一种抗宫炎软胶囊的检测方法与流程

1.本发明涉及抗宫炎软胶囊技术领域，特别是一种抗宫炎软胶囊的检测方法。


背景技术：

2.抗宫炎软胶囊是由抗宫炎片改剂型而来的中药九类新药，由广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏和乌药干浸膏组成，其中广东紫珠具有收敛止血、散瘀、清热解毒的功效；益母草具有活血调经、利尿消肿、清热解毒的功效；乌药具有行气止痛、温肾散寒的功效。抗宫炎系列制剂药效显著，具有清热、祛湿、化瘀、止带的作用，主要用于湿热下注所致的带下病，症见赤白带下、量多臭味、宫颈糜烂。
3.目前，抗宫炎软胶囊的质量控制是按照国家食品药品监督管理局颁布的国家药品标准实行，以益母草中的盐酸水苏碱的含量测定作为质控指标，而收载于2020版中国药典的抗宫炎系列制剂(片剂、颗粒剂、胶囊)项下含量测定均为其君药广东紫珠中的金石蚕苷和连翘酯苷b。由于中药的多成分、多靶点的整体作用，决定了任何一个单一成分作为指标都不能体现中药的整体质量。
4.中药指纹图谱是一种能全面反应中药或中药制剂整体性化学特征的质量分析方法，被广泛用于中药及中药制剂的质量控制中。目前仅对抗宫炎系列制剂(片剂、颗粒剂、胶囊)做过hplc指纹图谱研究外，对抗宫炎软胶囊的指纹图谱和检测方法还未见报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于，提供一种抗宫炎软胶囊的含量检测方法。本发明提出的方法在绘制标准曲线时，去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6种成分在相应质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；同时，本发明提出的方法具有精密度良好、重复性良好、稳定性良好、加样回收率高和相对标准偏差的优点，能够保证对6种抗宫炎软胶囊内容物测定的准确性的优点；并且本发明中抗宫炎软胶囊uplc指纹图谱也具有快速、简便、稳定、精密度高、稳定性好、重复性好等优点。
6.本发明的技术方案：一种抗宫炎软胶囊的检测方法，该方法包括如下步骤：
7.(1)混合对照品溶液的制备：称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷，置于容量瓶中，加甲醇溶解，稀释，摇匀，制得混合对照品母液，再用40
‑
60％甲醇稀释，配制成浓度分别为16.0
‑
52.0μg/ml的去甲异波尔定；5.0
‑
175.0μg/ml的盐酸益母草碱；4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b；4.0
‑
146.0μg/ml的毛蕊花糖苷；5.0
‑
168.0μg/ml的金石蚕苷；5.0
‑
175.0μg/ml的异毛蕊花糖苷系列浓度梯度的对照品混合溶液；
8.(2)将步骤(1)配制的系列浓度梯度的对照品混合溶液，按照抗宫炎软胶囊检测方法的色谱条件进样，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线；所述色谱条件为色谱柱：capcell pak c18色谱柱，2.1mm
×
100mm，2μm；流动相：乙腈为a相，0.5％磷酸水溶液为b相，梯度洗脱，流速为0.2ml
.
