缩醛化度(摩尔％)、乙酰基量(摩尔％)、羟基量(摩尔％)、(甲基)丙烯酸酯基量(摩尔％)。
[0189]
[实施例1]
[0190]
(聚乙烯醇缩丁醛树脂的制备)
[0191]
在具备搅拌装置的反应机中投入离子交换水2700ml和平均聚合度250、皂化度99摩尔％的聚乙烯醇300g，一面进行搅拌一面进行加热溶解，得到溶液。接着，以使得盐酸浓度成为0.2重量％的方式在该溶液中添加作为催化剂的35重量％盐酸，将温度调整为15℃后，一面进行搅拌一面添加正丁醛(n
‑
ba)22g。其后，添加正丁醛(n
‑
ba)148g，结果白色粒子状的聚乙烯醇缩丁醛树脂析出。在析出后15分钟后，以使得盐酸浓度成为1.8重量％的方式添加35重量％盐酸，加热至50℃，在50℃下熟化2小时。继而，将溶液冷却，进行中和后，将聚乙烯醇缩丁醛树脂进行水洗，使其干燥，由此得到聚乙烯醇缩丁醛树脂。
[0192]
得到的聚乙烯醇缩丁醛树脂具有：平均聚合度250、羟基量28摩尔％、乙酰基量1摩尔％、缩醛化度71摩尔％。
[0193]
(细胞培养用容器的制备)
[0194]
通过使所得到的聚乙烯醇缩丁醛树脂1g溶解于丁醇19g中，而得到聚乙烯醇缩丁醛树脂溶液。将所得到的聚乙烯醇缩丁醛树脂溶液150μl喷出至φ22m m的盖玻璃(松浪公司制造，通过空气除尘器将22丸no.1除尘而使用)上，使用旋转涂布机以2000rpm旋转20秒而得到平滑的树脂膜。将所得到的所述树脂膜连同盖玻璃一并配置于φ22mm的聚苯乙烯培养皿中，由此得到细胞培养用容器。
[0195]
(表面自由能)
[0196]
使用接触角计(协和界面化学公司制，dmo
‑
701)测定所述树脂膜的表面自由能。在所述树脂膜上滴加纯水1μl，拍摄30秒后的液滴图像而得到纯水的接触角。此外，在所述树脂膜上滴加二碘甲烷1μl，拍摄30秒后的液滴图像而得到二碘甲烷的接触角。根据得到的接触角，使用kaelble
‑
uy的理论式来计算表面自由能的色散成分γ
d
和偶极成分γ
p
。
[0197]
使用得到的细胞培养用容器，在以下的条件下进行试验。
[0198]
(细胞培养试验的方法)
[0199]
将1ml磷酸盐缓冲生理盐水添加到得到的细胞培养用容器中，在37℃的培养箱中静置1小时。除去培养皿中的磷酸盐缓冲生理盐水后，将来自嵌合小鼠的新鲜人肝细胞(phoenix bio公司制造的pxb细胞)接种3
×
104cells。接着，添加1ml的培养基rm
‑
101(东洋合成公司制)，在37℃、co2浓度5％的培养箱中进行培养。
[0200]
(评价)
[0201]
(1)初始粘接性(接种后的固定性)
[0202]
细胞培养试验中，从细胞的接种起24小时后，使用胰朊酶剥离细胞。使用自动细胞计数器(nanoentech公司制造的自动细胞计数器eve)测定细胞数。
[0203]
<初始粘接性的评价基准>
[0204]
○○○
：细胞数为2.5
×
104cells以上
[0205]
○○
：细胞数为1.5
×
104cells以上并且不足2.5
×
104cells
[0206]
○
：细胞数为1.0
×
104cells以上并且不足1.5
×
104cells
[0207]
×
：细胞数不足1.0
×
104cells
[0208]
(2)细胞增殖性
[0209]
细胞培养试验中，从细胞的接种起3日后，使用胰朊酶剥离细胞。使用自动细胞计数器(nanoentech公司制造的自动细胞计数器eve)测定细胞数。
[0210]
<细胞增殖性的评价基准>
[0211]
○○○
：细胞数为2.0
×
105cells以上
[0212]
○○
：细胞数为1.0
×
105cells以上并且不足2.0
×
105cells
[0213]
○
：细胞数为5.0
×
104cells以上并且不足1.0
×
105cells
[0214]
×
：细胞数不足5.0
×
104cells
[0215]
[实施例2]
[0216]
使用了平均聚合度850、皂化度99摩尔％的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0217]
[实施例3]
[0218]
使用了平均聚合度1700、皂化度99摩尔％的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0219]
[实施例4]
[0220]
使用了平均聚合度2400、皂化度99摩尔％的聚乙烯醇，并且使用了乙醛代替正丁醛(n
‑
ba)，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0221]
[实施例5]
[0222]
使用了平均聚合度850、皂化度98摩尔％、乙烯改性度4摩尔％的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0223]
[实施例6]
[0224]
使用了平均聚合度250、皂化度99摩尔％，以2摩尔％的含量含有所述式(21)表示的具有氨基的结构单元的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0225]
[实施例7]
[0226]
使用了平均聚合度1600、皂化度99摩尔％，以2摩尔％的含量含有所述式(21)表示的具有氨基的结构单元的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0227]
[实施例8]
[0228]
使实施例1中得到的聚合度约250的聚乙烯醇缩醛100重量份及n
‑
乙烯吡咯烷酮1重量份溶解于500重量份的四氢呋喃中，而得到接枝共聚物树脂溶液。使irgacure 184(basf公司制造)0.05重量份溶解于所得到的树脂溶液中，涂布于pet膜上。针对涂布物，在25℃使用eye graphics公司制造的uv输送带装置“ecs301g1”，以累计光量2000mj/cm2照射