min
‑1；柱温为35℃；进样量为2μ
l；检测波长：0
‑
10min：280nm；10
‑
35min：332nm；
9.(3)供试品溶液的制备：取抗宫炎软胶囊内容物，称定，置于容器中，加入甲醇，称定重量，回流0.8
‑
1.2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
10.(4)将供试品溶液按照步骤(2)提供的色谱条件进样，分别测定去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6个成分的峰面积，根据标准曲线计算，即得。
11.前述的抗宫炎软胶囊的检测方法中，所述步骤(1)是混合对照品溶液的制备：精密称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷，置于容量瓶中，加甲醇溶解，稀释，摇匀，制得混合对照品母液，再用40
‑
60％甲醇稀释，配制成浓度分别为16.0
‑
52.0μg/ml的去甲异波尔定；5.0
‑
175.0μg/ml的盐酸益母草碱；4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b；4.0
‑
146.0μg/ml的毛蕊花糖苷；5.0
‑
168.0μg/ml的金石蚕苷；5.0
‑
175.0μg/ml的异毛蕊花糖苷系列浓度梯度的对照品混合溶液；所述浓度梯度以2
‑
25μg/ml为一个梯度。
12.前述的抗宫炎软胶囊的检测方法中，所述梯度洗脱的程序是0
‑
20min，12％a
→
17％a；20～35min，17％a
→
35％a；35～37min，30％a
→
90％a；37～40min，90％a
→
12％a。
13.前述的抗宫炎软胶囊的检测方法中，所述步骤(3)是取1.0g抗宫炎软胶囊内容物，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入50ml50％甲醇，称定重量，回流1h，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
14.为研究本抗宫炎软胶囊的检测方法，发明人进行了大量的试验，部分试验记录如下：
15.实验例：抗宫炎软胶囊的检测方法
16.1仪器与材料
17.1.1仪器
18.超高效液相色谱仪，万分之一电子天平，超声波清洗器，纯水仪。
19.1.2试剂与样品
20.广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏、乌药干浸膏(贵州汇正制药有限责任公司)；对照品去甲异波尔定(批号p10m9l61140,uplc峰面积法测得纯度≥98％)；盐酸益母草碱(批号r04n8f47273,uplc峰面积法测得纯度≥98％)；连翘酯苷b(批号r14n9f74963,uplc峰面积法测得纯度≥98％)；金石蚕苷(批号h29m3x1,uplc峰面积法测得纯度≥98％)；毛蕊花糖苷(批号w14o10c100217,uplc峰面积法测得纯度≥98％)；异毛蕊花糖苷(批号w17j10c90785,uplc峰面积法测得纯度≥98％)均购自上海源叶生物科技有限公司。
21.抗宫炎软胶囊(由贵州汇正制药有限公司提供，批号200101(s1)、200102(s2)、200303(s3)、200501(s4)、200502(s5)、200503(s6)、200504(s7)、200602(s8)、200603(s9)、200701(s10)、200702(s11)、200704(s12)、200705(s13)、200801(s14)、200805(s15)、200806(s16)、200902(s17)、200903(s18)、20101(s19)、201002(s20)。乙腈为色谱纯(默克)；水为屈臣氏双蒸水；其余试剂为分析纯。
22.2实验方法
23.2.1溶液的制备
24.2.1.1混合对照品溶液
25.精密称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷、异毛蕊花糖苷适量，置容量瓶中，加50％甲醇使溶解，摇匀，制成浓度分别为0.052、0.175、0.150、0.146、0.168、0.169mg
·
ml
‑1的混合对照品母液。
26.2.1.2供试品溶液
27.取约1.0g抗宫炎软胶囊内容物，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入50ml50％甲醇，称定重量，回流1h，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
28.2.1.3阴性对照溶液
29.分别制备缺广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏、乌药干浸膏的阴性样品，按“2.1.2”项下方法制备，即得阴性供试品溶液。
30.2.1.4色谱条件
31.采用capcell pak c
18
(2.1mm
×
100mm，2μm)色谱柱；流动相为乙腈(a)
‑
0.5％磷酸水溶液(b)，梯度洗脱(0
‑
20min，12％a～17％a；20～35min，17％a～35％a；35～37min，30％a～90％a；37～40min，90％a～12％a流速0.2ml
.
min
‑1；柱温35℃；进样量2μl；检测波长：0
‑
10min：280nm；10
‑
35min：332nm。
32.3多指标成分的含量测定
33.3.1线性关系考察
34.将对照品母液用50％甲醇稀释，配置成系列浓度梯度的对照品混合溶液，测定峰面积。以对照品为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，见表3，结果表明6种成分在相应质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。
35.表3
‑
抗宫炎软胶囊内容物中6种指标成分的线性关系考察
36.成分回归方程r2线性范围(μg/ml)去甲异波尔定y＝17.055x 13.5010.99991.6～52.0盐酸益母草碱y＝13.216x 13.5010.99975.0～175.0连翘酯苷by＝10.525x 11.660.99994.0～150.0毛蕊花糖苷y＝16.093x
‑
2.65220.99974.0～146.0金石蚕苷y＝12.386x 43.8470.99995.0～168.0异毛蕊花糖苷y＝11.865x 4.79250.99985.0～175.0
37.3.2精密度试验
38.取同一样品，连续进样6次，记录峰面积，计算rsd值均小3％，表明仪器精密度良好。
39.3.3重复性试验
40.取同一批样品6份，连续进样6次，记录峰面积，计算rsd值均小于3％，表明仪器重复性良好。
41.3.4稳定性试验
42.取同一样品，分别于0，2，4，6，12，24h时进样，计算rsd值均小于3％，表明仪器稳定性良好。
43.3.5加样回收率试验
44.精密称取对照品去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷、异毛蕊花糖苷适量，制备成浓度为0.156、0.0036、0.652、0.074、0.969、0.051mg
·
ml
‑1混合对照品溶液备用。精密称取0.5g抗宫炎软胶囊供试品内容物6份，置于圆底烧瓶中，加入混合对照品溶液1ml，按供试品溶液项下处理后进样分析，计算加样回收率，结果显示去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷、异毛蕊花糖苷的平均加样回收率分别为94.5％、95.35％、100.59％、103.06％、97.86％、101.14％，rsd值分别为1.94％、1.33％、2.04％、1.72％、2.72％、1.33％。
45.3.6样品测定
46.精密称取20批次抗宫炎软胶囊内容物，按“2.1.2”项下方法制得供试品溶液，进样分析，测定6个成分的峰面积，根据标准曲线计算样品中各成分含量，结果见表4。
47.表4
‑
20批抗宫炎软胶囊样品6个成分的含量
[0048][0049]
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果:
[0050]
本发明提出的方法专属性强，重现性，稳定性及精密度良好。同时测定去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6种成分且在相应质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；从源头上对产品质量进行控制，使产品质量达到稳定。且所述检测方法高效，快速，准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物的临床药效。既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
[0051]
综上所述：本发明提出的方法在绘制标准曲线时，去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6中在相应质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；同时，本发明提出的方法具有精密度良好、重复性良好、稳定性良好、加样回
收率高，能够保证对6种抗宫炎软胶囊内容物测定的准确性的优点。
附图说明
[0052]
图1是抗宫炎软胶囊uplc色谱图；
[0053]
图2是缺广东紫竹珠阴性样品uplc色谱图；
[0054]
图3是缺益母草阴性样品uplc色谱图；
[0055]
图4是缺乌药阴性样品uplc色谱图；
[0056]
图5是抗宫炎软胶囊特征指纹图谱及混合对照品的uplc图谱。
[0057]
附图5中附图标记为：1
‑
去甲异波尔定；3
‑
盐酸益母草碱；5
‑
连翘酯苷b；6
‑
毛蕊花糖苷；7
‑
金石蚕苷；9
‑
异毛蕊花糖苷。
具体实施方式
[0058]
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
[0059]
实施例。一种抗宫炎软胶囊的检测方法，检测步骤为：
[0060]
(1)混合对照品溶液的制备：精密称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷、异毛蕊花糖苷适量，置容量瓶中，加50％甲醇使溶解，摇匀，制得浓度分别为16.0
‑
52.0μg/ml的去甲异波尔定；5.0
‑
175.0μg/ml的盐酸益母草碱；4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b；4.0
‑
146.0μg/ml的毛蕊花糖苷；5.0
‑
168.0μg/ml的金石蚕苷；5.0
‑
175.0μg/ml的异毛蕊花糖苷系列浓度梯度的对照品混合溶液；所述浓度梯度以2
‑
25μg/ml为一个梯度，每一种物质配制5个以上的梯度浓度；如4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b对照品混合溶液以20μg/ml为一个梯度，需配制4μg/ml的连翘酯苷b、24μg/ml的连翘酯苷b、44μg/ml的连翘酯苷b、64μg/ml的连翘酯苷b、84μg/ml的连翘酯苷b、104μg/ml的连翘酯苷b、124μg/ml的连翘酯苷b、144μg/ml的连翘酯苷b、150μg/ml的连翘酯苷b；
[0061]
(2)将步骤(1)配制的系列浓度梯度的对照品混合溶液，按照“2.1.4”项下色谱条件进样，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线；所述色谱条件为色谱柱：capcell pak c18色谱柱(2.1mm
×
100mm，2μm)；流动相：乙腈为a相，0.5％磷酸水溶液为b相，梯度洗脱，流速为0.2ml
.