365nm的波长的光，由此得到复合树脂溶液。使所得到的复合树脂溶液在80℃下真空干燥3小时，由此得到复合树脂。针对所得到的复合树脂，使用waters公司制造的“2690separat ions model”作为柱，利用gpc法测定以聚苯乙烯计的重均分子量，结果为约4万。将所得到的复合树脂调整为3重量％丁醇溶液，以与实施例1相同的方式进行试验。
[0229]
[实施例9]
[0230]
相对于聚乙烯醇缩醛100重量份，添加n
‑
乙烯吡咯烷酮10重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约6万。
[0231]
[实施例10]
[0232]
相对于聚乙烯醇缩醛100重量份，添加n
‑
乙烯吡咯烷酮30重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约5万。
[0233]
[实施例11]
[0234]
相对于聚乙烯醇缩醛100重量份，添加丙烯酸四氢糠酯5重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约6万。
[0235]
[实施例12]
[0236]
相对于聚乙烯醇缩醛100重量份，添加丙烯酸甲氧基乙酯5重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约7万。
[0237]
[实施例13]
[0238]
相对于聚乙烯醇缩醛100重量份，添加甲基丙烯酸丁酯5重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约6万。
[0239]
[实施例14]
[0240]
使n
‑
异丙基丙烯酰胺75重量份和甲基丙烯酸丁酯25重量份溶解于四氢呋喃300重量份中，而得到丙烯酸单体溶液。使irgacure 184(basf公司制造)2重量份溶解于所得到的丙烯酸单体溶液中，涂布于pet膜上。针对涂布物，在25℃下使用eye graphics公司制造的uv输送带装置“ecs301g1”，以累计光量2000mj/cm2照射365nm的波长的光，由此得到丙烯酸树脂溶液。使所得到的丙烯酸树脂溶液在80℃真空干燥3小时，由此得到丙烯酸树脂。将所得到的丙烯酸树脂调整为3重量％丁醇溶液，以与实施例1相同的方式进行试验。所得到的丙烯酸类树脂的重均分子量为约10万。
[0241]
[实施例15]
[0242]
使用了丙烯酸甲氧基乙酯90重量份和甲基丙烯酸丁酯10重量份，代替n
‑
异丙基丙烯酰胺75重量份和甲基丙烯酸丁酯25重量份，除此之外，以与实施例14同样的方式得到丙烯酸类树脂。将得到的丙烯酸类树脂调整为3重量％丁醇溶液，以与实施例1同样的方式进行试验。得到的丙烯酸类树脂的重均分子量为约8万。
[0243]
[实施例16]
[0244]
使用了丙烯酸甲氧基乙酯75重量份和甲基丙烯酸丁酯25重量份，代替n
‑
异丙基丙烯酰胺75重量份和甲基丙烯酸丁酯25重量份，除此之外，以与实施例14同样的方式得到丙烯酸类树脂。将得到的丙烯酸类树脂调整为3重量％丁醇溶液，以与实施例1同样的方式进行试验。得到的树脂的重均分子量为约9万。
[0245]
[实施例17]
[0246]
使用了甲基丙烯酸丁酯2重量份和丙烯酸乙酯98重量份，代替n
‑
异丙基丙烯酰胺
75重量份和甲基丙烯酸丁酯25重量份，除此之外，以与实施例14同样的方式得到丙烯酸类树脂。将得到的丙烯酸类树脂调整为3重量％丁醇溶液，以与实施例1同样的方式进行试验。得到的丙烯酸类树脂的重均分子量为约8万。
[0247]
[比较例1]
[0248]
不使用支架材料，仅使用聚苯乙烯皿，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0249]
[比较例2]
[0250]
将第二次的正丁醛(n
‑
ba)的添加量从148g变更为89g，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0251]
[比较例3]
[0252]
作为合成树脂而使用了平均聚合度1000、皂化度98摩尔％的聚乙烯醇，除此之外，以与实施例1同样的方式进行试验。
[0253]
[比较例4]
[0254]
将n
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异丙基丙烯酰胺100重量份、乙酸乙酯75重量份、偶氮二异丁腈0.5重量份加以混合，在氮气环境下，在65℃进行8小时聚合，由此得到聚丙烯酰胺树脂。针对所得到的树脂，使用waters公司制造的“2690separations mod el”作为柱，利用gpc法测定以聚苯乙烯计的重均分子量，结果为约9万(聚合度约800)。其他操作以与实施例1相同的方式进行试验。
[0255]
[比较例5]
[0256]
使用丙烯酸乙酯100重量份代替n
‑
异丙基丙烯酰胺100重量份，除此以外，以与比较例4相同的方式进行试验。
[0257]
[比较例6]
[0258]
使用甲基丙烯酸丁酯100重量份代替n
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异丙基丙烯酰胺100重量份，除此以外，以与比较例4相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约9万。
[0259]
[比较例7]
[0260]
相对于聚乙烯醇缩醛30重量份，添加n
‑
乙烯吡咯烷酮70重量份，除此以外，以与实施例8相同的方式进行试验。所得到的树脂的重均分子量为约9万。
[0261]
将所得到的结果汇总示于表1～4。
[0262]
[0263]
[0264]
[0265]