min
‑1；柱温为35℃；进样量为2μl；检测波长：0
‑
10min：280nm；10
‑
35min：332nm；所述梯度洗脱的程序是0
‑
20min，12％a
→
17％a；20～35min，17％a
→
35％a；35～37min，30％a
→
90％a；37～40min，90％a
→
12％a；
[0062]
(3)供试品溶液的制备：取1.0g抗宫炎软胶囊内容物，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入50ml50％甲醇，称定重量，回流1h，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
[0063]
(4)将供试品溶液按照步骤(2)提供的色谱条件进样，分别测定去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6个成分的峰面积，根据标准曲线计算，即得。

技术特征：
1.一种抗宫炎软胶囊的检测方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)混合对照品溶液的制备：称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷，置于容量瓶中，加甲醇溶解，稀释，摇匀，制得混合对照品母液，再用40
‑
60％甲醇稀释，配制成浓度分别为16.0
‑
52.0μg/ml的去甲异波尔定；5.0
‑
175.0μg/ml的盐酸益母草碱；4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b；4.0
‑
146.0μg/ml的毛蕊花糖苷；5.0
‑
168.0μg/ml的金石蚕苷；5.0
‑
175.0μg/ml的异毛蕊花糖苷系列浓度梯度的对照品混合溶液；(2)将步骤(1)配制的系列浓度梯度的对照品混合溶液，按照抗宫炎软胶囊检测方法的色谱条件进样，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线；所述色谱条件为色谱柱：capcell pak c18色谱柱，2.1mm
×
100mm，2μm；流动相：乙腈为a相，0.5％磷酸水溶液为b相，梯度洗脱，流速为0.2ml
·
min
‑1；柱温为35℃；进样量为2μl；检测波长：0
‑
10min：280nm；10
‑
35min：332nm；(3)供试品溶液的制备：取抗宫炎软胶囊内容物，称定，置于容器中，加入甲醇，称定重量，回流0.8
‑
1.2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；(4)测定方法：将供试品溶液按照步骤(2)提供的色谱条件进样，分别测定去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6个成分的峰面积，根据标准曲线计算，即得。2.根据权利要求1所述的抗宫炎软胶囊的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)是混合对照品溶液的制备：精密称取去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷b、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷，置于容量瓶中，加甲醇溶解，稀释，摇匀，制得混合对照品母液，再用40
‑
60％甲醇稀释，配制成浓度分别为16.0
‑
52.0μg/ml的去甲异波尔定；5.0
‑
175.0μg/ml的盐酸益母草碱；4.0
‑
150.0μg/ml的连翘酯苷b；4.0
‑
146.0μg/ml的毛蕊花糖苷；5.0
‑
168.0μg/ml的金石蚕苷；5.0
‑
175.0μg/ml的异毛蕊花糖苷系列浓度梯度的对照品混合溶液；所述浓度梯度以2
‑
25μg/ml为一个梯度。3.根据权利要求1所述的抗宫炎软胶囊的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱的程序是0
‑
20min，12％a
→
17％a；20～35min，17％a
→
35％a；35～37min，30％a
→
90％a；37～40min，90％a
→
12％a。4.根据权利要求1所述的抗宫炎软胶囊的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)是取1.0g抗宫炎软胶囊内容物，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入50ml50％甲醇，称定重量，回流1h，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
技术总结
本发明公开了一种抗宫炎软胶囊的检测方法。本发明步骤包括：(1)混合对照品溶液的制备；(2)抗宫炎软胶囊UPLC色谱条件；(3)供试品溶液的制备；(4)将供试品溶液按照步骤(2)提供的色谱条件进样，测定6个成分的峰面积，根据标准曲线计算，即得抗宫炎软胶囊的6个成分含量。本发明方法能够保证对去甲异波尔定、盐酸益母草碱、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、金石蚕苷和异毛蕊花糖苷6种抗宫炎软胶囊内容物测定的准确性的优点；并且本发明中抗宫炎软胶囊UPLC指纹图谱也具有快速、简便、稳定、精密度高、稳定性好、重复性好等优点。重复性好等优点。重复性好等优点。


技术研发人员：高秀丽 张敏 王鹏娇 罗伟 张硕 袁敏艳
受保护的技术使用者：贵州医科大学
技术研发日：2021.03.19
技术公布日：2021/6/29